转油菜素内酯合成基因DET2烟草对NaCI胁迫的反应

通过农杆菌介导法,将含有油菜素内酯合成基因DET2的植物表达栽体pCAMBIA2301-DET2转入烟草,获得转基因烟草植株.用T1代转基因阳性株进行耐NaCl试验,结果显示,NaCl胁迫下转基因烟草、非转基因对照烟草的出苗率、幼苗鲜重、株高及根长均随NaCl浓度增加而下降.但在相同NaCl浓度下,转基因植株鲜重、株高及根长均明显高于非转基因对照烟草,并且转基因植株的丙二醛( MDA)含量低于非转基因植株,诱导蛋白基因P5CS表达高峰出现时间晚于非转基因植株.说明DET2的表达提高了烟草的耐NaCl能力.     

Characterization and utilization of methyltransferase for apramycin production in Streptoalloteichus tenebrarius

A structurally unique aminoglycoside produced in Streptoalloteichus tenebrarius, Apramycin is used in veterinary medicine or the treatment of Salmonella, Escherichia coli, and Pasteurella multocida infections. Although apramycin was discovered nearly 50 years ago, many biosynthetic steps of apramycin remain unknown. In this study, we identified a HemK family methyltransferase, AprI, to be the 7’-N-methyltransferase in apramycin biosynthetic pathway. Biochemical experiments showed that AprI converted demethyl-aprosamine to aprosamine. Through gene disruption of aprI, we identified a new aminoglycoside antibiotic demethyl-apramycin as the main product in aprI disruption strain. The demethyl-apramycin is an impurity in apramycin product. In addition to demethyl-apramycin, carbamyltobramycin is another major impurity. However, unlike demethyl-apramycin, tobramycin is biosynthesized by an independent biosynthetic pathway in S. tenebrarius. The titer and rate of apramycin were improved by overexpression of the aprI and disruption of the tobM2, which is a crucial gene for tobramycin biosynthesis. The titer of apramycin increased from 2227 ± 320 mg/L to 2331 ± 210 mg/L, while the titer of product impurity demethyl-apramycin decreased from 196 ± 36 mg/L to 51 ± 9 mg/L. Moreover, the carbamyltobramycin titer of the wild-type strain was 607 ± 111 mg/L and that of the engineering strain was null. The rate of apramycin increased from 68% to 87% and that of demethyl-apramycin decreased from 1.17% to 0.34%.     

基于细胞三维培养的气道平滑肌细胞收缩效应检测方法的建立与应用

气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)是引起哮喘患者气道收缩狭窄、呼吸阻力增加的主要效应细胞。ASMCs收缩效应检测是研究哮喘病理生理机制、评估或研发新的支气管舒张药物的重要实验依据。而常用的活体组织张力检测以及单层培养ASMCs显微镜形态观察等方法存在样品取材或测量误差等问题。该研究利用胶原蛋白凝胶构建气道平滑肌细胞的三维立体培养模型,将凝胶与培养孔壁分离,在不同的时间点记录细胞收缩力作用下凝胶面积的变化值,以此反映ASMCs的收缩效应。结果显示,0.1,1,10 mmol/L的乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)刺激后,凝胶面积均显著缩小,随着剂量增加ASMCs的收缩反应增强。提前加入肌球蛋白ATP酶抑制剂BDM(butanedione monoxime),能明显抑制Ach诱导的ASMCs收缩反应,说明该方法的可重复性和准确性好。     

ICAM在着床期小鼠PBLC及EC/DC中表达的研究(英文)

细胞粘附分子（ＣＡＭ）可介导细胞间及细胞与间质之间的相互作用并传导信息,参与机体胚胎发育、免疫调节、炎症反应、组织修复及肿瘤转移等生理和病理过程。细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ１）是主要的ＣＡＭ分子之一,可表达于活化的细胞,内皮细胞等。人膜是母体与胚胎滋养层直接接触的特殊组织、已发现蜕膜细胞在着床过程中参与了局部免疫耐受的形成,但对着床期ＩＣＡＭ１在蜕膜细胞表达的动态研究鲜见报道。本研究采用免疫荧光、多参数流式细胞术,分别从整体和局部角度、着床过程中外周血淋巴细胞（ＰＢＬＣ）及子宫内膜／蜕膜（ＥＣ／ＤＣ）细胞ＩＣＡＭ１的不同表达特点进行了动态观察和对比性分析。结果发现,ＩＣＡＭ１在着床期ＰＢＬＣ及ＥＣ／ＤＣ中的表达均存在明显的动态变化（Ｔａｂ．１;Ｆｉｇｓ．１＆２）。ＩＣＡＭ１在ＰＢＬＣ中的表达于妊娠第一天（Ｄ１）即开始降低,Ｄ２降至最低;与此不同,ＩＣＡＭ１在ＥＣ／ＤＣ中的表达于Ｄ２开始降低,Ｄ４降至最低,Ｄ５开始恢复,但尚未恢复到对照水平。结果表明,ＩＣＡＭ１在蜕膜局部的表达调节方式不同于外周血;ＩＣＡＭ１表达阳性的外周血,淋巴细胞和蜕膜细胞均代表着活化的功能性细胞,这些细胞表面ＩＣＡＭ     

