扩增和纯化携带肌浆网钙ATP酶重组腺病毒的实验方法

目的:通过扩增和纯化rAd.SERCA2a,为转SERCA2a基因研究提供实验基础,并为建立基因库提供稳定可靠的实验方法.方法:用100μL 1.9×10<'12>pfu/ml rAd.SERCA2a感染HEK293细胞,出现细胞病变效应时收获细胞,经物理反复冻融方法及两步氯化铯超速离心方法获得纯化的rAd.SERCA2a,紫外分光光度计比色法测定病毒DNA质粒数.结果:rAd.SERCA2a成功在HEK293细胞表达呈现绿色荧光,纯化的rAd-SERCA2a-GFP DNA质粒数为1.3±0.58×10<'12>pfu/mL,OD<,260>/OD<,280>比值为1.57±0.49(n=50).结论:建立了稳定可靠的借助HEK293细胞培养扩增rAd.SERCA2a的实验方法,纯化后的高效价的SERCA2a基因的重组腺病毒可直接用于心力衰竭的实验研究,对重组腺病毒携带其他基因的扩增与提纯方法也具有一定的参考价值.     

CD105shRNA对激光诱导的脉络膜新生血管的干预作用及其机制

目的：观察CD105shRNA对激光诱导的大鼠脉络膜新生血管的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法：40只BN大鼠单眼采用半导体激光建立CNV模型。随机取20只大鼠于建模后1天使用Pgenesil-eng2转染大鼠视网膜和脉络膜作为实验组。在建模后第14天行FFA检查,观察实验组与对照组视网膜激光斑的渗漏情况。各取5只实验组和5只对照组大鼠,行脉络膜铺片,检测并比较脉络膜新生血管渗漏面积。另32只BN大鼠任取一眼建立CNV模型,其中任取20只大鼠于建模后次日进行Pgen-esil—eag2转染,作为实验组。12只建模眼作为对照组,未建模眼作为空白对照组。于基因转染后1w,2w,3w和4w各取5只实验组大鼠和3只对照组大鼠眼球,获取每个时间点实验组、对照组和空白对照组的脉络膜组织。检测各组每个时间点CDl05和VEGF在mRNA水平的表达。结果：FFA显示光凝后第14天时,对照组的渗漏率为63．2％,实验组为24．6％。实验组的BN大鼠眼底渗漏点数较对照组少,渗漏强度较弱。两组间比较有显著性差异。脉络膜铺片结果显示：2周时对照组大鼠的CNV面积为（31．22±1．46）×10^3μm2,实验组大鼠的CNV渗漏面积为（14．46±0．82）×10^3μm2,两组间比较有显著性差异。RT—PCR结果显示：实验组VEGFmRNA及CDl05mRNA的表达变化规律与对照组相似,但各个时间点的表达量较对照组均明显下降,其中实验组VEGFmRNA于2w时的表达约为对照组的36．7％;实验组CD105mRNA在第2w时约为对照组的21．68％。结论：通过沉默CD105基因的表达可以抑制大鼠CNV的生成,下调VEGF的表达可能是其作用机制之一。CD105基因有望成为CNV的基础研究热点和临床治疗的新靶点。     

促卵泡激素结合片段通过P13K／Akt—cyclinD1通路抑制卵巢癌细胞增殖活性

目的：研究促卵泡激素（FSH）结合片段对卵巢上皮性细胞癌细胞株hey增殖活性的影响。方法：应用卵巢上皮性细胞癌细胞株hey作为实验对象,分别加入FSH、FSH结合片段、FSH＋FSH结合片段。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测卵巢癌hey细胞的生长状况,Westernblot检测cyclinD1、Akt、pAkt分子的表达。结果：FSH对卵巢癌hey细胞的生长有明显的促进作用,细胞生长活性提高21％。FSH结合片段对卵巢癌细胞的生长有明显抑制作用,对细胞平均抑制率为22％,且能下调cyclinD1的表达,在2．5×10^-9Mol／L达70％。FSH结合片段对FSH有竞争抑制作用,细胞抑制率为18％,能抑制FSH上调cyclinD1的作用,抑制率为61％。FSH能上调pAkt的表达,对Akt的袁达没有明显影响,在40mlU／ml的浓度时pAkt／Akt上调率达224％。FSH结合片段对Akt的表达没有明显影响,但能明显下调pAkt的表达,且呈时间依赖性（在15分钟时达66％）和剂量依赖性（在2．5×10^-9Mol／L达31％）。FSH结合片段能抑制FSH上调pAkt的作用,抑制率为80％。结论：FSH结合片段可通过抑制FSH诱导的P13FdAkt-cycl—inD1信号通路进而抑制上皮性卵巢癌hey细胞的增殖活性,     

