全文获取类型
收费全文 | 60141篇 |
免费 | 5098篇 |
国内免费 | 6950篇 |
出版年
2024年 | 129篇 |
2023年 | 760篇 |
2022年 | 1791篇 |
2021年 | 3159篇 |
2020年 | 2212篇 |
2019年 | 2810篇 |
2018年 | 2582篇 |
2017年 | 2004篇 |
2016年 | 2739篇 |
2015年 | 3963篇 |
2014年 | 4770篇 |
2013年 | 4903篇 |
2012年 | 5891篇 |
2011年 | 5243篇 |
2010年 | 3329篇 |
2009年 | 2958篇 |
2008年 | 3359篇 |
2007年 | 2914篇 |
2006年 | 2565篇 |
2005年 | 2090篇 |
2004年 | 1757篇 |
2003年 | 1636篇 |
2002年 | 1395篇 |
2001年 | 1041篇 |
2000年 | 925篇 |
1999年 | 831篇 |
1998年 | 531篇 |
1997年 | 513篇 |
1996年 | 472篇 |
1995年 | 386篇 |
1994年 | 332篇 |
1993年 | 271篇 |
1992年 | 321篇 |
1991年 | 258篇 |
1990年 | 222篇 |
1989年 | 166篇 |
1988年 | 146篇 |
1987年 | 113篇 |
1986年 | 97篇 |
1985年 | 122篇 |
1984年 | 71篇 |
1983年 | 62篇 |
1982年 | 48篇 |
1981年 | 31篇 |
1980年 | 19篇 |
1979年 | 28篇 |
1978年 | 21篇 |
1974年 | 20篇 |
1973年 | 18篇 |
1971年 | 17篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 125 毫秒
241.
以海岛棉无菌苗的胚根、下胚轴和子叶作外植体,对这3种器官在离体培养中愈伤组织诱导、分化以及影响因素进行了研究。结果表明:下胚轴作外植体效果最好,愈伤组织生长块、质地好,有芽的分化,进而可再生出植株。胚根效果很差,愈伤组织产生很少而且很易褐化死亡。子叶效果不好,愈伤组织少、生长慢无分化。外源激素中2.4-D与KT配合使用效果好,愈伤组织可以分化。无菌苗生长状态及培养基中非激素成分对愈伤组织诱导和分化 相似文献
242.
PCR法快速检测临床标本中结核杆菌DNA 总被引:2,自引:0,他引:2
应用聚合酶链反应(PCR)快速检测临床标本(脑脊液、胸水、腹水、血、痰液)中的结核杆菌DNA,特异性扩增片段123bp,为结核杆菌的特异性重复序列IS6110部分基因。PCR检测人型结核杆菌的敏感性达10fgDNA。临床标本的PCR检测阳性率(23.3%)明显高于抗酸染色涂片(2.9%)和细菌培养(5.7%)的阳性率(P〈0.05)。通过设立对照系统及对扩增产物酶切分析,表明该法无假阴性结果(特异 相似文献
243.
介绍用交流示波极谱滴定法测混合氨基酸的含量。在KCl底液中,利用HCHO将-NH2封闭,用KOH标准液滴定,HCHO同时做指示剂,以极谱图形的敏锐变化指示终点的到过,测定结果准确。 相似文献
244.
245.
精制白喉毒素加0.02Mβ—丙氨酸,再加甲醛溶液经适当的时间解毒,即可转化为完全类毒化且无毒性逆转的精制白喉类毒素。此精白类的脱毒试验、毒性逆转试验、安全试验及效力试验均符合《中国生物制品规程》要求。在脱毒过程中絮状单位的损失明显低于单纯甲醛脱毒者,纯度亦相应得到了提高。 相似文献
246.
本实验研究了青霉素和NAA与6-BA配合对离体草莓器官建成以及体内过氧化物同工酶的影响。结果表明:青霉素促进不定根的分化,但抑制不定根的伸长和不定芽的分化,并且不同程度地影响器官建成过程中过氧化和抽工酶的谱带和活性。青霉素与植物激素一样,参与了植物体内的生理代谢而引起植物器官建成。 相似文献
247.
利用人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)cDNA3′端非翻译区(3′-UTR)中存在的DraⅠ酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除3′-UTR不同长度,构建了四种hG-CSFcDNA瞬时重组表达质粒。转染COS-7细胞后,生物活性测定结果提示,hG-CSFcDNA3′-UTR对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子TGA下游的65bp范围内,3′-UTR对hG-CSFcDNA表达的影响与转录水平的差别有一定关系。 相似文献
248.
