牛乳铁蛋白肽转基因小鼠的构建

目的:探讨牛乳铁蛋白肽在转基因鼠乳汁中的表达及其抑菌活性。方法:将实验室构建并保存的包含山羊β-酪蛋白基因启动子和牛乳铁蛋白肽基因的乳腺特异表达载体PI-bcp-LfcinB,用Xho I和Nru I双酶切,得到含有全部表达盒的显微注射DNA片段,采用常规显微注射技术获得转基因小鼠。并通过对泌乳期转基因雌鼠乳腺组织的RT-PCR检测,确定了牛乳铁蛋白肽在mRNA水平的表达,同时利用琼脂板扩散法检测了转基因鼠乳汁中表达产物的抑菌活性。结果:获得了牛乳铁蛋白肽转基因小鼠,且转基因小鼠乳汁中能够表达具有抑菌活性的牛乳铁蛋白肽。结论:通过转基因动物乳腺可以获得具有生物活性的牛乳铁蛋白肽,为进一步研究抗菌肽转基因牛、培育抗乳房炎奶牛新品种以及通过建立转基因动物生物反应器进行抗菌肽的大量生产奠定了基础。     

医学生实习中外科基本操作常犯错误及对策分析

目的：探讨医学生临床实习中在基本操作上常犯的错误,并对此提出建议和纠正措施,旨在进一步提高临床带教水平及临床教学质量。方法i总结我院临床医学专业实习生进行常见的外科临床基本操作考核成绩的情况,对错误类型等进行统计并提出合理的解决措施。结果：共考察学生90名,其中外科换药方法欠佳者22人（24．4％）,消毒铺巾存在问题24人（26．6％）,缝合存在问题32人（35．5％）,打结存在问题38（42．2％）人,拆线存在问题19（21．1％）人。结论：加强医学生外科实习期间的无菌观念培养及强化手术基本操作是临床教学的重要环节。     

利用piggyBac转座子制备牛成体多能干细胞诱导技术研究

通过逆转录病毒等媒介表达核转录因子Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc可将体细胞重编程为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSc)。时至今日,已经报道了小鼠、人、大鼠、猪、羊、马、牛的iPS细胞,但大动物iPS的多能性特别是嵌合体形成和生殖细胞传代还没有得到确认。与逆转录病毒等不同的是,piggyBac转座子转染效率高且无病毒源性、操作简单,可以在转座酶的存在下被安全切除。首次尝试了采用piggyBac转座子携带鼠源Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Rarg和Lrh16个核转录因子诱导胎牛成纤维细胞,成功获得牛类iPS细胞,其形态与小鼠胚胎干细胞相似,克隆边界清晰、呈丘状、克隆内细胞致密、核大。RT-PCR与免疫组织化学染色分析均显示牛类iPS细胞表达多能性基因。该类细胞体外诱导分化可形成类胚体EB,且表达3个胚层的基因;体内诱导分化可形成畸胎瘤,苏木精、伊红染色显示瘤体有三胚层的分化。上述结果显示利用piggyBac转座子制备牛多潜能干细胞诱导技术可行,产生的牛类iPS细胞具有潜在多能性。     

HIV-1整合酶链转移反应抑制剂的荧光筛选方法

整合酶被认为是抗HIV-1药物研究的理想靶点之一。为了建立便捷高效的整合酶链转移反应抑制剂筛选方法,首先将HIV-1整合酶原核表达载体pNL-IN转化入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)进行原核表达,并用镍琼脂糖凝胶进行亲和纯化,获得了纯度和活性均较高的整合酶重组蛋白;然后设计了生物素标记的供体DNA和FITC标记的靶DNA,用链霉亲和素磁珠捕获反应体系中的DNA产物;最后用荧光分析仪检测DNA产物的荧光信号,并计算待测样品的抑制率。用已知整合酶抑制剂S-1360和MK-0518对筛选方法进行了验证,测定结果与已有实验数据相当,表明本筛选方法能够有效应用于HIV-1整合酶链转移反应抑制剂的筛选。与现有的整合酶链转移反应抑制剂筛选方法相比,本筛选方法步骤更为简化、耗时更短、成本更低。     

