Sequential expression of mRNA-encoded keratin sets in neonatal mouse epidermis: basal cells with properties of terminally differentiating cells

The keratin pattern of newborn mouse epidermis was investigated during terminal differentiation. In highly pure fractions of basal and suprabasal cells, obtained by Percoll density gradient centrifugation, we identified two sets of mRNA-encoded proteins: a basal set of 58.5, 52, and 47 kd subunits and a suprabasal set of 67 and 60 kd subunits. The large subunits of each set were alkaline to neutral, while the small subunits were acidic. Polyclonal antibodies against the suprabasal, acidic 60 kd protein and the basal, alkaline 58.5 kd protein selectively recognized their antigens in immunoblots of NEPHGE -resolved keratins and decorated the corresponding epidermal compartments in frozen sections. The antibody to the suprabasal 60 kd protein also recognized distinct cells in the basal cell layer. Quantification of this cell population revealed a 10% cell fraction, morphologically indistinguishable from the total cell population, that, in addition to expressing basal keratin proteins, was already synthesizing suprabasal keratin subunits.     

Combinatorial synthesis of carbohydrates.

Combinatorial chemistry principles have been applied to the generation of oligosaccharide libraries, both in solution and on the solid phase, with a view to producing inhibitors of carbohydrate-protein binding. The rich stereochemistry and high degree of functionalization of sugars has also resulted in their increasing use in the synthesis of glycomimetics and as scaffolds for the presentation of pharmacophore groupings to receptors that are noncarbohydrate-recognizing proteins.     

A novel membrane-associated threonine permease encoded by the tdcC gene of Escherichia coli.

A novel L-threonine transport system is induced in Escherichia coli cells when incubated in amino acid-rich medium under anaerobic conditions. Genetic and biochemical analyses with plasmids harboring mutations in the anaerobically expressed tdcABC operon indicated that the tdcC gene product was responsible for L-threonine uptake. Competition experiments revealed that the L-threonine transport system is also involved in L-serine uptake and is partially shared for L-leucine transport; L-alanine, L-valine, and L-isoleucine did not affect L-threonine uptake. Transport of L-threonine was inhibited by the respiratory chain inhibitors KCN and carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone and was Na+ independent. These results identify for the first time an E. coli gene encoding a permease specific for L-threonine-L-serine transport that is distinct from the previously described threonine-serine transport systems. A two-dimensional topological model predicted from the amino acid composition and hydropathy plot showed that the TdcC polypeptide appears to be an integral membrane protein with several membrane-spanning domains exhibiting a striking similarity with other bacterial permeases.     

Restrictions of developmental capabilities in neural crest cell derivatives as tested by in vivo transplantation experiments

The behavior of neural crest cells from various origins and of neural crest derivatives were investigated when they were transplanted into a host embryo as supernumerary crest structures. They were inserted into the dorsal trunk between the neural primordium and the somites. In this situation the grafted cells (of quail origin) migrated in the chick host and could be recognized any time after the graft by the structure of their nucleus. After a migration phase, they became exclusively localized in the various sites of arrest of neural crest cells and were found mixed with host crest cells. Their localizations varied according to their origin and their developmental stages at grafting time. Cells of autonomic ganglia (ciliary and sympathetic) had a definitive localization restricted to the autonomic structures of the host. They differentiated into adrenergic or cholinergic cells irrespective of their sympathetic or parasympathetic origin, according exclusively to their localization in the host. They were practically never found in the host dorsal root ganglion (DRG). In contrast, the developmental potentialities of DRG cells are broader and, as far as peripheral nervous system potentialities are concerned, they behave like neural crest cells, i.e., they gave rise to both sensory and autonomic neurones plus adrenomedullary cells. A model for cell line segregation from the neural crest is proposed. Several aspects of this model need further analysis, others are based on well-established experimental data.     

Über die Kultur von Empusa muscae Cohn und anderen Entomophthoraceen auf kalt sterilisierten Nährböden

