Active expression of Gγ globin gene on chromosome 11 with Yunnanese (Ayγδβ)~0-thalasseinia deletion in MEL cells

A permanent lymphocyte cell line of a heterozygote with Yunnanese (Aγδβ)0-thalassemia deletion, associated with an increased production of Cry globin in adult, was founded using Epstein-Barr virus transformation. The hybrids of the lymphocyte cell and mouse erythroleukemia cell (MEL) were achieved and the hybrids containing human chromosome 11 were selected with the monoclonal antibody 53/6. The subclones containing only either the normal or the abnormal human chromosome 11 were separated and the expression of the human globin genes was studied. Expression of the β-globin gene, but not the Cγ and Aγ, was observed in the hybrids containing only the normal human chromosome 11, while active expression of the Cγ globin gene was observed in the hybrids containing only the abnormal human chromosome 11. These results have confirmed that the DNA deletion in the β-globin gene cluster is the cause of persistent active expression of the Cγ globin gene in the Yunnanese mutant.     

低分子肝素的绿色荧光蛋白荧光标记及其活性检测

增强型绿色荧光蛋白（EGFP）是生物领域常用的标记物. 本实验首先利用高碘酸法活化低分子肝素（LMWH）,与EGFP连接得到LMWH EGFP.然后用Sephacryl S-200 HR对其进行初步分离,再用Sephadex G-10 HR进行脱盐纯化. 采用Sephacryl S 200 HR检测LMWH EGFP的纯度,为单一对称峰. 经检测,LMWH-EGFP具有良好的热稳定性和耐碱性. 通过荧光分光检测器检测LMWH-EGFP的λEx为488 nm,λEm为509 nm. 通过抗凝实验发现LMWH EGFP仍具有抗凝活性. 本实验建立了LWMH荧光标记的方法,为多糖的荧光标记提供了新的选择.     

南京地区外来植物一年蓬上访花昆虫的多样性及其访花选择性的影响因素分析

为揭示外来植物一年蓬Erigeron annuus上的本土访花昆虫多样性和影响访花行为的因素, 本研究在南京郊区进行了连续2年的野外调查, 采用跨栏模型分析了环境因素如何影响昆虫的访花选择性, 即接受概率（测度是否接受一年蓬花）和访问频数（测度接受一年蓬花的程度）。调查发现, 访问一年蓬花的昆虫共计9目54科145种, 其中, 科丰富度占优势的是膜翅目、 鳞翅目和鞘翅目（均占总科数的20.75%）, 其次是双翅目（18.87%）和半翅目（13.21%）; 物种丰富度占优势的是双翅目（26.39%）, 其次是膜翅目（18.75%）、 半翅目（18.75%）、 鞘翅目（17.36%）和鳞翅目（15.38%）。多数目的物种丰富度在6-7月最高, 9月最低, 仅双翅目（食蚜蝇为主）在5月最高。运用跨栏模型对物种优势度最大的半翅目、 膜翅目和双翅目等的访花个体数量及其影响因素的分析结果表明： 影响半翅目和膜翅目对一年蓬花访问倾向（接受概率）的因素多于影响其访问频数的因素, 由此预测这些访花昆虫可能参考较多因素做出是否接受一年蓬花, 而依据较少线索做出访问程度的访花行为决策; 一年蓬植株密度影响半翅目和膜翅目昆虫的接受概率, 而花密度影响半翅目和双翅目昆虫的接受概率和访问频数, 说明靶标植物花的特性可能对访花昆虫的访花行为决策起主要作用。     

基于植株拓扑结构的生物量分配的玉米虚拟模型

依据植物结构—功能相互作用机理,建立了能模拟玉米生长发育与形态结构建成的虚拟模型。该模型的重要部分为基于植株拓扑结构的生物量分配模块。叙述了该模块的构建原理,以2000年田间试验数据提取了玉米的发育、生物量生产和生物量分配参数。模型模拟了2001年的玉米生长发育与生物量分配过程,模拟结果与田间试验结果比较吻合。应用该模型模拟了2001年玉米不同生育阶段植株的生物量分配和各器官生物量积累动态。     

