调控KIF1A二聚化和活性的潜在的磷酸化位点

驱动蛋白kinesin-3家族中的KIF1A蛋白主要参与轴突上分泌囊泡前体的正向运输.KIF1A中的CC1-FHA片段能够形成稳定的二聚体结构,同时促进驱动蛋白的活性,但是其具体的调节机制尚未清楚.基于已有的CC1-FHA二聚体的晶体结构,我们发现在二聚体表面的"487SPKK490"位置存在潜在的磷酸化位点.证明了将487位点模拟磷酸化后将导致CC1-FHA二聚体的解聚.进一步,在487位点进行点突变将影响KIF1A的活性以及线虫中KIF1A介导的突触囊泡在轴突上的运输.因此,高度保守的"487SPKK490"可能对CC1-FHA片段二聚化和调节KIF1A活性起着关键性作用.     

薏苡仁油回流提取工艺参数优化及其动力学研究

探索加热回流法提取薏苡仁油的最佳工艺条件,并对提取过程进行深入探讨。采用单因素法考察溶剂、料液比、药材粒径、提取时间等对薏苡仁油提取率的影响,在此基础上研究其提取动力学。结果表明薏苡仁油较佳的提取条件为采用丙酮作为溶剂,液固比7倍,药材平均粒径0.25 mm,提取3 h。动力学研究表明,粒径较小时(0.25~0.83 mm),薏苡仁油的提取动力学符合二阶溶出动力学模型,即减小药材粒径,可明显增加有效成分的提取率。     

硫酸乙酰肝素3-O硫酸基转移酶5的表达、纯化及酶学性质研究

经过PCR克隆得到硫酸乙酰肝素3-O硫酸基转移酶5(3-OST-5)的基因,将其与大肠杆菌表达载体pET-15b连接后,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,使用镍亲和层析柱纯化得到具有活性的3-OST-5。经测定纯化后的3-OST-5比活达到0.58 U/mg,是纯化前的5.27倍,回收率达80.4%。在此基础上,研究了该酶的酶学性质,酶反应的最适温度为35℃,稳定范围为20-40℃;最适pH为7.0,在pH7.0-9.0范围内稳定。在反应液中加入终浓度为1 mmol/L的K+、Ca2+、Ba2+对酶促反应有一定的促进作用。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬体与结核分枝杆菌相互作用的研究

目的:检测LC3在肺泡Ⅱ型上皮细胞A549上的表达情况,及结核分枝杆菌刺激后对其表达的影响,探讨自噬在结核分枝杆菌感染上皮细胞中所起的作用。方法:体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,在结核分枝杆菌感染A549细胞0h,24h分别提取RNA,采用RT-PCR的方法检测LC3mRNA的表达情况。采用凋亡坏死染色试剂盒在结核分枝杆菌感染24h后检测对照组,3-MA组,MTB组和3-MA+MTB组的细胞坏死情况。在结核分枝杆菌感染A549细胞4h,8h,16,24h采用Non-Radioactive Cytocity Assay的方法检测对照组,3-MA组,MTB组和3-MA+MTB组上清液LDH的OD值。结果:LC3在肺泡Ⅱ型上皮细胞显著表达,结核分枝杆菌感染后LC3表达降低。细胞凋亡和坏死染色结果显示空白组和3-MA组没有明显差异(P>0.05),MTB组和3-MA+MTB组有明显差异(P<0.05)。LDH检测显示MTB组和3-MA+MTB组上清液LDH的OD值数据两两之间有明显差异(P<0.05)并且有时间依赖性。结论:肺泡II型上皮细胞自噬体在抵抗结核分枝杆菌的感染过程中起一定的作用。     

鲤鱼汤对阿霉素肾病大鼠肾组织TGF-β1及下游因子表达的影响

本研究探讨鲤鱼汤利尿消肿拮抗肾纤维化保护肾脏的分子机制。阿霉素6.2 mg/kg尾静脉单次注射制备ADRN模型,2 W后干预连续7 W。检测尿、血生化指标,光镜电镜观察肾组织形态变化,免疫组化检测转化生长因子β1(TGF-β1)及下游因子表达。结果发现模型组较对照组12 h尿量(12 h-Uv)减少,血白蛋白(Alb)降低,肾小球硬化指数(GSI)及间质损伤指数(TII)升高,肾组织Smad7表达下调,转化生TGF-β1、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)、I型胶原(Col-I)表达上调;鲤鱼汤组较模型组12 h-Uv增加,血Alb升高,GSI及TII下降,肾组织Smad7表达上调,TGF-β1、FSP-1、Col-Ⅰ表达下调。表明鲤鱼汤的肾保护作用至少部分与其利尿消肿、调节TGF-β1/Smad7信号通路、抑制上皮细胞转分化(EMT)及细胞外基质沉积(ECM)有关。     