Zusammenfassung Die Entomophthoraceen, deren Züchtung mit Ausnahme vonBasidiobolus ranarum außerhalb ihres Wirts als Saprophyten bisher keine befriedigenden Ergebnisse lieferte, wachsen auf enzymatisch tätigen Nährböden wie z. B. auf kalt sterilisierter Fleischwassergelatine mit Blut- oder Serum-Zusatz besonders gut und schließen ihre Entwicklung dort wie in der freien Natur im Wirt unter üppiger Fruktifikation normal ab, so daß einige Vertreter dieser Familie in größerem Maßstabe kultiviert ohne weiteres zur biologischen Schädlingsbekämpfung herangezogen werden können.Neben der enzymatischen Tätigkeit des Nährbodens, von welcher das Gedeihen der bisher untersuchten Pilze der GattungEmpusa undEntomophthora ebenso wie das der meisten anderen Parasitärpilze in der künstlichen Kultur in erster Linie abhängig ist, spielt hier die Fetternährung während der ersten Entwicklungsphase eine große Rolle. Fehlt die eine der beiden Bedingungen, so verkümmern die betreffenden Pilze in der Kultur rasch, und es kommt in keinem von beiden Fällen zur Konidienbildung. Als weiterer für die Ernährung durchaus notwendiger Stoff ist neben dem Fett das d-Glykosamin, ein Chitinbaustein, zu nennen. Der Fettresorption geht eine Spaltung des Fettes durch lipolytische Pilzektoenzyme voran, welche im alkalischen Bereich verläuft und unter selbsttätigem Umschlag der Nährbodenreaktion von sauer zu alkalisch, um nach der Spaltung und der Fettresorption allmählich wieder sauere Reaktion anzunehmen. Dieser intermediäre Umschlag von sauer zu alkalisch ist bei Anwendung heiß sterilisierter Nährböden fast völlig gestört, wodurch die Fettspaltung und darauffolgende Fettresorption, der Zerfall des vielzelligen und reichverzweigten Mycels in die Hyphenkörper und somit auch die Konidienbildung verhindert wird.Die Konidien sind unmittelbar nach dem Abschleudern keimfähig, verlieren aber ihre Keimfähigkeit schon nach Verlauf von 3–5 Tagen.Die Dauersporen (Azygosporen und Zygosporen) derEmpusa- undEntomophthora-Pilze bedürfen erst eines besonderen Reizes, ehe sie keimen. Da dieselben mit wenigen Ausnahmen (Entomophthora aphidis Hoffm.) als Überwinterungsform nur innerhalb des Wirtskörpers angelegt werden, ist die Entstehung einer neuen Generation aus ihnen in der freien Natur erst möglich, wenn sie, durch den Zerfall des Wirtskörpers in Freiheit gesetzt, weitere Verbreitung finden und wiederum auf den ihnen entsprechenden Wirt gelangen können. Die Keimfähigkeit wird während der Winterruhe erlangt und hängt eng mit der bakteriellen Zersetzung des Wirtskörpers oder vielmehr von dessen Chitingerüst durch chitinabbauende Mikroben zusammen, von welchen der Reiz als Enzymwirkung auf die Dauersporen ausgeht. Der Reizvorgang ist ein rein biokatalytischer und kann im Laboratorium unter Zuhilfenahme von Reinkulturen chitinspaltender Mikroben naturgetreu nachgeahmt werden, wobei ganz besonders die Wechselwirkung verschiedener Enzymkatalysatoren als Aktivatoren und Antienzyme zum Ausdruck kommt. Die enzymatischen Vorgänge können auch in der künstlichen Kultur durch keine anderen Reaktionen wie etwa durch Stimulationsmittel rein chemischer Art ersetzt werden, so daß die Notwendigkeit eines bakteriellen Einflusses bei der Fortpflanzung durch Dauersporen kaum klarer dargetan werden kann.Mit 18 Textabbildungen.     

Chromosomal in situ hybridization with double-labeled DNA: signal amplification at the probe level.

A double-labeling approach was applied to nonisotopic in situ hybridization with individual cosmid and plasmid clones, using digoxigenin or biotin as label and a combination of two separate enzymatic labeling methods. Probe labeling was achieved by nick translation, followed by tailing of the probe by terminal deoxynucleotidyl transferase. The double-labeling method, in conjunction with an improved detection protocol, provides for a higher signal intensity than that obtainable with single-labeled probes.     

Identification and genetic characterization of the Pseudomonas aeruginosaleuB gene encoding 3-isopropylmalate dehydrogenase

The Pseudomonas aeruginosa leuB gene, encoding 3-isopropylmalate dehydrogenase, was identified upstream of asd, encoding aspartate-β-semialdehyde dehydrogenase. Genetic analysis indicated that leuB is identical to the previously mapped gene defined by the leu-10 allele. The chromosomal leuB locus was inactivated by gene replacement. The insertions had no adverse effect on expression of the downstream asd gene but resulted in leucine auxotrophy. The leuB gene encodes a protein containing 360 amino acids (with a molecular weight of 39153), which was expressed in Escherichia coli as a M, 42000 protein. The results suggested that, in contrast to the situation in other bacteria (E. coli, Salmonella typhimurium and Bacillus subtilis) the P. aeruginosa leuB gene is physically separated from the genes encoding the other enzymes of the isopropylmalate pathway. Received: 15 August 1996 / Accepted: 23 October 1996