TGF-β1诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排的机制

目的：牙周病是由多种因素引起的,特别是人牙周膜细胞的缺失。转化生长因子-β1（TGF—β1）是一种多功能细胞因子,在治疗牙周病中发挥重要的作用,但很少有人清楚地研究TGF-β1对人牙周膜细胞的影响。因此,本研究的目的是探讨TGF—p1诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排的信号通路。方法：人牙周膜细胞取自健康的前磨牙,并向同步化处理的细胞中加入10ng／m1的TGF-β1,并通过相差显微镜观察它们的形态学变化。通过免疫组化和共聚焦显微镜观察F-肌动蛋白重排。用Westernblot分析蛋白表达情况。结果：我们发现TGF-β1诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排,激活ROCK蛋白的表达,并增加p-IIMK和p-cofilin的蛋白表达。ROCK抑制剂Y-27632使ROCK,p-IIMK和p-cofilin的蛋白表达下降。结论：TGF-β1可以诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排,并且是通过上凋ROCK,P．IlMK和p-cofilin的活性完成的。本研究可以增强对TGF-β1在治疗牙周疾病方面的作用机制的了解。     

小细胞肺癌发生阻塞性肺炎相关因素分析

目的通过对小细胞肺癌患者是否发生阻塞性肺炎的相关因素对比分析,了解伴有阻塞性肺炎小细胞肺癌患者临床特点。方法采用回顾性分析方法,收集2003年1月至2013年1月大连医科大学附属第二医院所收治的经组织学或细胞学确诊的小细胞肺癌患者共450例。经核查资料后,进入统计学的伴有阻塞性肺炎组100例,不伴有阻塞性肺炎组112例,均为初治。对以下因素进行分析：性别、年龄、居住环境、吸烟情况、分期、肿瘤位置、病理类型、初始疗效、NSE（神经元特异性烯醇化酶）。计数资料率和构成比的比较采用卡方检验。结果本组研究中伴有阻塞性肺炎组患者100例中,吸烟患者占76%,小细胞未分化癌患者占81%,中心型癌患者占52%,广泛期患者占57%,NSE阳性率为92%,均高于不伴有阻塞性肺炎组患者。不伴有阻塞性肺炎组的小细胞癌患者初始疗效有效率明显高于伴有阻塞性肺炎组患者。两组在性别、年龄、居住环境方面差异无统计学意义。结论伴有阻塞性肺炎组的小细胞肺癌患者NSE阳性率高于不伴有阻塞性肺炎组。吸烟是小细胞肺癌患者发生阻塞性肺炎的高危因素。阻塞性肺炎降低小细胞癌患者化疗初始疗效。     

艰难梭菌毒素B羧基端的表达与卵黄抗体制备简

目的：在大肠杆菌中可溶性表达艰难梭菌毒素B羧基端（TcdB-e）,免疫产蛋鸡,获得针对TcdB-c的卵黄抗体（IgY）。方法：人工合成TcdB-c的基因,将其克隆至pET32b（＋）载体中,转化大肠杆菌BL21（DE3）,诱导表达产物经金属螯合层析纯化,凝血酶酶切后得到目的蛋白TcdB-c;利用兔红细胞凝集和兔肠袢实验检测目的蛋白活性,用TcdB-c免疫产蛋鸡制备鸡卵黄抗体,分离纯化卵黄抗体并经ELISA测定抗体效价,用兔肠袢实验检测抗体的中和活性。结果：构建了TcdB-c的重组表达载体,诱导表达的融合蛋白相对分子质量约为79000,经凝血酶酶切后的相对分子质量约65000;目的蛋白免疫产蛋鸡后获得效价为1：20000的抗TcdB-C卵黄抗体,且该抗体可以中和TcdB-c对兔小肠的毒性作用。结论：获得了具有生物学活性的TcdB-C,并制备了针对TcdB-c的鸡卵黄抗体,为利用基因工程方法防治艰难梭菌感染打下了基础。     