不同生境下荒漠植物红砂-珍珠猪毛菜混生根系的垂直分布规律

植物种间相互作用及其对环境胁迫的响应一直是物种共存和生物多样性维持研究的一个热点, 从地下根系入手来探讨混生群落植物种间关系及其对环境胁迫响应的研究少见报道。该文以荒漠草原区(灵武)、典型荒漠区(张掖)和极端荒漠区(酒泉) 3个不同生境条件下单生与混生红砂(Reaumuria soongarica)和珍珠猪毛菜(Salsola passerina)为实验材料, 采用分层取样法对其垂直根系参数进行测定和分析, 探讨了两种植物根系分布对混生及荒漠环境梯度的响应。结果表明: 同一生境条件下, 混生红砂和珍珠猪毛菜比根长和比表面积均高于单生, 说明红砂、珍珠猪毛菜混生后其根系相互作用关系表现为互惠, 促进了植株对土壤养分和水分的吸收。不同生境条件下, 同一生长方式的红砂根系分布深度均大于珍珠猪毛菜, 且根系消弱系数也普遍高于珍珠猪毛菜, 说明二者在不同生境条件下占据不同生态位, 红砂表现为深根性, 根系位于土壤深层, 珍珠猪毛菜表现为浅根性, 根系分布于土壤浅层。随着荒漠环境胁迫增强, 单生和混生红砂与珍珠猪毛菜的比根长和比表面积均呈现出极端荒漠区>典型荒漠区>草原荒漠区的规律, 且生境越干旱, 混生群落根系分离越明显; 单生与混生红砂根系消弱系数也逐渐增大, 在极端干旱区达到最大值, 珍珠猪毛菜变化不大, 表明红砂-珍珠猪毛菜混生群落根系生态位分离随荒漠环境胁迫增强而加大, 验证了环境胁迫梯度假说。可见“地上聚生, 地下分离”的混生方式可能是红砂-珍珠猪毛菜混生群落适应干旱胁迫环境的生长策略。     

江西阳际峰自然保护区陆生贝类物种多样性

2007年11月～2008年5月调查了江西阳际峰自然保护区陆生贝类资源,共采得陆生贝类47种(含2个未定种),隶属13科27属,其中16种为江西省陆生贝类新纪录种.区系分析表明,该保护区陆生贝类以东洋界成分为主,占种类总数的63.83%.其优势种为墙草真管螺和同型巴蜗牛.分析11个采集点生物多样性指数结果表明,Margalef丰富度指数(dMA)范围为0～6.2345;Shannon-Wiener多样性指数( H ′)范围为0～3.5676;Pielou均匀度指数( Jsw )范围为0～1.3610.环境越复杂,种类组成越丰富;物种分布越均匀的地区,陆生贝类多样性指数就越高.     

FEN—1基因反义阻断细胞株（FL—FEN—1^—）的建立

ＦＥＮ－１是一咱结构特异性核酸酶,它在ＤＮＡ复制和修复过程中都起着重要的作用。将ＦＥＮ－１基因的ＮｃｏＩ－ＢａｍＨＩ片段反向克隆到哺乳动物细胞重组表达质粒ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐ＾－中,得到ＦＥＮ－１反义表达质粒ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐ＾－ＦＮＢ＾－,并转染ＦＬ细胞,经Ｇ４１８筛选后,获得ＦＥＮ－１基因表达被阻断的哺乳动物细胞ＦＬ－ＦＥＮ－１＾－。对细胞生长曲线的测定发现,ＦＬ－ＦＥＮ－１＾－在地塞米松的     

组织学与胚胎学PBL教学对学生创新能力的培养

中国医科大学组织学与胚胎学教研室承担了CMB03-#793项目,连续五年在临床医学七年制日文班实施了PBL（problem based learning）的教学模式,根据其教学特点确立了组织学与胚胎学（组胚）PBL教程,编写了＂组织学与胚胎学PBL病例集＂并制作了多媒体课件。学生在PBL中受到启发,激发了主动学习积级性,也制作了多媒体课件。同学课下查阅文献,准备资料。讨论病例分组进行,同学主持。大家踊跃发言,举证说明,用学得的知识,联系组胚理论去解释生命现象并和疾病相联系。我们对实施过PBL教学的几个年级的学生257人进行了追踪问卷调查,结果看出得到明显提高的依次是学生的主动学习的能力,独立查阅资料的能力、拓宽知识面、对相关领域感兴趣、分析解决问题的能力及对知识的理解能力。提高的相关指标就是创新思维的基础和前提。学生拓宽了知识面、开阔了视野,自然就会产生兴趣迸发出学习的生机去主动思维,也就有了分析解决问题的能力。由此产生不同以往的看法和想法,有了新的认识、新的观点和新的所为,丰富的想像力就会迸发出创造力,这些就是创新的萌芽。这是PBL教学带给学生的新的理念。刷新理念将会产生更多的创新。     

天麻栽培用蜜环菌的遗传多样性、生长和水解酶

蜜环菌Armillaria是一种广泛分布的担子菌,是栽培中药天麻所必须的共生菌。为揭示我国天麻栽培用和鄂西地区部分野生蜜环菌资源的遗传多样性和生物学特性,本文收集了9个省市EF-1-α的19个蜜环菌商品菌株和鄂西地区20株野生蜜环菌菌株,以IGS、ITS和elongation factor-1-alpha（EF-1-α）为分子标记对这些菌株进行系统发育与遗传多样性分析,并对影响与天麻共生的生物学特性（菌索发育和胞外水解酶活性）进行对比研究。结果表明,这19株蜜环菌商品菌株分别归属于2个clade。其中,有18个菌株聚在cladeⅢ,说明不同来源的蜜环菌商品菌株之间系统发育关系很近;通过对蜜环菌的系统发育、菌索生长以及胞外水解酶活性的研究,总体上商品种优于鄂西的野生蜜环菌生物种。从鄂西野生蜜环菌中筛选出4个具有潜在栽培价值的菌株。本研究为天麻栽培生产中蜜环菌菌种的选择提供参考。