大鼠大脑皮层中钙调神经磷酸酶活力的时空变化 总被引:1,自引:0,他引:1
以PNPP为底物测定了超离心制备的大鼠出生后早期和成年大脑皮层亚细胞各组分中钙调神经磷酸酶的活力。实验结果表明:(l)钙调神经磷酸酶活力广泛地存在于胞液和突触部分,并且各亚细胞组分有明显差异。成年大鼠大脑皮层中CaN活力相对最高水平是在突触体,突触质,胞液,重的和轻的突触膜部分。(2)大鼠大脑皮层突触体中CaN活力在出生后第2周和第3周出现高峰的平台期,这与突触发生的高峰期是一致的。在胞液和重的突触膜中CaN活力最高水平是在出生后的第7d,而在突触质和轻的突触膜中是在第20d。总之,这些发现证实,在脑发育期间,CaN活力是依照区域和时间性控制的,提示CaN可能参与了突触功能作用。 相似文献
249.
We describe a new immunoassay which combines an immunosorbent assay, Immunogold silver staining and epipolarization microscopy. Our new assay procedure features multiple samples on a single microscope slide, and high sensitivity of epipolarization microscope for detection of silver-enhanced colloidal gold as a final immunoassay product. We call the new immunoassay “on slide immunogold assay” (OSIGA). This new method uses biotinylated antibody and streptavidin-gold reaction with silver enhancement technique. With OSIGA it is possible to investigate 30 samples on a single microscopic slide. Our preliminary studies used 10-20 μ1 samples and detected nanogram quantities of a standardized protein solution. Unlike enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), which has a limited time for reading the final color products, the OSIGA specimens can be dried or resin mounted for longer storage and future reference. 相似文献
250.
Construction of a novel bifunctional biogenic amine receptor by two point mutations of the H2-histamine receptor. 下载免费PDF全文
J. DelValle I. Gantz L. Wang Y. J. Guo G. Munzert T. Tashiro Y. Konda T. Yamada 《Molecular medicine (Cambridge, Mass.)》1995,1(3):280-286
BACKGROUND: H2-histamine receptors mediate a wide range of physiological functions extending from stimulation of gastric acid secretion to induction of human promyelocyte differentiation. We have previously cloned the H2-histamine receptor gene and noted that only three amino acids on the receptor were sufficient to define its specificity and selectivity. Despite only modest overall amino acid homology (34% amino acid identity and 57.5% similarity) between the H2-histamine receptor and the receptor for another monoamine, the beta 2-adrenergic receptor, there is remarkable similarity at their critical ligand binding sites. We hypothesized that, if the specificity and selectivity of both receptors are invested in just three amino acids, it should be possible to convert one of the receptors into one that recognizes the ligand of the other by simple mutations at only one or two sites. MATERIAL AND METHODS: We explored the effect of two single mutations in the fifth transmembrane domain of the H2-histamine receptor, which encompasses the sites that determine H2 selectivity. The canine H2 receptor gene was mutated at Asp186 and Gly187 (Asp186 to Ala186 and Gly187 to Ser187) by oligonuceotide directed mutagenesis. The coding region of both the wild-type and mutated H2 receptors was subcloned into the eukaryotic expression vector, CMVneo, and stably transfected into Hepa cells and L cells. The biological activity of histamine and epinephrine on the expressed receptor was examined by measurement of cellular cAMP production and inositol trisphosphate formation. RESULTS: Hepa cells transfected with the Ala186-Ser187 mutant H2 receptor demonstrated a biphasic rise in cAMP in response to epinephrine with an early phase (ED50 approximately 10(-11) M) that could be inhibited by both propranolol and cimetidine. Epinephrine also induced IP3 generation in the same cells, a biological response that is characteristic of activation of the wild-type H2 but not of the beta-adrenergic receptor. L cells transfected with the Ala186-Ser187 mutant H2 receptor also responded to epinephrine in a cimetidine and propranolol inhibitable manner. CONCLUSIONS: We converted the H2-histamine receptor into a bifunctional one that has characteristics of both histamine and adrenergic receptors by two simple mutations. These results support the hypothesis that ligand specificity is determined by only a few key points on a receptor regardless of the structure of the remainder of the molecule. Our studies have important implications on the design of pharmacological agents targeted for action at physiological receptors. 相似文献