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采用蛋白组学技术分析质粒介导siRNA的“Off-target”效应 总被引:1,自引:0,他引:1
周昌华章崇杰彭晓东魏大鹏王光迪 《中国生物化学与分子生物学报》2010,26(2):170-180
siRNA的"脱靶效应"(off-target effects)是RNA干扰应用研究领域的热点问题.采用蛋白组学技术对质粒介导的siRNA稳定沉默原癌基因c-myc可能存在的"off-target"效应进行初步研究,为siRNA靶向特异性的系统评价奠定理论与实验基础.构建靶向c-myc的siRNA真核表达质粒p-Mat01-1及其错配质粒p-Mis09-1,空质粒pEGFP-C1为对照,并稳定转染MCF-7人乳腺癌细胞.通过RT-PCR和Western印迹分析结果显示p-Mat01-1稳定转染克隆中c-myc/c-MYC的表达降低.采用2-DE及LC-ESI-MS/MS等方法,研究了p-Mat01-1与pEGFP-C1稳定转染克隆的蛋白组表达差异.结果显示,p-Mat01-1稳定转染克隆中有47个c-myc非调控蛋白点表达升高或降低,约占423个随机检测蛋白点的11.1%.这些蛋白涉及细胞骨架、代谢、增殖、信号传导、分子伴侣、氧化还原等多条途径.实验结果表明,质粒介导靶向c-myc的siRNA在MCF-7细胞中存在明显的"off-target"效应,提示在设计siRNA实验及应用研究时应系统考察其靶向特异性. 相似文献
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香蕉束顶病毒基因Ⅰ的克隆及序列分析 总被引:5,自引:0,他引:5
以中国漳州地区感染BBTV的香蕉组织总DNA为模板,根据我国台湾地区BBTV分离物基因组Ⅰ序列,设计并合成了一对引物,通过PCR扩增出约500bp的片段。利用pBluescriptⅡSK T-载体获得此片段的克隆,经测序表明为BBTV组分Ⅰ的部分序列。由已测知的BBTV基因组Ⅰ序列设计一对相邻引物,以我国漳州的感染BBTV香蕉组织总DNA为模板,通过PCR坟增出约1.1kb的片段。利用pBlues 相似文献
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