Construction, expression and identification of a recombinant streptococcal protein G

化学合成链球菌蛋白G的C3D基因片段,通过分子生物学的方法对蛋白G(proteinG)的C3[1]片段进行PCR扩增,拼接形成含有两个和三个重复C3片段的重组链球菌蛋白G,C3片段间以链接区D连接,即形成C3DC3和C3DC3DC3的形式,进而克隆到质粒pET21中,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.重组表达的蛋白经过DEAE - Sepharose和IgG- Sepharose纯化,得到纯化的重组蛋白.采用非竞争性酶免疫法对重组蛋白与不同来源IgG的结合常数进行测定,实验结果显示两种重组链球菌蛋白G均可有效地与小鼠、兔及山羊等多种不同来源抗体特异性结合.这些实验结果为下一步研究奠定了基础.     

链球菌蛋白G的构建、重组表达及鉴定

化学合成链球茵蛋白G的C3D基因片段,通过分子生物学的方法对蛋白G（proteinG）的C3片段进行PCR扩增,拼接形成含有两个和三个重复C3片段的重组链球茵蛋白G,C3片段间以链接区D连接,即形成C3DC3和C3DC3DC3的形式,进而克隆到质粒pET21中,在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。重组表达的蛋白经过DEAE—Sepharose和IgG—Sepharose纯化,得到纯化的重组蛋白。采用非竞争性酶免疫法对重组蛋白与不同来源IgG的结合常数进行测定,实验结果显示两种重组链球茵蛋白G均可有效地与小鼠、兔及山羊等多种不同来源抗体特异性结合。这些实验结果为下一步研究奠定了基础。     

3-Fluorotyrosine as a Complementary Probe of Hemoglobin Structure and Dynamics: A (19) F-NMR Study of Synechococcus sp. PCC 7002 GlbN

The hemoglobin from the cyanobacterium Synechococcus sp. PCC 7002 (GlbN) contains three tyrosines (Tyr5, Tyr22, and Tyr53), each of which undergoes a structural rearrangement when the protein binds an exogenous ligand such as cyanide. We explored the use of 3-fluorotyrosine and (19) F-NMR spectroscopy for the characterization of GlbN. Assignment of (19) F resonances in fluorinated GlbN (GlbN*) was achieved with individual Tyr5Phe and Tyr53Phe replacements. We observed marked variations in chemical shift and linewidth reflecting the dependence of structural and dynamic properties on oxidation state, ligation state, and covalent attachment of the heme group. The isoelectronic complexes of ferric GlbN* with cyanide and ferrous GlbN* with carbon monoxide gave contrasting spectra, the latter exhibiting heterogeneity and enhanced internal motions on a microsecond-to-millisecond time scale. The strength of the H-bond network involving Tyr22 (B10) and bound cyanide was tested at high pH. 3-Fluorotyrosine at position 22 had a pK(a) value at least 3 units higher than its intrinsic value, 8.5. In addition, evidence was found for long-range communication among the tyrosine sites. These observations demonstrated the utility of the 3-fluorotyrosine approach to gain insight in hemoglobin properties.     

山东小麦地方品种资源铁和锌含量分析

利用等离子体发射光谱仪,对426份山东小麦地方品种资源进行了铁和锌微量元素含量的测定,摸清了山东省小麦地方品种资源铁和锌含量的分布情况。结果表明,山东小麦地方品种资源铁含量的分布范围为5.2～44.1mg/kg,锌含量的分布范围为6.2～50.4mg/kg。铁含量最高的种质是土耳其和落麦,分别为44.1mg/kg和41.8mg/kg;锌含量最高的种质是大青芒,为50.4mg/kg。利用这些铁锌含量高、子粒商品性及面制品口味好的小麦地方品种作育种亲本,对培育子粒中富含铁锌微量元素的高营养小麦新种质,具有十分重要的意义。     

儿童肺炎链球菌和流感嗜血杆菌耐药及感染特征分析

目的 了解儿童呼吸道感染肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,SP)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,Hi)的分布特征、耐药情况,及耐药菌抗生素间的相互影响,以更合理地指导临床用药.方法 对2009-2010年临床呼吸道感染患儿进行痰、咽拭子或肺泡灌洗液培养分离Hi和SP.因子需求试验鉴定Hi,头孢硝噻酚法检测β-内酰胺酶;奥普托辛和胆汁溶菌试验确认SP.两菌均采用K-B法检测常用对抗生素的耐药性.结果 收集SP 495株,Hi 515株,多见于3岁以下儿童,以呼吸科分离率最高.SP对红霉素、四环素、阿奇霉素、复方新诺明的耐药率分别为98.4％、66.1％、98％和81.6％,其对青霉素敏感性仅为9.5％.Hi有42.7％产生β-内酰胺酶,Hi对氯霉素、复方新诺明、氨苄青霉素、阿奇霉素的耐药率分别为22.1％、21.6％、36.7％和62.7％.与青霉素敏感SP和β-内酰胺酶阴性Hi相比,耐药SP和阳性Hi更易对氯霉素、四环素和复方新诺明耐药.结论 SP和Hi以婴幼儿为主,多见于呼吸科.其耐药情况严峻,青霉素耐药和产β-内酰胺酶菌株会诱导其他抗生素耐药,引发多重耐药.合理使用抗生素以及对两菌的耐药监测应引起高度重视.     