医学专业学生确立自主学习观的必要性和重要性

目前,高等医学教育的主要任务是培养学生的综合能力,对于医学院校的学生来说,掌握扎实的医学基础知识至关重要。然而,大多医学专业的学生习惯于被动接受老师传授的知识,而严重缺乏主观能动性。医学知识涉及的内容广、难度大,初学者很难迅速掌握其精髓之处,因此确立一种高效的学习模式帮助医学生更好的理解并掌握专业理论是医学院校教育改革的重点。自主学习能力是现代教育学所提倡的相对于传统学习模式的一种现代化学习理念。自主学习的主体是学生,自主学习的过程要求主体发挥其主观能动性,自我督促、自我激励,以独立自主的方式完成高效的学习,帮助学生牢固地掌握专业理论,同时又可以灵活的运用在临床实践中。本文通过对自主学习的含义进行阐述,分析医学生确立自主学习观的必要性和重要性,并对如何确立自主学习观提出相应的建议,以推进我校教育体制改革的进度,进一步完善医学教育教学的质量。     

血清同型半胱氨酸、脂联素、高敏C反应蛋白水平与颈动脉内膜中层厚度在老年2型糖尿病合并脑梗死患者中的意义

目的：观察血清同型半胱氨酸（Hcy）、脂联素（APN）、高敏C反应蛋白（hs．CRP）水平与颈动脉内膜中层厚度（1MT）在老年2型糖尿病合并脑梗死患者中的意义。方法：选择2008年5月至2012年5月在我院就诊的2型糖尿病患者218例,按照是否合并脑梗死分为糖尿病伴脑梗死组（105例）和单纯糖尿病组（113例）。选择同期健康体检者30例为健康对照组。观察三组血清Hcy、APN、hs—CRP和IMT的水平变化。结果：糖尿病伴脑梗死组和单纯糖尿病组的血清Hcy、hs—CRP和IMT的水平均较正常对照组明显提高（P〈0．01）,糖尿病伴脑梗死组以上指标显著高于单纯糖尿病组（P〈0．01）;而糖尿病伴脑梗死组和单纯糖尿病组的血清APN的水平较正常对照组明显降低（P〈0．01）,糖尿病伴脑梗死组血清APN的水平较单纯糖尿病组显著降低（P〈0．01）。血清Hcy和hs—CRP水平随着1MT的严重程度增加而升高（P〈0．01）,而APN水平随着IMT严重程度升高而降低（P〈0．01）。结论：糖尿病伴脑梗死的患者大血管病变较单纯糖尿病患者更为严重,颈动脉IMT与Hcy和hs—cRP呈正相关,而与APN呈负相关。     

原代小鼠肝脏细胞的高效分离纯化与培养

目的：建立一种能稳定获得高活力和高纯度原代小鼠肝脏细胞的分离、纯化及培养方法。方法：应用改良的Seglen 二步法原位灌注和机械离心分离肝脏细胞,并用改良的高糖DMEM培养基进行培养。台盼蓝拒染法检测接种时肝脏细胞的存活率,倒置显微镜动态观察肝脏细胞形态变化,应用免疫荧光技术对肝脏细胞进行Albumin 染色。结果：每只小鼠可获取肝脏细胞的总产量平均为1.35× 10^6 / g体重,肝脏细胞存活率＞ 90%。倒置显微镜下观察贴壁前肝细胞直径为35.14 滋m± 4.35 滋m,肝脏细胞在接种后3 h基本完成贴壁;肝脏细胞接种后24h,所有肝脏细胞均强阳性表达成熟肝脏细胞标志物Albumin,肝细胞纯度＞ 95%。结论：改良的分离纯化及培养方法能稳定获得高产量、高活率及高纯度的小鼠肝脏细胞。