甲基苯丙胺成瘾的表观遗传学机制

苯丙胺类兴奋剂是全世界第二大滥用程度的药物,甲基苯丙胺作为苯胺类兴奋剂中的主要药物,是中国滥用的“头号毒品”。而现有的研究对甲基苯丙胺成瘾机制尚不清晰,且临床上对药物成瘾的治疗依然存在无药可医的局面。因此,发现新的成瘾机制和治疗策略尤为迫切。甲基苯丙胺成瘾与额前叶皮质（mPFC）、中脑腹侧被盖区（VTA）和伏隔核（NAc）中的多巴胺（DA）、谷氨酸（Glu）、去甲肾上腺素（NE）和血清素（SNRIS）等神经递质的异常释放有关。研究表明,这些神经递质受到表观遗传机制中组蛋白乙酰化、甲基化、泛素化和非编码RNA等调节,某些基因的表达在甲基苯丙胺的诱导过程中增强或被抑制,导致甲基苯丙胺依赖性产生。本文将针对表观遗传学对甲基苯丙胺成瘾机制的影响进行着重论述,以期推进临床开发甲基苯丙胺戒断药物的研究。     

尼氟灭酸通过钙库钙释放引起豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞超极化

本研究旨在观察氯离子通道阻断剂尼氟灭酸（niflumic acid,NFA）引起豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞产生超极化的机制。以豚鼠为实验动物,运用细胞内微电极和全细胞膜片钳记录技术,观察NFA和其它药物对急性分离的耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞的作用。结果显示：NFA、indanyloxyacetic acid94（LAh-94）和diSOdium4,4’-diisothiocyanatostilbene-2,2’-disulfonate（DIDS）可使低静息膜电位的细胞产生超极化,但对高静息膜电位的细胞无明显作用。低静息膜电位细胞的平均静息电位为（-42．47±1．38）mV（n=24）,100μmol／LNFA、10μmol／LIAA-94和200μmol／LDIDS分别使细胞超极化至（13．7±4．3）mV=9,P〈0．01）,（11．4±4．2）mV（n=7,P〈0．01）和（12．3±3．7）mV（n=8,P〈0．01）,这种氯离子通道阻断剂引起细胞超极化反应的效应呈浓度依赖性。NFA引起的超极化和外向电流几乎完全被100nmol／L iberiotoxin、100nmol／L charybdotoxin、10mmol／L tetraethylammonium、50μmol／LBAPTA—AM、10μmol／Lryanodine和0．1-10mmol／Lcaffeine阻断,但不能被100μmol／Lnifedipine、100μmol／LCdCI,和无Ca^2＋灌流外液阻断。结果捉示：氯离_了通道的阻断剂NFA可通过平滑肌细胞内钙库的钙释放增加细胞内钙,进而激活钙依赖的钾通道,产生耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞的超极化反应。     

限制性内切酶Mlu I蛋白及其硒代衍生物的制备

[背景]限制性内切酶Mlu I是一种常用的工具酶,在分子生物学领域发挥着重要的作用,其三维结构尚未被解析.[目的]在大肠杆菌中克隆表达、纯化重组Mlu I蛋白及其硒代蛋白,并进行结晶条件的研究.[方法]构建重组表达载体pET28b-Mlu I,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达,利用亲和层析和凝胶过滤层析...     

基因型和环境及其互作效应对小麦品质的影响及品质稳定性分析

分析基因型、环境及其互作对小麦品质性状的影响。对两年度3个试点13个小麦品种的16个主要品质性状进行分析。结果表明:品质性状在不同小麦品种及不同试点间皆存在显著差异,其中硬度、PPO活性、AWRC、稀懈值的变异系数较大;膨胀势、最终粘度、峰值粘度的变异系数较小;糊化温度、碱性水保持力、峰值时间、蛋白质含量、湿面筋含量的环境效应大于基因型效应;SDS沉降值、PPO活性、黄色素含量、膨胀势、峰值粘度、保持粘度、稀懈值、最终粘度、回升值、Zeleng沉降值、硬度的基因型效应大于环境效应,保持粘度这一品质性状基本上不受环境影响,比较稳定。     

高效毛细管电泳分离多种植物激素的方法研究

建立了高效毛细管电泳法分离测定茶叶中赤霉素(GA)、吲哚-3-乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、吲哚-3-丁酸(IBA)、细胞分裂素(CTK)等5种植物激素的分析方法。采用正交试验设计对高效毛细管电泳方法中的运行电压、缓冲液pH值和添加剂SDS浓度等分离条件进行优化,结果发现在30 mmol/L H3BO4-KH2PO4、40 mmol/LSDS组成的pH9.0缓冲液中,选择18 kV电压,25℃柱温和200 nm波长,可在11 min以内实现茶叶中5种激素的分离检测。本方法具有较高的灵敏度,5种激素的相关系数r=0.9907～0.9974,加标回收率为78.06%-95.5%,变异系数≤1.8%。利用本方法测定了茶叶不同部位的5种植物激素的含量变化。     