肿瘤标志物联合检测在乳腺癌早期诊断中的应用

目的：探讨肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、糖链抗原19-9（CA19-9）、糖链抗原15-3（CA15-3）联合检测在乳腺癌早期诊断中的应用价值。方法：检测87例乳腺癌患者,55例乳腺良性肿瘤患者和35例健康人血清中CEA、CA19-9、CA153等肿瘤标志物的水平及3种标志物不同组合对乳腺癌的阳性检出率。结果：乳腺癌患者3种肿瘤标志物显著高于正常对照组及乳腺良性肿瘤组（P〈0.01）。3项标志物不同组合对不同分期乳腺癌检出的敏感性均高于单项标志物。其中CEA＋CA199＋CA153组合的检出敏感性较其他组合均高,特别是对早期患者检出率明显提高。结论：CEA＋CA199＋CA153联合检测能提高乳腺癌的早期诊断率。     

围体外循环期血小板保护的研究进展

在体外循环过程中,血小板可经各种途径被激活,导致α-颗粒释放,发生粘附、聚集、收缩、释放等反应,导致术后血小板数量和质量的下降。通过在围体外循环期使用某些药物可对血小板进行功能性保护,而血小板分离技术可使血小板避免体外循环的打击,得到数量和功能的双重保护。本文将就体外循环期间血小板保护的研究进展作一综述。     

乳液法静电纺丝PLGA组织工程缓释纤维的研究

目的：研究Dextran对蛋白药物的释放影响。方法：将模型蛋白BSA溶解于多糖溶液中,通过W/O乳液法静电纺丝制备缓释纤维。采用MicroBCA法测定该纤维体外释放行为,采用SEC-HPLC检测制备前后蛋白的聚集程度,并与不含多糖的BSA纤维做对照。结果：添加Dextran以后蛋白的包封率由52.68%提高到63.92%,第一天突释不大于药物载量的15%,对蛋白单体的保持达到85%以上。结论：Dextran可以改善一般组织工程纤维中蛋白药物的释放,提高蛋白药物在制剂、贮存、释放过程中的稳定性,增加纤维的载药量。     

Bacillus amyloliquefaciens ES-2发酵产抗菌脂肽消泡剂的筛选及脂肽的提取和纯化

将大豆油、有机硅消泡剂和聚醚类消泡剂3种消泡剂分别用于Bacillus amyloliquefaciens ES-2抗菌脂肽发酵,研究表明大豆油既可以实现消泡,又有利于抗菌脂肽的发酵,使其产量达到了2497.67mg/L。经过提取得到纯度为55.68%的产品,提取率达到88.72%。此外还比较了不同大孔树脂对抗菌脂肽吸附和解吸附效果,发现大孔树脂X-5最适合抗菌脂肽的纯化。纯化的工艺参数为:上样浓度14.4mg/ml、上样速率1ml/min,洗脱速率2ml/min、洗脱剂用量2.5BV,产品的回收率达90.01%,纯度达74.4%。     

健康宣教在小儿狭窄性腱鞘炎围手术期应用价值

目的：对手术疗法治疗狭窄性腱鞘炎的小儿患者采取系统的整体健康宣教,使得患儿疗程缩短,治愈率高,复发率降至最低,功能康复效果良好,提高护理质量。方法：在保守治疗无效的情况下,手术疗法切除部分狭窄腱鞘,围手术期实施系统的全面的功能康复训练及宣教。结果：54例患儿完全治愈,随访3~26个月,无复发及并发症,愈后功能良好。结论：细致、周密的做好围手术期对家长及患儿的双重健康宣教工作,使得护患关系融洽,患者自护能力大大加强,治疗及护理效果满意。     

一氧化氮、人乳头瘤病毒和宫颈癌之间相互关系的研究进展

人乳头瘤病毒感染是宫颈癌发生的重要始动原因,从HPV感染到宫颈癌发生,需要许多共刺激因子的参与。这些共刺激因子均可引起宫颈局部一氧化氮浓度的增高。而一氧化氮既可影响HPV的转录和翻译,又在肿瘤发生过程中具有重要调节作用。深入研究一氧化氮、人乳头瘤病毒感染及宫颈癌之间的关系,可为宫颈癌的防治提供新的重要理论基础和药物研制实验平台,通过使用一氧化氮合酶抑制剂降低宫颈局部NO浓度将为全面有效防治宫颈癌带来新的希望。     

铅锌镉联合染毒及营养干预对大鼠血液系统的影响研究

目的:了解铅锌镉联合染毒对大鼠血液系统的影响及营养干预对其损伤的修复作用。方法:选择SPF级初断乳Wistar大鼠72只,随机分为对照组、染毒组和干预组,分别采用生理盐水、铅锌镉联合染毒液及染毒后以营养干预液灌胃28天和56天之后,检测其血液系统中五元素和血细胞的指标。结果:染毒组较对照组大鼠血铜、血锌含量高,血钙含量低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);染毒组血铜含量高于干预组,血钙含量低于干预组,差异均有统计学意义(P<0.05);干预组红细胞(RBC)计数、血红蛋白(Hb)、血细胞比容(HCT)均高于染毒组,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组白细胞(WBC)计数高于染毒组、干预组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:铅镉对大鼠血铜、血钙、血锌水平有影响;综合营养干预对重金属元素造成的血液系统损伤有明显的拮抗作用,对血液系统有一定的保护及修复作用。