天然产物对家蚕乙酰胆碱酯酶抑制作用研究

用Sephadex G-25、DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-200方法分离纯化家蚕头部中的乙酰胆碱酯酶(AChE),以有机磷化学农药为阳性对照,比较分析几种天然产物对AChE纯酶液与粗酶液的抑制效果.结果 表明,经过一系列步骤的纯化,最后所得AChE是纯度较高的酶液,并且纯化后的AChE对抑制作用更敏感.同时实验选取的大部分天然产物提取物对纯化后的AChE都有一定的抑制作用,其中绣线菊乙醇提取物对纯酶的IC50达到了0.091×10-3 g·mL-1.     

优化菌落原位杂交体系筛选野生稻基因组文库

菌落原位杂交仍是当今筛选基因组文库的重要方法之一,但难以保持背景清晰和阳性杂交点明显的稳定的杂交体系.通过对杂交膜不同处理方法的对比,表明利用溶菌酶处理杂交体系进行菌落原位杂交筛选,其杂交结果背景较干净,且能根据杂交信号的强弱很清晰地显色阳性黑点.采用该法筛选野生稻基因组文库,已筛选出22个阳性克隆,并测序分析均为阳性克隆.     

浅析肠道菌群干预治疗癫痫的潜在应用前景

肠道菌群是存在于人体内的庞大而复杂的微生物群落,菌群的变化会影响大脑的生理、行为和认知功能,而大脑可以通过免疫、内分泌和神经通路等途径调节神经生理行为,与很多神经和精神疾病(如癫痫、脱髓鞘疾病、阿尔茨海默症、自闭症等)的发生发展有关。近年来诸多证据表明自身免疫机制在癫痫进展中发挥重要作用,肠道菌群可通过调节免疫反应来影响疾病的进展。本文从肠道菌群与大脑间关系的认知、相互间功能影响及与癫痫的关系等方面,探讨通过肠道菌群干预治疗癫痫的机制与潜在应用前景,希望为菌群干预治疗与预防一些神经及精神疾病提供参考。     

大小粒型藜麦籽粒表型、灌浆特性及淀粉合成酶活性的差异分析

【目的】籽粒大小是影响藜麦产量、商品性和加工特性的重要因素,考察灌浆期大小粒型藜麦籽粒表型、灌浆特性和淀粉合成酶活性的差异,为大粒型藜麦品种的选育提供理论指导。【方法】选择千粒重大于5.0 g和小于3.0 g的藜麦材料各两份,在青海省农林科学院种质资源创新试验基地进行田间试验,比较自灌浆期始7 d、14 d、21 d和28 d籽粒表型、灌浆特性和淀粉合成酶活性等在大小粒型藜麦间的差异。【结果】（1）大小粒型藜麦籽粒面积、周长、直径、粒长、粒宽表型性状随着生育时期均极显著增大,且粒型间存在显著差异,并以籽粒面积和周长差异最大,大粒型藜麦显著高于小粒型藜麦9.12%~11.54%和21.49~23.92%。（2）灌浆期间大粒型藜麦百粒干重始终显著高于同期小粒型藜麦,平均增幅在21.23%～31.04%;大小粒型藜麦灌浆速率随生育期均先上升后下降,均符合“慢-快-慢”的变化规律,但达到峰值时间和峰高明显不同,大粒型峰值出现早而高,小粒型则低而迟。（3）淀粉分支酶（SBE）、蔗糖合成酶（SS）、可溶性淀粉合成酶（SSS）和ADPG焦磷酸化酶（AGP）在大小粒型藜麦籽粒灌浆期呈现不同的变化趋势,SBE和SS活性表现为小粒型藜麦强于大粒型藜麦,而SSS和AGP活性则表现为大粒型藜麦强于小粒型藜麦。【结论】藜麦籽粒灌浆期间4种淀粉合成酶活性的差异,致使淀粉合成积累量和灌浆速率峰值的不同,进而形成籽粒表型性状的差异,而SSS和AGPase是影响藜麦籽粒大小形成的关键酶。     