新生期反复惊厥对认知和海马CaMKⅡ表达的远期影响及干预研究

新生期惊厥活动可造成严重的神经后遗症,如成年期大脑对惊厥的易感和易损性提高,严重者产生认知功能损害.对发育期惊厥性脑损伤远期预后的研究,尤其是分子机制及其干预的研究具有重要的临床意义.探讨了新生期大鼠单次长程或反复惊厥对学习、记忆能力和海马突触后致密物质钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的远期影响及运动训练的干预作用.生后6天(P6)的SD大鼠随机分成单次长程惊厥组(SS)、反复惊厥组(RS)和对照组,每组12只.3组大鼠分别于P27～P31、P58～P61、P80～P82采用Morris水迷宫检测学习、记忆功能.P51～P56对SS组和RS组进行踏转轮训练.最后脑组织切片观察CaMKⅡmRNA在海马的表达.结果显示,第一次Morris水迷宫测试RS组第1天～第4天潜伏期明显高于对照组,具有显著性差异(P＜0.05),第二次水迷宫RS组第1天～第2天的逃避潜伏期较对照组仍显著延长,具有显著性差异(P＜0.05),第三次测试各组之间差异无统计学意义.搜寻策略显示,在第一次Morris测试时RS组第3天～第4天边缘式搜寻比例明显高于对照组,具有显著性差异(P＜0.01),同时RS组第3天～第4天趋向式搜寻比例明显低于对照组,具有显著性差异(P＜0.01),而第二次和第三次水迷宫测试3组间趋向式和直线式搜寻策略无明显差异.在记忆实验中,原平台象限游泳距离与总距离的比值,RS组第三次较对照组显著降低,有统计学意义(P＜0.05);另外RS组1～3天趋向式搜寻比例均明显低于对照组,有显著性差异(P＜0.05).CaMKⅡ原位杂交显示,各组CaMKⅡmRNA在海马均有明显表达,但是在齿状回和门区RS组表达明显低于对照组,具有统计学意义(P＜0.01).研究表明,新生期反复长程惊厥能够对学习和记忆功能产生远期的损害,可能与海马记忆分子CaMKⅡ表达下调有关,而单次长程惊厥对学习记忆无明显影响.早期运动训练能够明显改善反复惊厥所致的学习能力损害,但对记忆能力效果仍较差.     

长效促胰岛素降糖酵母的构建及其对糖尿病模型小鼠的治疗效果

益生菌生物药物是指通过口服表达药用多肽(蛋白)的重组益生菌活细胞达到治疗疾病的新型口服给药系统。为了构建一种能有效防治2型糖尿病的酵母生物药物,文章首先构建了酿酒酵母(S.cerevisiae)整合型表达载体pNK1-PGK,并且通过绿色荧光蛋白(GFP)证明其表达功能正常,利用该载体将10×GLP-1 (Glucagon-like peptide-1)基因转化到酿酒酵母INVSc1中,通过营养缺陷型和Western blotting成功筛选出表达10×GLP-1的长效促胰岛素降糖酵母(Long-acting GLP-1 hypoglycemic yeast, LHY)。该酵母生长迅速,外源基因10×GLP-1表达稳定,表达量达到1.56 mg/g细胞湿重。通过链脲佐菌素和高脂高糖饮食联合诱导的方法构建了2型糖尿病小鼠模型,用LHY对其进行口服灌胃治疗,证明LHY具有较好疗效,明显降低血糖水平。     

数学分析方法在水稻螟虫测报上的应用研究

本利用福建省将乐县1963-1994年测报积累的观察赍料和气象资料,建立了越冬代二化螟、三化螟蛾高峰逐步回归顶测模型．Fuzzy分析预报模型,四代三化螟发生期发生量璜测模型。     

天山冻土产低温脂肪酶菌株的筛选及其多样性分析

【目的】通过天山冻土细菌的分离和产低温脂肪酶菌株的筛选,了解天山冻土微生物的物种多样性和产脂肪酶菌株的系统发育多样性,为高效低温脂肪酶生物技术奠定基础。【方法】采用稀浓度的R2A、TSB平板涂布分离天山冻土中可培养细菌,通过选择性培养基筛选产低温脂肪酶的菌株。采用细菌常规生理生化实验、最适生长温度、耐盐性、产酶性能对分离菌株的生理学进行研究,通过16S rRNA基因序列分析确定产脂肪酶菌种的系统进化地位,通过BOX-PCR指纹技术对16S rRNA基因高度同源性的菌株进一步区分。【结果】分离筛选到78株可培养低温菌,选择培养基显示有17株可产低温脂肪酶,其中8株在两种选择培养基中均可产脂肪酶和酯酶。17株产酶菌分别隶属于5个系统发育类群、6个属,其中假单胞菌属(Pseudomonas)占大多数(58.9%)。【结论】天山冻土中产低温脂肪酶的细菌具有较丰富的系统发育多样性,依据生长温度,均属于耐冷菌。     

小叶章种群高度的季节动态

探讨了三江平原以小叶章为优势种的典型草旬、沼泽化草甸、沼泽３个植被类型中小叶章种群高度的变化规律。结果表明,在３个类型中,种群高度的季节动态均呈单峰型,极大值均出现在７月末,分别为１１２．６７ｃｍ、１０１．６１ｃｍ、８３．８８ｃｍ。ＨＡＧＲ的季节动态在７月末之前〉０,之后〈０;典型草甸和沼泽化草甸的极大值出现在６月末至７月中旬,沼泽则出现在６月中旬至６月末;极小值典型草甸出现在８月末至９月中旬,而     

Gramene: a resource for comparative grass genomics

Gramene (http://www.gramene.org) is a comparative genome mapping database for grasses and a community resource for rice. Rice, in addition to being an economically important crop, is also a model monocot for understanding other agronomically important grass genomes. Gramene replaces the existing AceDB database ‘RiceGenes’ with a relational database based on Oracle. Gramene provides curated and integrative information about maps, sequence, genes, genetic markers, mutants, QTLs, controlled vocabularies and publications. Its aims are to use the rice genetic, physical and sequence maps as fundamental organizing units, to provide a common denominator for moving from one crop grass to another and is to serve as a portal for interconnecting with other web-based crop grass resources. This paper describes the initial steps we have taken towards realizing these goals.