抗性基因报告系统辅助选育厦门霉素A高产菌株

【背景】厦门霉素A是厦门链霉菌(Streptomyces xiamenensis) 318菌株的主要次级代谢产物,具有显著的抗纤维化活性及药用潜力。但野生型菌株中厦门霉素A的产量仅有14 mg/L,其生产水平亟待提升。【目的】通过随机诱变-抗性标记筛选获得高产菌株并进行培养基优化,以提高厦门霉素A的产量。【方法】在厦门霉素A的生物合成基因簇后融合一个抗性基因,用于报告整个基因簇的表达水平。对构建的基因工程菌株进行常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变,从抗性水平高的突变菌株中筛选高产菌株,并通过培养基优化,使厦门霉素A产量显著提升。【结果】构建携带卡那霉素抗性标记的产厦门霉素A的工程菌MT-XN作为出发菌株,对该菌株进行一轮ARTP诱变,使用90 mg/L卡那霉素筛选,得到了厦门霉素A产量为101.7 mg/L的突变菌株MA-8。进一步通过响应面法优化培养基配方,在最佳培养基中MA-8菌株产生的厦门霉素A达到134.2 mg/L,较野生型菌株提高了845.1%。【结论】采用随机诱变-报告基因筛选系统,可快速筛选出厦门霉素A产量大幅提升的高产菌株,为后续的药物开发奠定良好的基础。     

中国陕西省新异蚖属一新种记述(原尾纲,古蚖目,古蚖科)

记述了采自陕西省翠华山的新异蚖属1新种,即陕新异蚖Neanisentomonshaanicum sp.nov.。新种主要特征为:前足跗节感器b′-1和c′缺失,感器d极长大;腹部第Ⅴ～Ⅵ节背板缺少前排刚毛A3,毛序为8/16,第Ⅶ节背板缺少前排刚毛A1和A3,毛序为6/16;雌性外生殖器具有明显的鸭头状的头片。该新种可以通过前足跗节感器d的长度和雌性外生殖器等特征与已知种类区分。文中同时列出了新异蚖属的世界种类检索表。     

雷帕霉素对人胰腺癌细胞SW1990的mTOR信号通路的影响

目的:研究雷帕霉素对人胰腺癌细胞SW1990的mTOR信号通路的影响。方法:采用免疫细胞化学证实mTOR信号通路的存在,通过CCK-8法研究雷帕霉素对胰腺癌细胞增殖的影响,通过Western blot和real time PCR分别从蛋白水平和基因水平研究雷帕霉素对mTOR及其下游分子的表达。结果:免疫细胞化学结果显示p-mTOR、p-p70S6K、p-4E-BP1在细胞质中均呈阳性;CCK-8法显示雷帕霉素能明显抑制细胞增殖(P<0.05);Western blot结果显示随着雷帕霉素浓度的增加,p-mTOR、p-p70S6K表达明显减少,而p-4E-BP1蛋白表达明显增加(P<0.05);Real-time PCR结果显示随雷帕霉素浓度的增加,CyclinD1、VEGF、c-myc基因表达明显减少(P<0.05)。结论:人胰腺癌细胞系SW1990中存在mTOR信号通路并处于激活状态;雷帕霉素抑制胰腺癌细胞增殖与雷帕霉素抑制mTOR信号通路活化有关。     

Effectiveness of latanoprost (Xalatan) monotherapy in newly discovered and previously medicamentously treated primary open angle glaucoma patients

We evaluated the effectiveness of latanoprost (Xalatan) monotherapy in primary open angle glaucoma (POAG). Latanoprost is a prostaglandin analogue, the pure 15(R) epimer of 13,14-dihydro-17-phenyl-18,19,20-trinor-PGF2alpha-isopropyl ester. As a prodrug it is being activated by enzymatic hydrolysis in the cornea after which it becomes active acid of latanoprost. Latanoprost is lowering the intraocular pressure (IOP) by increasing the uveoscleral outflow. In this study, latanoprost was used once daily as monotherapy what offers much better compliance for the patients than other combinations of drugs, preserving good IOP control. Based on the significant reduction of the IOP, measured on the day 60 of the trial (mean change in IOP was -5.1 mmHg, with 95% confidence interval in range from -5.6 to -4.5), it is concluded that use of latanoprost is advisable when calculating better IOP control, few side-effects and reductions in costs of potential surgical procedures.     