高效液相色谱法测定重组人干扰素α-2b注射液中乙二胺四乙酸二钠含量

目的:利用高效液相色谱(HPLC)法测定重组人干扰素α-2b注射液中EDTA二钠(乙二胺四乙酸二钠)的含量。方法:将EDTA二钠与氯化铁溶液于70℃水浴中反应20 min左右;色谱柱为SunFire C18(250 mm×4.6 mm,5μm,Waters),流动相为5%甲醇+95%0.64 g/L四丁基溴化铵和4.1 g/L三水合乙酸钠混合液,用冰乙酸调pH值至4.0,流速1 mL/min,检测波长254 nm。结果:该测定方法线性范围为0.025~0.5 g/L,线性关系良好(r=0.9997),加样回收率为98.27%(n=9,RSD=2.55%)。结论:本方法准确、快速、可靠,可用于重组人干扰素α-2b注射液中EDTA二钠含量的测定。     

生物体发育过程中细胞膜电位变化与衰老

维持一定的跨质膜电势,关乎到细胞内外物质交换的基本代谢能否顺利进行,因此是所有细胞生存的前提。这是生物的单细胞祖先发展出的有效生存手段,当进化到多细胞生物体后却遇到麻烦。多细胞生物为细胞营群居生活,在物理导体的静电荷分布规律的支配下,个体细胞所携外正内负的净电荷有向细胞集团边缘汇集的趋势,导致多数细胞失去本身所携净电荷,不能维持正常跨膜电势,从而逐渐失去活力。这可能就是多细胞生物衰老的根本原因。衰老是生物体在发育中随细胞数量增多不可避免的自然发生的效应。有证据显示以上描述的电荷分布变化过程的假说是真实存在。植物体中细胞所携电荷的汇集,以及随之发生的带电离子从高浓度区向低浓度区的扩散流失,可导致产生有趣的植物生电的现象,例如大树发电。对植物电压、电的极性、高密度电荷位点分布的测结果与此假说理论完全吻合。     

白血病干细胞自我更新信号通路相关基因表达与白血病复发

除骨髓移植外,以化疗为主的急性白血病治愈率很低,尤其因耐药复发的难治性急性白血病不能治愈的原因是患者体内存在一群具有自我更新能力的白血病干细胞。虽然这些细胞数量极少,但可自我更新,具有很强的增殖潜能,在白血病发生和复发过程中起着关键性作用。白血病干细胞的存在和增殖受细胞表面分子、细胞调控信号通路、细胞自我更新信号通路与骨髓微环境等多因素影响,其中,细胞自我更新信号通路及其相关基因表达在维系白血病干细胞生物学特征方面发挥着重要作用     

丙泊酚靶控输注麻醉维持对老年胃癌根治术患者血流动力学 及苏醒质量的影响

目的:探讨丙泊酚靶控输注麻醉维持对老年胃癌根治术患者血流动力学以及术后苏醒质量的影响.方法:ASAI～Ⅱ级行胃癌根治术的60例患者随机分为A组和B组.两组使用靶控输注麻醉诱导,起始血浆靶浓度为1μg·ml-1 1％丙泊酚泵注,A组采用靶控输注丙泊酚维持麻醉,B组采用七氟烷吸入维持麻醉.记录麻醉前(T0)、切皮后5min(T1)、手术开始30 rmin(T2)、手术开始60min(T3)、停药时(T4)、出室时(T5)各时间点的血流动力学指标的变化.记录患者术后睁眼时间、拔管时间、定向力恢复时间.结果:两组血流动力学指标(SBP、DBP、HR)在T1～T3时点迅速下降,与T0比较均有显著性差异(P＜0.05),T4时血流动力学指标(SBP、DBP、HR)开始上升,至T5时基本达到基线水平,与T0比较差异无统计学意义(P＞0.05).血流动力学指标(SBP、DBP、HR)在组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).两组术后睁眼时间比较差异无统计学意义(P＞0.05),A组术后拔管时间、定向力恢复时间均低于B组,相比较有显著性差异(P＜0.05).结论:丙泊酚靶控输注麻醉维持对老年胃癌根治术患者血流动力学影响小,患者术后苏醒质量高,是老年胃癌根治术患者理想的麻醉方法.     

Apelin 通过调节ROS 水平抑制TNF-α 诱导的HepG2 细胞凋亡

目的:探讨apelin在肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的肝细胞凋亡中的作用及可能机制。方法:PCR检测HepG2细胞和原代小鼠肝细胞中APJ受体的表达;采用Hoechst 33342染色检测TNF-α诱导的HepG2细胞凋亡;用活性氧(ROS)检测试剂盒结合流式细胞术测定细胞内ROS水平;通过Western blot检测信号分子JNK的磷酸化水平;比较给予apelin处理对上述指标的影响。结果:HepG2细胞和原代小鼠肝细胞均表达APJ受体;apelin可抑制TNF-α导致的细胞内ROS生成增多和JNK磷酸化水平升高并减少TNF-α诱导的HepG2细胞凋亡。结论:Apelin可能通过拮抗TNF-α诱导的细胞内ROS水平升高,使JNK信号失活,从而抑制HepG2细胞凋亡。