Fluorescent labeling for clonal selection of Marc 145 cells secreting high levels of recombinant protein PBD-1

Despite the powerful impact gene expression markers like the green fluorescent protein (GFP) or enhanced GFP (EGFP) exert on linking the expression of recombinant protein for selection of high producers in recent years, there is still a strong incentive to develop more economical and efficient methods for isolating mammalian cell clones secreting high levels of recombinant proteins. Here we present a new method based on the co-expression of EGFP that allows clonal selection in standard 96-well cell culture plates. The genes encoding the EGFP protein and the related protein are linked by an internal ribosome entry site and thus are transcribed into the same mRNA in an independent translation process. Since both proteins arise from a common mRNA, the EGFP expression level correlates with the expression level of the therapeutic protein in each clone. By expressing recombinant porcine β-defensin 1 in Marc 145 cells, we demonstrate the robustness and performance of this technique. The method can be served as an alternative to identify high-producer clones with various cell sorting methods.     

Five New Guaiane Sesquiterpenes from the Endophytic Fungus Xylaria sp. YM 311647 of Azadirachta indica

Five new guaiane sesquiterpenes, 1 – 5 , were isolated from the culture broth of the endophytic fungus Xylaria sp. YM 311647, isolated from Azadirachta indica A. Juss . The structures of these compounds were elucidated on the basis of spectroscopic analyses, and their inhibitory activities against five pathogenic fungi were evaluated. All guaiane sesquiterpenes showed moderate or weak antifungal activities in a broth microdilution assay.     

白背飞虱中的Wolbachia和Cardinium双重感染特性

为了明确自然种群白背飞虱Sogatella furcifera中Wolbachia和Cardinium的感染情况以及Wolbachia与其特有的WO噬菌体之间的关系, 以采自中国7个省区9个地点的白背飞虱为研究材料, 运用PCR检测的方法调查了Wolbachia, Cardinium以及WO噬菌体在各飞虱种群中的感染率和组织分布特点。结果表明： 白背飞虱广泛双重感染Wolbachia和Cardinium, 并且都表现出很高的感染率。白背飞虱各种群Cardinium的感染率几乎均为100%; Wolbachia的感染率也较高, 但雌雄虫感染率差异较大, 雌虫的感染率几乎均为100％, 而雄虫的感染率从22.2%~95.0%不等。另外, 通过不同DNA聚合酶、 不同提取方法的对比, 揭示了DNA粗提样品在基于PCR技术的胞内共生菌检测中的不足之处。对白背飞虱头部、 胸部、 腹部、 足和翅5个不同部位组织的检测结果表明, 不仅在含有生殖组织的腹部有这两类共生菌的感染, 在其他非生殖组织中同样也感染了这两类共生菌; 虽然Wolbachia和Cardinium在寄主的各个组织中均有分布, 但是两者在白背飞虱成虫（尤其是雄虫）阶段的动态变化有明显的差异。进一步对Wolbachia宿主特异性WO噬菌体的检测结果表明, 自然种群雄虫中Wolbachia的感染率与不感染个体中WO噬菌体的比率呈明显的负相关。因此推测, 雄虫中Wolbachia感染率相对较低的原因可能是由于Wolbachia基因组中溶原性的WO噬菌体受到某种因素的诱导已转化为裂解性噬菌体。研究结果为进一步揭示Wolbachia和Cardinium双重感染条件下对寄主的生殖调控作用及其机制、 垂直传播规律、 两者之间的相互关系以及进一步的应用研究等方面提供了重要的理论基础。     

盐胁迫下大豆根组织定量PCR分析中内参基因的选择

实时荧光定量PCR已广泛用于基因表达的分析, 适当的内参基因选择是获得准确分析结果的关键。在大豆(Glycine max)分子生物学研究中, 逆境响应基因和microRNA (miRNA)表达的内参辅助检测基因均有哪些目前尚不清楚。该研究选用不同盐梯度和时间点组合处理的大豆根组织为材料, 对已报道的其它条件下表达相对稳定的内参基因(ACT、ACT2/7、CYP2、ELF1A、ELF1B、F-Box、TUA和UBC2)以及miRNA内参基因(U6、miR1515a、miR1520c、miR1520d、miR171a和miR171b)的表达情况进行了全面检测; 并采用Δ-Ct、Bestkeeper、NormFinder和Genorm四种方法对检测结果进行了综合分析, 发现ELF1B和CYP2适合作为大豆根系盐胁迫响应基因研究的内参基因, miR1515a和U6适合作为盐胁迫下大豆根组织miRNA研究的内参。上述研究结果为大豆盐胁迫响应基因和miRNA表达及其进一步的功能研究奠定了基础。     

生长素输出载体PIN蛋白的质膜定位机制

生长素浓度梯度影响植物个体及其器官的形态建成, 而PIN (PIN-FORMED)蛋白决定组织中的生长素流向。细胞质膜的脂筏特性是PIN蛋白在质膜上不均匀分布的基础。与此同时, 网格蛋白介导的胞吞、蛋白质的磷酸化/去磷酸化甚至基因的转录调控影响PIN蛋白的这种极性定位。另外, 在多细胞植物起源之时, PIN蛋白可能经历了从内质网膜定位到质膜定位的转变。     

植物激素相关核酸和蛋白质二级数据库的构建与应用

以NCBI维护的一级数据库为数据源建立植物激素相关核酸和蛋白质二级数据库。将该二级数据库设计为基因、蛋白质和文献三部分, 编写软件从上述数据源中采集数据, 并以XML作为中间格式保存, 通过解析提交到二级数据库中并集成部分生物信息学工具软件, 初步实现了数据检索、统计分析、基于Web的本地化BLAST同源序列检索、序列的自动拼接以及蛋白质结构和功能位点的分析等功能。该二级数据库的构建为植物激素作用分子机理研究提供了高针对性的植物激素数据源和生物信息学辅助工具。     

一种快速、无损大豆种子DNA提取方法的建立和应用

基因分型是进行植物基因功能的遗传分析和分子标记辅助育种的重要环节。该研究以大豆(Glycine max)成熟种子为材料, 建立了通过钻孔采集样品、快速提取DNA进行基因型鉴定的方法。用此方法, 一个熟练的工作人员可以在1个小时内完成120个样品的采集和DNA提取; 同时种子钻孔取样后, 不会对大豆种子的萌发造成影响。利用该方法获得的DNA可满足PCR扩增的要求。实验重复性好, 成功率在98%以上。这种快速且无损的大豆种子基因型鉴定方法可以用于鉴定杂交种子、品种纯度以及遗传分析等研究工作。     

絮凝基因的克隆和在工业啤酒酵母菌株中表达

The partial genomic library of Saccharomyce cerevisiae FL189 possessing strong flocculation ability was constructed using Yeast-E.coli shuttle plasmid YCp50 as vector.Recombinant plasmid containing flocculation gene was obtained by screening the growth of transformants on the selective medium and measurement flocculation,designated as pCF1.pCF1 was introduced into industrial yeast strain PJ208-5-15.Six transformants PJ208-5-15-1(pCF1)～PJ208-5-15-6(pCF1)possessing strong flocculation ability were obtained.Th…     

USP31 acetylation at Lys1264 is essential for its activity and cervical cancer cell growth

Ubiquitin-specific protease 31 (USP31) is a member of deubiquitinase family that is involved in nuclear factor-κB activation and sarcomagenesis.However,little i...