柠条锦鸡儿CkLEA1基因克隆及表达分析

植物受到逆境胁迫后,大量逆境响应基因会被诱导表达,LEA蛋白编码基因就是与植物抗旱、抗冷等非生物胁迫密切相关的一类基因.从已构建的柠条锦鸡儿干旱胁迫抑制性削减杂交文库中筛选到了一条LEA蛋白编码基因并进行了克隆.序列比对与系统进化分析显示该基因属于LEA3基因家族成员,命名为CkLEA1(GenBank登录号是KC309408).克隆得到该基因gDNA长469bp,包含两个外显子和一个内含子;cDNA长357bp,包含300bp的开放阅读框,推导编码99个氨基酸的蛋白质.利用荧光定量PCR技术对CkLEA1基因在各种逆境胁迫条件的表达情况进行初步研究表明,CkLEA1受干旱、ABA、冷、热、盐和碱等处理不同程度地诱导,推测其与柠条锦鸡儿响应逆境胁迫的机制有关.     

多元化互动优化医学免疫学课堂教学

根据医学免疫学的特点和我国教学现状,设计了多种互动式教学方式,通过创设问题情境,建立激励机制,创建团队,组织小组活动等,在课堂教学中创造愉快、和谐、平等、探究的气氛,最大限度的激发学生学习主动性、创造性,提高学生的综合素质,同时促进医学基础课的教学质量。为保证多元化互动式教学模式的顺利实施,尝试建立适合该教学模式的全新考核评价体系,在新的评价体系里,期末成绩（100％）=基础理论（50％）＋出勤及课堂表现（15％）＋实验操作与技能（20％）＋小组活动（15％）。在本项研究实施过程中设置了信息反馈环节,针对提高学习兴趣、强化基础知识、促进思考能力、创新能力、语言表达能力等方面设立问卷调查,及时获得信息反馈。多元化互动式教学模式还存在许多细节性的问题急待解决,还需要反复的推敲、探索与实践。     

The History and Advances of Reversible Terminators Used in New Generations of Sequencing Technology

DNA sequencing using reversible terminators, as one sequencing by synthesis strategy, has garnered a great deal of interest due to its popular application in the second-generation high-throughput DNA sequencing technology. In this review, we provided its history of development, classification, and working mechanism of this technology. We also outlined the screening strategies for DNA polymerases to accommodate the reversible terminators as substrates during polymerization; particularly, we introduced the "REAP" method developed by us. At the end of this review, we discussed current limitations of this approach and provided potential solutions to extend its application.     

肾移植术后HCMV感染与淋巴细胞亚群及肾功能的相关性

目的：肾移植患者由于术前透析及术后服用免疫抑制剂,显著增加了人巨细胞病毒（Humancytomegalovirus,HCMV）原发感染和潜伏感染被激活的机会。观察HCMV感染情况与血T淋巴细胞亚群及肾功能的变化,以探讨其相关性及临床意义。方法：跟踪收集40例肾移植患者术前、术后血标本,应用RT-PCR技术检测HCMV,流式细胞术检测淋巴细胞亚群,结合肾功能判断是否发生急性排斥或移植肾功能恢复延迟。结果：肾移植术后HCMV感染率为52．5％,10例出现症状性感染（25％）,出现阳性时间35．7±15．3天。症状性感染组CD3-bCD4＋的水平和CD4＋／CD8＋的比值较无活动性感染组和正常对照组均降低,CD8＋水平较其他组升高,差异有显著性意义（P〈0．05）。无症状性活动感染者与无活动性感染者各指标比较差异无显著性。活动性感染组急性排斥或移植肾功能恢复延迟发生8例（38．1％）,无活动性感染组发生1例（5．2％）,差异具有统计学意义（x^2=6．15,P〈0．05）。结论：肾移植术后HCMV感染能显著引起T淋巴细胞亚群变化,尤其是CD4＋／CD8＋。并与急性排斥或移植肾功能恢复延迟密切相关联,在其发生发展中可能起着重要的作用。三者相互联系、相互作用、互为因果,对进一步机制的研究及临床诊断治疗、预后方面有一定意义。