豆瓣兰的无菌播种与快速繁殖

1植物名称豆瓣兰[Cymbidum serratum（Schltr）Y.S.Wu et S.C.Chen]。2材料类别种子。3培养条件种子萌发培养基：（1）MS＋1 mg·L-（-1）BAP＋10%椰子水;（2）改良Kyoto＋1 mg·L-（-1） BAP＋10%椰子水;（3）1/3MS＋1 mg·L-（-1） BAP＋10%椰子水。原球茎增殖培养基：（4）改良Kyoto＋2 mg·L-（-1）BAP＋1 mg·L-（-1） NAA＋10%椰子水。根状茎增殖培养基：（5）改良Kyoto＋3 mg·L-（-1） BAP＋0.2 mg·L-（-1） NAA＋10%椰子水。分化壮苗培养基：     

中国西北六盘山区原尾虫研究

通过研究中国西北六盘山区采集到的原尾虫标本,对华山蚖Huashanentulus huashanensis Yin,1980进行了重新描述,补充了第Ⅰ幼虫、第Ⅱ幼虫和前成虫的描述,重新描绘了颚腺结构图,并描述了体表腺孔.同时记述华山蚖属1新种,六盘华山蚖Huashanentulus liupanensis sp.nov.,新种的主要特征是颚腺管粗短,前足跗节上感器a极长大,并与华山蚖进行了比较区别.文中列出了六盘山区原尾虫的种类名录,共包括15种,分别是青海夕蚖Hesperentomon chinghaiensis Yin,1982,棘腹夕蚖H.pectigastrulum Yin,1984,中国原蚖Proturentomon chinensis Yin,1984,天目巴蚖Baculentulus tianmushanensis Yin,1963,河南肯蚖Kenyentulus henanensis Yin,1983,九寨肯蚖K.jiuzhaiensis Tang et Yin,1986,华山蚖Huashanentulus huashanensis Yin,1980,六盘华山蚖H.liupanensis sp.nov.,中华诺蚖Nosekiella sinensis Bu et Yin,2008,双腰富蚖Fujientomon dicestum Yin,1977,东方古蚖Eosentomon orientalis Yin,1965,大眼古蚖E.megalenum Yin,1989,日升古蚖E.asahi Imadaté,1961,三纹拟异蚖Pseudanisentomon trilinum Zhang et Yin,1981,小孔拟异蚖P.minystigmum Yin,1979.新种模式标本保存在上海昆虫博物馆.     

源于小孢子培养的大麦耐盐变异体获取

以大麦品种‘花30’作为供试材料,比较了甲基磺酸乙酯（EMS）和平阳霉素处理小孢子60Co γ-射线辐照处理离体穗和干种子,对300mg·L-1NaCl胁迫培养下游离小孢子的愈伤组织产量和愈伤组织在0.3％NaCl胁迫筛选下的绿苗产量的影响。结果表明,EMS处理离体小孢子和60Co γ-射线辐照千种子的愈伤组织产量和绿苗产量明显优于平阳霉素处理小孢子和60Co γ-射线辐照离体穗。以16份源于种子辐照处理的再生植株自交一代种子为供试材料,比较了在0．3％NaCl胁迫下种子的发芽率和幼苗的成活率以及植株的分蘖数、株高和单株产量。结果表明,‘花30’发芽率为0,供试的16份耐盐变异体中,有14份材料在NaCl胁迫下的发芽率优于‘花30’,鉴定出4份耐盐性明显优于‘花30’的变异体材料。选择耐盐变异体作为供试材料,测定了变异体中Na＋／H＋逆向转运蛋白基因NHXl、NHX2和NHX3和编码甜菜碱醛脱氢酶（BADH）的两个同工酶基因曰肋,和BBD2的表达模式和表达量,结果表明变异体耐盐性的提高与这些基因的表达量存在联系。     

中国畜禽粪便污染现状及产沼气潜力

为弄清中国畜禽粪便排放总量、污染现状及其资源化潜力,通过查阅文献确定了主要估算参数,并结合畜牧业统计数据估算了2009年中国畜禽粪便排放量及其污染物含量、粪便农用地负荷并对畜禽粪便中氮、磷农用地负荷进行预警分级;同时估算了粪便资源沼气潜力。结果表明:2009年中国畜禽养殖业粪便排放总量为32.64亿t鲜重,其中BOD、COD含量分别为7273.95和8039.96万t。全国单位面积农用地畜禽粪便负荷为26.8t·hm-2,氮、磷素负荷分别为158.42和47.92kg·hm-2。预警分级显示:牧区畜禽养殖业对环境不构成威胁;农区除山西、黑龙江外,其他地区均出现不同程度的氮素污染,而磷素的影响在农区普遍存在。2009年畜禽粪便资源沼气潜力约1200亿m3,其中,大中型畜禽养殖场沼气潜力为240亿m3,约合天然气135亿m3。目前沼气工程已成为环境保护和能源结构调整的一种重要手段。     

EphA3基因启动子区域定位表达及活性分析

目的构建含有不同长度EphA3基因启动子片段的报告基因载体,研究其在293T细胞和MEF细胞中的转录活性。方法以Balb／C小鼠基因组DNA为模板,扩增不同长度的EphA3基因启动子片段,并克隆进入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic真核表达载体内。酶切鉴定及基因测序无误后,将重组质粒和pRL—CMV内对照质粒共转染293T和MEF细胞,分析不同长度的OhA3基因启动子片段的转录活性。结果酶切和测序鉴定表明表达载体构建成功,EphA3基因的核心启动子区域位于-279bp～＋110bp之间,在293T细胞和MEF细胞中其转录活性相似。结论成功构建了荧光素报告基因重组质粒,并确定了BphA3基因的核心启动子区域。