高原地区慢性肝病肠道微生态结构的变化

分析高原地区慢性肝病患者肠道菌群物种多样性及菌群丰度结构变化,探讨肠道微生态失衡与慢性肝病的关联。

收集高原地区90例慢性肝病（慢性乙型病毒性肝炎30例、乙肝后肝硬化30例、原发性肝癌30例）及25例健康人的粪便,利用高通量基因测序及生物信息学分析技术,探讨慢性肝病患者与健康人之间物种多样性以及不同分类水平上肠道菌群组成是否存在差异。

慢性肝病患者肠道菌群多样性较健康人显著降低（Z=1.462,P=0.005）,Beta多样性分析发现慢性肝病患者与健康人肠道菌群组成上差异存在统计学意义（r=0.122,P=0.020）;对慢性肝病组与健康组进行组间肠道菌群差异性分析,发现在门水平上,拟杆菌门在慢性肝病组中富集（Z=1.065,P=0.043）,慢性肝病组内比较发现拟杆菌门在慢性乙型病毒性肝炎、乙肝后肝硬化、原发性肝癌患者中的相对丰度呈逐渐减少的趋势,但差异无统计学意义（P＞0.050）;属水平上,粪杆菌属在慢性肝病组中富集（Z=1.092,P=0.032）,而肠球菌属分布减少（Z=1.398,P=0.036）,同时慢性肝病患者肠道菌群中一些潜在致病菌如链球菌属、韦荣球菌属较健康人富集,而双歧杆菌属、乳杆菌属等益生菌相对丰度较低,但差异无统计学意义。组内比较发现存在差异菌属链球菌属（H=6.026,P=0.049）、韦荣球菌属（H=10.317,P=0.005）,对差异菌属进行两两比较发现相较原发性肝癌组,链球菌属在乙肝后肝硬化组中更加富集,差异有统计学意义（P＜0.050）,同时发现肝硬化及肝癌组中韦荣球菌属的相对丰度较慢性乙型病毒性肝炎组高,但差异无统计学意义（P＞0.050）。相关性分析发现粪杆菌属与ALT、AST、ALP水平呈正相关（r=0.192、0.187、0.276,均P＜0.050）,韦荣球菌属与TB、ALP水平呈正相关（r=0.257、0.225,均P＜0.050）。

高原地区慢性肝病患者肠道微生物多样性显著降低,且慢性肝病患者与健康人肠道菌群组成上存在差异,在慢性肝病的进展中一些潜在致病菌的丰度逐渐增加,同时益生菌的相对丰度呈逐渐减少的趋势。

     

基于RNA-seq分析bdhA敲除对枯草芽孢杆菌产纳豆激酶和MK-7的影响

纳豆激酶(nattokinase, NK)具有多种生理功能,是治疗心血管疾病的理想药物。甲萘醌-7 (menaquinone-7, MK-7)是人体不可缺少的脂溶性维生素之一,可预防骨质疏松和帕金森等疾病。【目的】提高枯草芽孢杆菌中NK和MK-7共同生产的产量,揭示重组菌中共同生产NK和MK-7的机理,为MK-7和NK的生成提供新的代谢工程策略。【方法】以枯草芽孢杆菌为出发菌株,敲除2,3-丁二醇脱氢酶基因(bdhA),构建一株能增加NK和MK-7共同生产的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 168-ΔbdhA。利用RNA-seq分析NK和MK-7合成途径关键酶编码基因的变化,总结NK和MK-7共同生产的机制。【结果】与原始菌株相比,Bacillus subtilis 168-ΔbdhA中2,3-丁二醇含量降低64.0%,为2.76 g/L。NK和MK-7的产量较原始菌株提高30.0%和60.0%。RNA-seq分析表明,中心碳代谢、氧化磷酸化和NK及MK-7合成等过程相关的基因表达存在差异。NK负调控因子codY下调2.19倍。在蛋白质分泌途径中,secA下调0.37倍,tatAD和tatC分别上调2.81倍和0.50倍。【结论】bdhA的敲除阻断了2,3-丁二醇的碳通量,促进甘油的吸收,碳通量更多地流向NK和MK-7的合成途径。负调控因子codY的下调促进NK转录,蛋白转运相关途径基因的上下调促进MK-7的胞外分泌,从而实现其产量的增加。     

