Enhanced therapeutic anti-tumor immunity induced by co-administration of 5-fluorouracil and adenovirus expressing CD40 ligand

Bystander immune activation by chemotherapy has recently gained extensive interest and provided support for the clinical use of chemotherapeutic agents in combination with immune enhancers. The CD40 ligand (CD40L; CD154) is a potent regulator of the anti-tumor immune response and recombinant adenovirus (RAd)-mediated CD40L gene therapy has been effective in various cancer models and in man. In this study we have assessed the combined effect of local RAd-CD40L and 5-fluorouracil (5-FU) administration on a syngeneic MB49 mouse bladder tumor model. Whereas MB49 cells implanted into immunocompetent mice responded poorly to RAd-CD40L or 5-FU alone, administration of both agents dramatically decreased tumor growth, increased survival of the mice and induced systemic MB49-specific immunity. This combination treatment was ineffective in athymic nude mice, highlighting an important role for T cell mediated anti-tumor immunity for full efficacy. 5-FU up-regulated the expression of Fas and immunogenic cell death markers in MB49 cells and cytotoxic T lymphocytes from mice receiving RAd-CD40L immunotherapy efficiently lysed 5-FU treated MB49 cells in a Fas ligand-dependent manner. Furthermore, local RAd-CD40L and 5-FU administration induced a shift of myeloid-derived suppressor cell phenotype into a less suppressive population. Collectively, these data suggest that RAd-CD40L gene therapy is a promising adjuvant treatment to 5-FU for the management of bladder cancer.     

STAT3小干扰RNA的构建及对缺氧复氧人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:构建信号转导与转录因子3(STAT3)小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对缺氧复氧后人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法:设计3对人STAT3 siRNA靶序列,用DNA重组技术克隆至质粒pRNAT-U6.1/neo中,构建重组质粒pRNAT-U6.1-STAT3 siRNA,检测并筛选出最佳抑制效率的siRNA质粒载体。重组质粒转染至缺氧复氧后HKC细胞,Western blotting和Real Time-PCR测定STAT3蛋白和mRNA表达量,流式细胞仪测定细胞凋亡,间接荧光法测定Bcl-2和Bax表达的变化。结果:靶向STAT3基因表达的质粒载体构建成功,并筛选出抑制效率最佳的重组质粒。缺氧复氧后HKC细胞STAT3表达、凋亡率和Bax/Bcl-2比值增加;缺氧复氧后HKC细胞转染重组质粒后STAT3表达、凋亡率和Bax/Bcl-2比值明显降低。结论:成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向STAT3的重组质粒载体。该载体可有效抑制缺氧复氧后HKC细胞中STAT3信号转导通路的活化,并进一步通过上调Bcl-2、下调Bax蛋白的表达,从而抑制细胞凋亡。     

湖北天麻GAP基地不同品种天麻最佳采收期研究

对湖北两个天麻GAP(good agricu ltural practice)基地不同品种的天麻进行了天麻素含量的动态检测和生态条件及产量的考察。结果表明,天麻在5~9月份生长迅速,从10月下旬开始逐渐停止生长,进入11月份天麻产量达到最大;采用RP-HPLC法测定,11~12月份采收的样本天麻素含量最高。据此,确定了湖北GAP基地天麻的最佳采收期:兴山基地的乌天麻、红乌天麻和乌红天麻,广水基地的红天麻均以11月份采收为宜;兴山基地的红天麻以12月份采收为宜。     

雌激素通过LRP16基因5′侧翼GC富含区上调其转录的分子机制

LRP16是一个明确的雌激素(E2)反应性靶基因,已往研究在LRP16基因上游调控区鉴定了一个E2反应性1/2ERE/GC富含的ERα作用位点（-676 bp到-214 bp;命名为A区）.为进一步鉴定雌激素上调LRP16基因表达的最大化反应区域,对LRP16基因上游调控区进行缺失突变,通过相对荧光素酶活性分析观察到LRP16基因的一段5′近端侧翼序列（-213 bp到-24 bp;命名为B区）具有明显的E2反应性.通过与A区比较,认为B区最大化的呈递了E2对LRP16基因的转激活效应.序列分析表明,B区缺乏经典的ERE元件,而包含多个富含GC序列.针对Sp1的siRNA实验结果提示,Sp1参与了E2对该区域的转激活.针对GC富含区进一步的缺失突变,及荧光素酶活性分析,识别了一段30 bp（-213 bp到-184 bp）的序列在B区呈递E2反应活性中发挥核心作用.超级凝胶电泳实验结果表明,Sp1蛋白与这段30 bp的DNA序列在体外存在直接结合作用.染色质免疫共沉淀实验结果证实,ERα、Sp1与B区存在E2依赖性相互作用.本文在LRP16的5′侧翼区识别了一段最大化呈递E2活性的DNA片段.机制研究表明,在E2存在条件下,ERα通过Sp1与该区域的直接作用上调LRP16基因的表达.     

