DNA分子量标准制备技术：方法与进展

DNA分子量标准是一组分子量大小已知的DNA片段混合物,用于指示核酸电泳中未知样品的分子量大小,从而帮助实验人员判断DNA样品的性质。因而DNA分子量标准成为目前分子生物学和基因工程领域不可或缺的一种电泳耗材。综述了目前各种DNA分子量标准产品的制备方法和技术原理及近年来该领域的一些技术进展情况。     

牛α1-AT基因5’侧翼区新SNPS的鉴定及其与产奶性状的相关性

以中国荷斯坦奶牛(Chinese Holstein dairy cattle)为对象,以α1 抗胰蛋白酶基因(α1-AT)为候选基因,扩增5′侧翼区668 bp和999 bp的片段并进行测序.首次发现,在+3 142 bp处P1和+4 408 bp处P2分别发生C-T、T-C突变.随后采用PCR-RFLP方法对随机采自6个牛场,共计294头牛进行了检测,遗传变异和产奶性状分析结果显示：2个位点的等位基因在群体中都有分布,且处于中度多态.P1位点A和B等位基因的频率分别为50.34%和49.66%; AA、AB和BB基因型频率分别为23.81%、53.06%和23.13%;P2位点E和F等位基因的频率分别为30.61%和69.39%, EE、EF和FF基因型频率分别为11.90%、37.41%和50.68%. χ2适合性检验表明,该群体在P1位点的突变达到Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）,在P2位点未达到平衡.基因与产奶性状关联分析表明,AB基因型个体产奶量与脂蛋比显著高于AA基因型个体(P＜0.05);FF基因型个体乳蛋白率显著高于EF基因型个体(P＜0.05);9种单倍型组合与乳脂率、乳蛋白率、体细胞数、产奶量及脂蛋比均存在不同程度相关性.     

高效液相色谱法同时测定儿童血清中视黄醇、25-OH-维生素D3和α-生育酚浓度

目的:建立能同时测定儿童血清中视黄醇、25-OH-维生素D3和a-生育酚的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法.方法:以无水乙醇沉淀蛋白质后,血清中的脂溶性维生素用正己烷提取,吹氮气浓缩后用HPLC测定.结果:视黄醇、25-OH-维生素D3和a-生育酚的线性范围分别为0.015-500μg/mL、0.012-500μg/mL和0.1-500 μg/mL;检出限分别为0.015μg/mL、0.012μg/mL和0.1μg/mL;相对标准偏差分别为0.98%、2.09%和4.63%.三种脂溶性维生素各个浓度的提取回收率均大于80%,方法回收率均大于90%.结论:本法简便快速,适于血清样品中视黄醇、25-OH-维生素D3和a-生育酚三种脂溶性维生素的同时测定.     

家兔肾下腹主动脉瘤模型的建立

目的:建立简易、稳定性高的家兔肾下腹主动脉瘤模型.方法:选取健康雄性家兔32只设立盐水灌注对照,采用弹力蛋白酶灌注肾下腹主动脉的方法进行模型制作,利用不同染色方法,分别于术后2天,7天取标本观察灌注段腹主动脉的成瘤情况,形态学变化及病理改变.结果:8只弹力蛋白酶灌注术后7天组有6只存活,腹主动脉直径扩张均大于100%,与各对照组相比差异有统计学意义.病理改变体现为炎性细胞浸润,血管中层弹力组织破坏.结论:家免腹主动脉瘤模型操作简易,病理特征稳定,建模成功率较高.     

CPAP治疗对OSAHS患者血浆TNF-α水平的影响及临床意义的研究

目的:探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者血浆TNF-α水平的变化,以及CPAP治疗的影响和临床意义.方法:48例多导睡眠图确诊的男性OSAHS患者,按照呼吸暂停低通气指数(AHI)分为轻度OSAHS 组(n=15),中度OSAHS组(n=16),重度OSAHS组(n=17).16例年龄和体重指数(BMI)匹配的健康男性作为对照组,其中13例中重度OSAHS患者进行持续气道正压通气(CPAP)治疗.ELISA法测定血浆ZNF-α浓度.对OSAHS患者血浆TNF-α与睡眠期AHI和最低脉氧饱和度(miniSpO2)进行Pearson相关性分析.结果:轻度、中度和重度OSAHS组TNF-α浓度分别为(11.49±1.32 pg/ml)、(13.29±1.73pg/ml)、(14.74±2.72pg/ml),均显著高于正常对照组(9.29±1.74pg/ml).TNF-α水平随OSAHS程度加重而增高.Pearson相关性分析显示OSAHS患者TNF-α浓度与呼吸暂停低通气指数(AHI)呈显著正相关(r=0.714,P<0.001),与miniSpO2间呈显著负相关(r=0.601,P<0.001).CPAP治疗后OSAHS患者血浆TNF-α水平显著降低(P<0.001).结论:CPAP治疗可降低或防止OSAHS患者的动脉硬化进展.     