猪流行性腹泻病毒经其附属蛋白抑制细胞凋亡

【背景】orf3位于猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) s基因与e基因之间,是目前发现的PEDV唯一一个附属基因,编码附属蛋白(ORF3蛋白)。我们前期研究初步发现ORF3蛋白对PEDV诱导的细胞凋亡有影响。【目的】研究ORF3蛋白在PEDV侵染复制过程中的毒力作用机制。【方法】实验用3种PEDV:rDR13att-?ORF3 (orf3基因全部敲除)、DR13-ORF3att (携带有C端截短orf3)、rDR13att-ORF3wt(携带全长orf3基因)感染Vero细胞,观察病变情况,再用活细胞成像仪、流式细胞仪、 DNA断裂的原位末端标记法[terminaldeoxynucleotidyltransferase(TDT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL]等方法检测不同感染时间点的细胞凋亡情况,然后用蛋白质印迹方法分析PEDV感染宿主细胞中主要凋亡相关蛋白(如Caspase-3)的活化或裂解,最后进行转录组测序研究病毒感染细胞中差异基因的表达情况,再用荧光定量PCR验证转录组结果。【结果】rDR13att-?ORF3引起较多的细胞病变,活细胞成像仪的动态观察结果显示,3种病毒侵染的细胞凋亡水平随着时间的延长均高于正常阴性细胞,但敲除orf3的病毒感染细胞后细胞凋亡率比其他两种病毒更高;敲除orf3病毒感染细胞凋亡率显著高于其他两种病毒;病毒rDR13att-?ORF3感染细胞后TUNEL阳性细胞数比DR13-ORF3att和rDR13att-ORF3wt更多;表达ORF3蛋白的重组PEDV可以抑制Caspase-3的活化;ORF3蛋白对受感染细胞Heat shock 70 kD protein 1B (HSP70)基因转录有促进作用,荧光定量PCR结果表明rDR13att-ORF3wt感染细胞的HSP70表达量高于rDR13att-?ORF3感染细胞。【结论】PEDV通过ORF3蛋白抑制细胞凋亡,而且这种作用可能是通过抑制Caspase-3的活化或增加HSP70的产生来完成的。     

猪流行性腹泻病毒S蛋白胞内区线性B细胞表位最小基序鉴定

【背景】S蛋白是猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)的主要结构蛋白和免疫原性蛋白,在前期的研究中,本课题组在S蛋白的胞内区鉴定到2个包含线性B细胞表位的短肽。【目的】鉴定PEDV S蛋白胞内区线性B细胞表位的最小基序。【方法】原核表达2个短肽的每次后移1个氨基酸的系列8肽,以兔抗S蛋白血清为一抗,通过Western Blot筛选阳性反应8肽,鉴定S蛋白胞内区线性B细胞表位的最小基序。【结果】S蛋白胞内区的2个包含线性B细胞表位的短肽共享一个表位,该表位的最小基序为¹³⁷¹QPYE¹³⁷⁴。同源性分析显示该B细胞表位基序为保守性表位。【结论】确定了S蛋白胞内区线性B细胞表位的最小基序为¹³⁷¹QPYE¹³⁷⁴;S蛋白抗原表位的鉴定有助于提高对其结构和功能的理解。     

Heterozygosity Mapping of Partially Congenic Lines: Mapping of a Semidominant Neurological Mutation, Wheels (Whl), on Mouse Chromosome 4

We identified a semidominant, chemically induced, mouse mutation with a complex array of abnormal behaviors including bidirectional circling and hyperactivity, abnormal circadian rhythmicity and abnormal responses to light. In this report, we genetically and phenotypically characterized the circling/waltzing component of the abnormal behavior. We mapped the locus controlling this trait by heterozygosity mapping of partially congenic lines carrying the mutagenized chromosome outcrossed to different inbred strains for three generations. Analysis of 68 PCR-based markers in 13 affected individuals indicated that the mutant locus, named Wheels (Whl), resides in the subcentromeric portion of mouse chromosome 4. The statistical evaluation of data obtained by heterozygosity mapping validates this efficient mapping approach. Further characterization of the Whl mutation demonstrated that Whl/Whl homozygotes die during embryonic life and that the penetrance of circling behavior depends on genetic background. Morphological analysis of the inner ears of Whl/+ mice revealed a variable number of abnormalities in the sensory and nonsensory portions of their semicircular canals. Abnormalities ranged from slight atrophy of one or more cristae to complete absence of the lateral crista and canal. The molecular characterization of the gene disrupted in the Whl mutation will provide insight into developmental mechanisms involved in inner ear formation.     

Effect of osmotic shock on the redox system in plasma membrane of Dunaliella salina

The unicellular halotolerant alga Dunaliella salina had the ability to oxidize NADH and reduce Fe(CN)6^3-.The redox reactions were to some extent stimulated by slight hyperosmotic shock (2.0mol/L→2.6mol/L NaCl),but markably inhibited by abrupt hyperosmotic shock (2.0mol/L→3.5mol/L NaCl) and hypoosmotic shock (2.0mol/L→1.0mol/L NaCl;2.0mol/L→0.67mol/L NaCl).With the adaptation of algal cells to osmotic shock by accumulating or degraging intracellular grycerol,the plasmalemma redox activities were also restored.The O2 uptake stimulated by NADH could be promoted by FA and SHAM.Hypoosmotic shock increases the basal respiration rate of alga cells,but weakened the stimulating effects of NADH,FA and SHAM on O2 uptake.On the other hand,hyperosmotic shock reduced the basal respiration rate,but relatively enhanced the above effects of NADH,FA and SHAM.H^ extrusion of alga cells was inhibited by NADH and stimulated by Fe(CN)6^3-.Vanadate and DES could inhibit H^ efflux,but had little effect in the presence of NADH and Fe(CN)6^3-.Both hyperand hypoosmotic shock stimulated H^ extrusion.This effect could be totally inhibited by vanadate and DES,but almost unaffected by 8-hydroxyquinoline.It was suggested that H^ -ATPase probably played a more important role in H^ extrusion and osmoregulation under the conditions of osmotic shock.