红花籽粕5-羟色胺衍生物的大孔树脂吸附研究及HPLC—MS结构鉴定

以红花籽粕的乙醇提取物为原料,通过比较D312、860021、DM131、LK002、LK001及XDA-1等六种大孔吸附树脂对5-羟色胺衍生物的静态吸附与解吸性能,以最大吸附量和解吸率为指标进行考察,XDA-1的吸附解吸综合效果最佳.通过HPLC-MS鉴定分析,红花籽粕中几种主要5-羟色胺衍生物分别为阿魏酰5-羟色胺、N-(p-香豆酰)5-羟色胺、N-(p-香豆酰)色胺β-D-葡萄糖苷和N-阿魏酰色胺β-D-葡萄糖苷.     

重组毕赤酵母产青蛤Mytimacin抗菌肽的表达研究

Mytimacin是主要在无脊椎动物中表达的Macin抗菌肽家族中的一员,具有较强的抗病原微生物活性,是利用重组DNA技术开发天然抗菌剂的良好候选者。通过RT-PCR从青蛤(Cyclina sinensis)闭壳肌中克隆编码Mytimacin成熟肽的基因,经3次PCR在该基因的5’端添加Xho I限制性酶切位点和信号肽酶识别位点、3’端添加Xba I限制性酶切位点和6×His,获得目的基因"CsMm";以pPICZαA为表达载体、毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33为工程菌,构建重组毕赤酵母X-33/pPICZαA-CsMm。通过高浓度博来霉素筛选高拷贝酵母转化子,在28℃、250 r/min条件下,使用1.5%的甲醇诱导表达72 h;使用固化金属离子亲和层析(IMAC)对表达产物进行纯化,并通过MALDI-TOF-TOF质谱分析对纯化产物进行鉴定。另外,通过涂布法和浊度法考察重组CsMm的抑菌活性。结果表明:基于X-33/pPICZαA-CsMm重组毕赤酵母的外源表达获得了表达量为25.6 mg/L的重组蛋白,经MALDI-TOF-TOF质谱鉴定其为分子量约7.8 kD的预期重组CsMm。抑菌试验证明重组CsMm对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)和副溶血性弧菌(Vibrio Parahemolyticus)具有明显的抑菌活性。构建的重组毕赤酵母X-33/pPICZαA-CsMm能有效合成具有生物学活性的重组青蛤Mytimacin,旨为贝类来源天然小分子抗菌剂的开发提供可资参考的技术途径。     

Cloning and analysing of 5‘ flanking region of Xenopus organizer gene noggin

Xenopus organizer specific gene noggin possesses nearly all the characterestic properties of the action of organizer to specify the embryonic body acis.To analyze how the maternal inherited factors control its expression pattern,we cloned the 5‘ regulatory region of noggin gene.The 1.5 kb upstream sequense could direct reporter gene to express in vivo and data from deletion analysis indicated that a 229 base pair fragmet is essential for activating noggin expression.We further demonstrated that the response elements within this regulatory region were indeed under the control of growth factor activin and Wnt signaling pathway components.     

替加环素与米诺环素治疗布鲁菌病的进展

布鲁菌病是由布鲁菌引起的人畜共患传染性疾病，由带菌动物通过多种途径传染给易感人群，可侵犯人体各器官系统。目前推荐的抗布鲁菌治疗方案为多西环素、利福平、喹诺酮类、氨基糖类等抗菌药物组合的二联或者三联抗菌方案，但治疗无效率和疾病复发率仍较高。替加环素和米诺环素作为四环素类药物，经体外实验证明均可有效抑制布鲁菌，且50%最小抑菌浓度（50% minimal inhibitory concentration，MIC50） 和 90%最小抑菌浓度（90% minimal inhibitory concentration，MIC90）均较低。临床研究亦证实，包含替加环素和米诺环素的联合抗菌方案具有较低的治疗无效率和疾病复发率。因此，替加环素和米诺环素可作为治疗布鲁菌病的候选用药。本文就布鲁菌病传统治疗方案以及替加环素和米诺环素的抗菌效果进行综述。