核定位信号肽提高核糖体区打靶载体转染效率的研究

核糖体区打靶载体(10～14 kb)是中南大学医学遗传学国家重点实验室构建的一种具有定点整合能力的非病毒载体,具有安全性好及长期稳定表达的特点,但是较低的转染率成为其应用于临床的主要障碍．核定位信号肽可以促进非病毒载体进入细胞核,从而提高其转染效率．但是核定位信号肽提高外源基因表达的能力却严重受到其与DNA偶联方式及偶联剂的影响．采用偶联剂SPB可以通过静电作用将核糖体区打靶载体与SV40 核定位信号肽有效结合,并且可以防止其被DNase降解．应用聚乙烯亚胺转染人原代皮肤成纤维细胞后,激光共聚焦显微镜观察显示,核定位信号肽可以在60 min内携带12 kb的质粒DNA进入细胞核．转染后48 h,流式细胞仪检测GFP表达,结果显示转染率提高了4～5倍．聚乙烯亚胺是一种毒性小,而且价格低廉的高分子转染试剂,广泛被应用于体内基因治疗的研究中,上述研究将会促进核糖体区打靶载体在临床基因治疗中的应用．     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在小鼠卵母细胞成熟过程中的表达及作用

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种Ser/Thr激酶,属于PIKK超家族,对调节细胞周期、蛋白质合成等具有重要作用,是细胞生长、增殖、分化、凋亡的中心调控器,但在哺乳动物卵母细胞中的研究还未见报道．以小鼠卵母细胞为研究对象,采用免疫荧光为主要研究方法,对mTOR在小鼠卵母细胞中的表达进行研究,并通过mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素( rapamycin,RAPA )对卵母细胞进行处理,对mTOR在卵母细胞成熟过程中的作用进行研究．结果显示：小鼠卵母细胞成熟过程中,生发泡( germinal vesicle,GV )期mTOR主要集中在核膜处表达,生发泡破裂 ( germinal vesicle breakdown,GVBD )后mTOR伴随染色体分布,第二次减数分裂中期( second metaphase,MⅡ期 ) mTOR伴随纺锤体分布;雷帕霉素处理后,小鼠卵母细胞的成熟受到抑制,且这种抑制作用具有浓度依赖性,同时其mTOR的表达部位和形态也发生变化．研究表明,在小鼠卵母细胞成熟过程中,mTOR在各个时期的表达及分布具有阶段特异性,并对小鼠卵母细胞GVBD的发生和第一极体的排放都具有重要作用．     

蛋白酪氨酸激酶抑制剂Genistein抑制肺癌细胞A549体外侵袭作用的研究

观察蛋白酪氨酸激酶抑制剂Genistein对人肺腺癌细胞株A549细胞侵袭能力的影响,探讨Genistein抑制肺癌细胞侵袭的可能机制。以不同浓度Genistein（20μmol/L和40μmol/L）作用于A549细胞3 d后,分别用基质胶侵袭模型、黏附基质分析、Transwell小室趋化运动模型、细胞骨架蛋白染色及RT-PCR法来研究药物处理后细胞侵袭、黏附、运动、聚合型骨架蛋白（F-actin）以及基质金属蛋白酶基因表达的改变。经Genistein处理后,A549细胞的F-actin聚合减少,侵袭能力明显下降,趋化运动能力降低,基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP-1）基因相对表达量增加,但黏附率没有降低。Genistein可降低肺癌细胞的迁移、侵袭能力。F-actin聚合减少,TIMP-1的相对表达量增加,可能是Genistein抑制肺癌细胞侵袭的机制之一。     

末次冰期以来中国海区浮游有孔虫Pulleniatina obliquiloculata含量变化的地层学意义

西北太平洋尤其是中国海区末次冰期旋回中浮游有孔虫Pulleniatina obliquiloculata含量变化研究是近年来最重要的古海洋学内容之一.作者综合分析了中国及邻近海区具有可靠测年地层的深海沉积物柱状样中P.obliquiloculata含量变化,探讨其含量低值事件(PME)的生物地层学意义.末次冰期以来P.obliquiloculata含量变化在中国海区呈现两种变化模式:一是以东海及南海北部为代表的冰期含量低、间冰期含量高的特点;另一种则是南海南部的冰期含量高、间冰期含量低的现象.高分辨率地层记录显示,在这种冰期/间冰期总体变化趋势基础上,我国东海、南海和黑潮源区等广泛存在晚全新世～4 300-2 800 cal yr BP P.obliquiloculata含量低值,但以南海北部与东海冲绳海槽最为明显;而南海南部P.obliquiloculata含量还在冰消期(～16.5-15 cal kyr BP)有另一特征的低含量阶段.因而,末次冰期旋回中国海区P.obliquiloculata含量变化可以作为区域性地层划分和对比的标志.尽管如此,由于黑潮分支水团的影响,冲绳海槽中部和北部部分海域,在末次冰期与PME期间,P.obliquiloculata虽然含量相对较低,但仍可保持3%-5%以上,而非多数站位PME事件中的特征性零含量.研究表明PME事件主要由次表层海水的温度降低、温跃层变浅、上部水体温度梯度增加等引起,与表层海水无关,但引起这些海洋环境变化的原因尚不清楚.     

极地雪藻在不同培养基中生长和虾青素累积的研究

在常温（23℃）和低温（10℃）条件下,用BBM、Bold 1NV、TAP和MCM四种培养基对极地雪藻进行培养。通过对生长速率、细胞数、A535值及虾青素累积量的测定,比较不同培养基、不同培养条件对极地雪藻的生长与虾青素累积的影响。结果表明,低温有利于极地雪藻的生长和虾青素的累积,BBM培养基比其它培养基更适合极地雪藻的生长,10℃时条件下其生长速率最高,培养14d细胞数可达到3．53&#215;10^6／mL;在高光强条件下培养15d后用BBM培养基培养的极地雪藻细胞的虾青素累积为其它培养基的2．21-3．59倍。