MC 3T3-E1细胞在纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架上的增殖和分化

用原位合成纳米羟基磷灰石的方法制备多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架;在支架上接种MC 3T3-E1细胞,瑞氏染色检测细胞形态,MTT法检测其增殖情况;在诱导培养基中培养30d后,碱性磷酸酶染色比较其分化水平;定量检测细胞的碱性磷酸酶活性;RT-PCR检测成骨相关基因的表达情况。实验结果表明：MC 3T3-E1细胞在纳米级羟基磷灰石/壳聚糖复合支架上粘附铺展良好,其增殖率显著高于培养于纯壳聚糖支架上的细胞。碱性磷酸酶染色表明复合支架上的细胞有较高水平的碱性磷酸酶表达。进一步定量检测细胞的碱性磷酸酶活性,结果说明在复合支架上细胞比纯壳聚糖支架上培养的细胞碱性磷酸酶活性提高了约8倍。此外,骨分化相关特征基因骨桥蛋白OPN在复合支架上培养的细胞中的表达水平也明显高于纯壳聚糖上培养的细胞。分化成熟标志基因骨钙素OC在复合支架上培养的细胞中有表达,但是纯壳聚糖支架上培养的细胞中却未检测到。支架中纳米羟基磷灰石的加入不仅提高了前成骨细胞在复合支架上的增殖,而且还促进了它的分化。纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架表现出良好的生物相容性和生物活性,是极具前景的骨组织工程支架材料。     

响应面法优化灰霉病生防菌CNY-04培养条件

【目的】通过优化生防菌CNY-04的培养条件,提高其对灰霉病菌的抑菌效果。【方法】在单因素试验的基础上,利用响应面法(Response surface methodology)对灰霉病生防菌CNY-04培养条件进行整体优化,并测其生长曲线。【结果】生防菌CNY-04最优培养条件为牛肉膏0.5%、蛋白胨2.0%、酵母膏0.1%、葡萄糖0.5%、时间48 h、接种量4%、温度32°C、pH 8.0、装液量75 mL/250 mL和转速150 r/min,在此培养条件下生防菌CNY-04的OD600为2.907,与模型预测值相符,对灰葡萄孢菌的抑菌圈直径为44.5 mm,较优化前提高了30.9%。【结论】从整体上确定了生防菌CNY-04的最优培养条件,为该菌扩大化生产提供理论基础。     

米碎花的酚苷类化合物及其鼻咽癌细胞毒活性

为了解米碎花(Eurya chinensis)的化学成分及其生物活性,运用多种色谱技术从其乙醇提取物分离得到11个化合物,并对化合物进行体外抗鼻咽癌细胞增殖活性评价。经波谱数据分析,分别为异落新妇苷(1)、3,5,7-三羟基色原酮-3-O-α-L-鼠李糖苷(2)、1-O-反式-桂皮酰基-β-D-葡萄糖(3)、1-O-(4-羟基苯乙基)-6-O-反式-桂皮酰基-β-D-葡萄糖(4)、eutigoside D (5)、1-O-(3,4-二羟基苯乙基)-6-O-反式-香豆酰基-β-D-葡萄糖(6)、eutigoside A (7)、1-O-(4-羟基苯乙基)-6-O-反式-咖啡酰基-β-D-葡萄糖(8)、grayanoside A (9)、1-O-(4-羟基苯乙基)-6-O-(4-羟基苯甲酰基)-β-D-葡萄糖(10)、3-O-β-D-葡萄糖基-4-羟基-苄基苯甲酸酯(11)。其中,化合物4为首次从天然来源获得,化合物2～4和8～11均为首次从该属植物中分离得到。MTT法表明,化合物10具有中等抑制5-8F细胞增殖活性。     

水分胁迫对云杉光合特性的影响

比较研究了3年生红皮云杉和嫩江云杉苗木在不同水分条件下的光合特征,并探讨其对水分胁迫的适应机制。研究结果表明,不同光强下两种云杉的最大光合速率（P_max）随土壤含水量的降低而逐渐下降,且嫩江云杉的降幅较小;表观量子效率（AQY）、蒸腾速率（Tr）、气孔导度（G_s）也都呈下降的趋势。暗呼吸速率（R_d）和水分利用率（WUE）在逐渐干旱的过程中先上升后下降,而胞间CO₂浓度先下降,后随上升。这表明在水分胁迫较为严重时,光合速率的降低主要是非气孔限制造成的。比较上述指标的变化情况可以看出,嫩江云杉对干旱的适应性要强于红皮云杉。     