微动脉平滑肌细胞K^＋通道的研究进展

K^＋通道维持着血管平滑肌细胞的静息膜电位。目前发现血管微动脉平滑肌细胞上主要表达内向整流型K^＋通道、ATP敏感型K^＋通道、电压依赖型K^＋通道和大电导钙激活型K^＋通道等四种K^＋通道。本文对微动脉平滑肌细胞K^＋通道最新进展做一综述。     

蛋白质内含肽的研究及应用进展

内含肽的发现与研究只经过短短的20年,但已在各个生物领域展现出应用潜力。本文阐述了蛋白质内含肽的相关概念、种类、分布、结构、功能和自我剪接机制。分析了内含肽在当前生物技术领域中的应用情况以及存在的优点和局限性,最后就内含肽的应用前景进行了展望。     

鸡生化基因位点检测方法的建立及在SPF鸡群中的应用

目的建立鸡生化标记检测方法,用于SPF鸡群的遗传学检测。方法参照国家标准《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法》,应用乙酸纤维素板,建立SPF鸡生化标记位点的检测方法。结果共有7种同工酶可以用于鸡的生化检测,其中血红蛋白-β链(Hbb)的检测组织为溶血素,转铁蛋白酶(Trf)的检测组织为肺脏,碳酸酐酶-2(Car2)的检测组织为肝脏或溶血素,异柠檬酸脱氢酶-1(Idh1)、苹果酸酶-1(Mod1)、碱性磷酸酶-1(Akp1)检测组织为肾脏,酯酶-1(Es1)检测组织为血清。结论建立了鸡生化标记检测方法,并对BWEL-SPF鸡群和Line-22鸡群进行了分析,发现都存在多态性。     

运动对胰岛素抵抗大鼠肝脏BIM信号通路的影响*

目的: 探究运动干预对肥胖诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏BIM-JNK1-IRS1-Akt信号通路的影响。方法: 40只雄性SD大鼠随机分4组(n=10):对照组(普通膳食喂养16周);高脂膳食安静组(高脂膳食喂养16周);慢性运动组(高脂膳食喂养16周且后8周进行慢性运动干预,5%体重负重的游泳运动,1 h/d,5天/周)和急性运动组(高脂膳食喂养16周后进行同样5%体重负重的6 h急性运动干预,分两个3 h进行,中间间隔休息45 min)。干预结束后,所有大鼠称重后进行口服糖耐量和胰岛素释放实验,分别使用罗氏血糖仪和大鼠胰岛素ELISA试剂盒测定血糖含量和血清胰岛素含量,以胰岛素敏感性指数衡量胰岛素抵抗状态。Western blot方法检测肝脏Bcl-2细胞死亡调节因子(BIM),磷酸化c-Jun氨基末端激酶1(p-JNK1), 磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白水平。结果: 与对照组大鼠相比,高脂膳食安静组大鼠体重和内脏脂肪质量显著增加(P＜0.01),胰岛素敏感性指数显著下降((P＜0.01);肝脏中BIM蛋白水平显著增加(P＜0.01),JNK1和IRS1磷酸化水平显著增加(P＜0.01),Akt磷酸化水平显著下降(P＜0.01)。与高脂膳食安静组相比,慢性运动组大鼠体重和内脏脂肪质量显著降低(P＜0.01),急性运动组大鼠体重和内脏脂肪质量无明显变化。与高脂膳食安静组相比,慢性运动组和急性运动组大鼠的胰岛素敏感性指数显著提高(P＜0.05),肝脏中BIM蛋白水平显著减少(P＜0.01),JNK1和IRS1磷酸化水平显著降低(P＜0.01),Akt磷酸化水平显著增加(P＜0.01)。结论: 慢性运动降低大鼠体重和内脏脂肪质量,急性运动并不影响大鼠体重和内脏脂肪质量,但两种运动方式都可以改善肥胖诱导的胰岛素抵抗,这可能与大鼠肝脏中BIM调节的JNK1-IRS1-Akt信号通路的改变有关。     

钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞分化过程中的表达及其钙激活氯通道电生理特性变化*

目的: 研究钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞(CFs)向成肌纤维细胞(MFs)分化过程中的表达规律及其电生理特性,探索ANO1在心肌纤维化进程中的作用。方法: 以刚分离贴壁的大鼠原代CFs及其分化的MFs为研究对象,利用全细胞膜片钳检测钙激活氯通道电流变化,采用免疫荧光标记技术和Western blot检测ANO1、α-SMA和vimentin在CFs和MFs细胞中的表达特征。结果: 刚贴壁培养的CFs钙激活氯通道电流密度远高于MFs;ANO1主要表达于CFs和MFs的细胞核周围及细胞核上,少量表达于细胞膜;ANO1在刚贴壁的CFs中表达较弱,而在有分裂增殖趋向的MFs细胞中表达较为明显。结论: ANO1的表达与MFs的分化过程密切相关,提示其可能参与调节心肌纤维化进程。     

白腐真菌落叶松锈迷孔菌产漆酶液体培养基的优化及其对染料的脱色作用

以白腐真菌落叶松锈迷孔菌(Porodaedalea laricis)胞外漆酶为响应值,通过将Plackett-Burman设计、最陡爬坡设计和Box-Behnken设计相结合,获得了P.laricis产胞外漆酶的最适培养基为:去皮马铃薯365.61 g/L、蛋白胨5.0 g/L、葡萄糖20.0 g/L、KH2PO41.0 g/L、MgSO47H2O 0.5 g/L、MnSO4 H2O 0.15 g/L、CaCl22H2O 0.03 g/L、酒石酸铵6.68 g/L、琥珀酸钠1.5 g/L、吐温800.48 mL/L、玉米芯46.43 g/L、维生素B10.01 g/L。在该条件下,P.laricis漆酶活性为3.29 U/mL,相比于优化前提高了2.81倍,与理论值3.32 U/mL相近,说明该模型准确可靠。此外,将漆酶应用于降解多种合成染料包括活性亮蓝X-BR、雷马素亮蓝R、酸性黑172、刚果红、亚甲基蓝、中性红、靛蓝、萘酚绿B和结晶紫,反应168 h后脱色率分别可达到95.64%、97.21%、36.11%、91.63%、61.42%、74.65%、48.60%、25.13%和68.80%。