VEGFR-3基因转染淋巴管内皮祖细胞后可溶性VEGFR-3蛋白的分泌

目的研究携带BABL/c小鼠VEGFR-3（1-3Ig）基因的重组腺病毒转染淋巴管内皮祖细胞（LEPCs）后,对可溶性VEGFR-3蛋白分泌及其生物学特性的作用。方法采用巢式RT-PCR技术从BABL/c小鼠胎盘组织中扩增VEGFR-3（1-3Ig）的编码基因,并通过重组PCR技术在基因的N端加上人CD33的信号肽。将该基因片段亚克隆入腺病毒表达载体（pDC316-IRES-EGFP）,重组质粒经酶切及测序验证后,与包装质粒共转染293细胞以产生重组腺病毒。将构建好的携带有小鼠VEGFR-3（1-3Ig）基因的重组腺病毒转染淋巴管内皮祖细胞,通过ELISA检测转染细胞上清液中可溶性VEGFR-3蛋白的分泌及其对VEGF-C的中和作用。结果成功构建了带有信号肽的BABL/c小鼠VEGFR-3（1-3Ig）基因的腺病毒表达质粒,并获得高滴度的携带有小鼠VEGFR-3（1-3Ig）基因的重组腺病毒,重组腺病毒转染淋巴管内皮祖细胞后,可使转染细胞分泌可溶性VEGFR-3蛋白,该蛋白具有中和VEGF-C的作用。结论成功地制备了携带BABL/c小鼠VEGFR-3（1-3Ig）基因的重组腺病毒,用该病毒转染淋巴管内皮祖细胞可使其分泌可溶性VEGFR-3,该蛋白在体外具有中和VEGF-C的作用,这为临床抑制肿瘤淋巴管新生奠定了基础。     

对马耳蕨的组织培养与快速繁殖

1植物名称对马耳蕨[Polystichum tsus-simense（Hook.）J.Smith],又称小叶金鸡尾巴草。 2材料类别成熟孢子。3培养条件孢子萌发培养基：（1）MS;（2）1/2MS;（3）1/4MS。原叶体继代增殖培养基：（4）MS＋6-BA     

对马耳蕨光合作用对生境光强增加的响应

以林下阴生蕨类植物对马耳蕨为材料,采用盆栽试验比较了全光照和阴棚生境下对马耳蕨对强光的光合响应特征,以探讨其光适应机制.结果显示:(1)与荫棚条件下相比,全光照下对马耳蕨叶片叶绿素a(Chl a)、叶绿素b(Chl b)及叶绿素(a+b)[Chl(a+b)]含量分别显著下降了48.3%、28.2%、40.0%,而其类胡萝卜素(Car)和总黄酮含量分别显著增加了158.3%、93.9%;(2) 全光照下对马耳蕨叶片PSⅡ最大光能转化效率(Fv/Fm)、初始荧光(F0)、PSⅡ潜在活性(Fv/F0)、PSⅡ光能捕获效率(Fv′/Fm′)、光化学淬灭系数(qP)分别比荫棚的下降了3.7%、23.4%、9.5%、2.5%、3.2%;(3)随着光照强度的增加,全光照下对马耳蕨表观电子传递速率(rETR)及热耗散(qN)上升幅度较荫棚显著提高.研究发现,经过一定时期的光适应,通过减少对光能的捕获、降低PSⅡ反应中心活性及光能转化效率、提高光合能力、增强热耗散能力以及增强活性氧的清除能力,阴生植物对马耳蕨的光合作用可适应高光生境;在无水分胁迫条件下,全阳光照不会导致阴生植物对马耳蕨的光合作用发生光损害.     

Dkk-1在肿瘤中的研究进展

DKK-1是一种分泌型糖蛋白,通过结合细胞表面受体LRP5/6、Kremen1/2在Wnt通路中起负调控作用。Dkk-1的表达受p53、MYCN、β-catenin等基因调控。Dkk-1在细胞内的异位表达能抑制多种肿瘤细胞的增殖,但有时能在促凋亡因子存在时诱发凋亡。Dkk-1在一些肿瘤中低表达,而在另一些肿瘤中高表达。Dkk-1在不同肿瘤的发生、发展以及转移这几个阶段中的表达和功能表现出复杂多重的差异。该文就Dkk-1在肿瘤中表达和功能的研究进展作一综述。     

Ontogenetic variations in the venom proteome of the Amazonian snake Bothrops atrox

Background  

Bothrops atrox is responsible for the majority of snakebite accidents in the Brazilian Amazon region. Previous studies have demonstrated that the biological and pharmacological activities of B. atrox venom alter with the age of the animal. Here, we present a comparative proteome analysis of B. atrox venom collected from specimens of three different stages of maturation: juveniles, sub-adults and adults.