血管内皮细胞生长因子受体Flt-1结合小肽的融合表达及活性鉴定

血管内皮细胞生长因子 (VEGF)通过结合其酪氨酸激酶受体KDR、fms样酪氨酸激酶 1(Flt 1)调节新生血管形成 ;筛选能封闭VEGF结合Flt 1的小肽 ,可以通过阻断肿瘤血管形成 ,抑制实体瘤生长 .将从噬菌体 12肽库中筛选获得的 2个能与Flt 1结合的阳性噬菌体克隆 (F5 6和F90 )十二肽DNA(36bp)克隆到表达载体pQE4 2中 ,在大肠杆菌M15中稳定表达二氢叶酸还原酶融合蛋白(DHFR F5 6 F90 ) ,经变性、复性后得到纯度达 90 %的可溶性蛋白 .ELISA检测表明 ,DHFR F5 6 F90能结合可溶性受体sFlt 1和血管内皮细胞 ;12 5I VEGF竞争抑制实验显示 ,DHFR F5 6能竞争抑制VEGF同可溶性受体sFlt 1结合 .结果提示 ,F5 6可能是VEGF受体Flt 1的有效拮抗剂 ,具有抗肿瘤新生血管形成的潜在应用前景     

TGF-β/Smad与Wnt/β-catenin在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达及相互作用

目的 观察TGF-β/Smad 和Wnt/β-catenin 通路相关基因在肺纤维化大鼠模型肺组织中的表达,探讨两条通路对肺纤维化的影响及其相互作用.方法 取Wistar 大鼠36 只,随机分为正常对照组和肺纤维化模型组,每组18 只.采用气管内注入博来霉素（BLM）建立Wistar 大鼠肺纤维化模型,每组分别于第14、21 和28 天处死大鼠各6 只;取肺组织称重,测定肺组织中HYP、IL-1β水平,观察肺组织Col-I、IL-1β、TGF-β1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-catenin、LEF-1 mRNA 的表达,并进行HE 染色和Masson 胶原染色.结果 （1）与正常对照组比,造模后14～28 d 大鼠肺指数均明显升高（P ＜0.01）;肺组织HE 染色呈现明显的肺纤维化病理改变,Masson 染色结果可见造模后14 ～28 d 肺间质蓝色胶原呈渐进性增加.（2）造模后第14 天,肺组织IL-1β含量、IL-1βmRNA 相对含量均显著升高（P ＜0.01）,随后逐渐降低,至造模后第28 天IL-1β表达量接近正常水平（P ＞0.05）.（3）造模后14 ～28d大鼠肺组织HYP 含量、Col-I mRNA 相对表达量均明显升高（P ＜0.01）.（4）与正常组相比,模型组中TGFβ1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-Catenin、LEF-1 mRNA 表达显著增加（P ＜0.01）,且TGFβ1、Smad3 mRNA 分别与Wnt1、LEF-1、β-catenin mRNA 的表达呈显著正相关.结论 TGF-β/Smad 和Wnt/β-catenin 通路相关基因在博来霉素致大鼠肺纤维化中表达上调,两条通路对肺纤维化可能有促进作用且它们间可能存在一定联系.     

视觉系统皮层下细胞的方位和方向敏感性

视觉方位、方向选择性曾被认为是高等哺乳动物视皮层细胞的特有功能。近年来大量的实验结果表明,视皮层下的外膝体神经元和视网膜神经节细胞都具一定程度的方位和方向敏感性,这些性质是遗传决定的,不受后天环境的影响。在外膝体内,已为视皮层细胞高度的方位、方向选择性和功能柱的形成做出了初步的分类与编组,提供了前级安排。这种皮层下的方位、方向敏感性细胞在发育过程中传递和加工了环境视觉信息,促进了视皮层更强的方位、方向选择性机制和方位功能柱的形成。外膝体在视觉信息平行处理通道的形成上起着分类集聚的重要作用。     

三亚岩相潮间带底栖海藻群落结构及其季节变化

为了解三亚潮间带大型海藻生态现状,布设6条岩相断面,于2008年1—11月进行了四季野外的调查,并使用物种多样性指数与聚类分析研究了潮间带大型海藻四季的群落结构和多样性变化。调查共鉴定出大型底栖藻类130种,隶属于4门75属,其中红藻门41属67种、褐藻门16属31种、绿藻门15属29种、蓝藻门3属3种。潮间带海藻种类数季节变化不大,并呈低潮带>中潮带>高潮带的垂直分布特征,且中低潮带有共同分布种,夏季尤为普遍。潮间带海藻夏冬两季平均生物量高于春秋两季,但并无显著差异。优势种季节变化明显:春季有波利团扇藻Padina boryana、日本仙菜Ceramium japonicum、半叶马尾藻Sargassum hemiphyllum、海柏Polyopes polyideoides,夏季有波状软凹藻Chondrophycus undulates、冠叶马尾藻Sargassum cristaefolium、宽扁叉节藻Amphiroa dilatata、石花菜Gelidium amansii,秋季有冠叶马尾藻、波状软凹藻、叶状铁钉菜Ishige foliacea,冬季有瓦氏马尾藻Sargassum vachellianum、苔状鸭毛藻Symphyocladia marchantioides、珊瑚藻Corallina officinalis、波利团扇藻、日本仙菜。群落多样性冬高夏低:Shannon多样性和Margalef丰富度指数最大值出现在冬季,Shannon多样性和Pielou均匀度指数最低值出现在夏季。区域底栖藻类以暖水性热带-亚热带种为主,其次为温水性的暖温带种类,基本符合南海南区暖水区系特点。研究表明,尽管三亚潮间带底栖海藻种类数与生物量上并无显著的季节差异,但群落结构与多样性均显示出一定的季节变化。     

西瓜果实特异启动子WSP功能区域的初步定位

西瓜AGPase的大亚基基因wml1的 5′端上游 15 73bp序列 ,是一个果实特异性启动子 (命名为WSP)。根据WSP内部酶切位点 ,获得了 3个不同 5′端缺失的启动子片段 (长分别为 12 0 1bp、898bp、795bp) ,并构建成植物瞬间表达载体 ,与含WSP的瞬间表达载体一起用基因枪的方法转入西瓜叶、茎、花及不同发育期果实中。瞬时表达结果表明 ,15 73bp、12 0 1bp、898bp的片段均能指导GUS基因在西瓜果实和花中特异性表达 ,但是表达强度和表达时期有所不同 ,795bp的片段不能指导GUS基因表达。推测在 180bp 5 5 1bp之间可能存在促进外源基因在果实发育后期表达的顺式作用元件 ,而果实特异调控区域可能位于 85 4bp 95 7bp之间。     

除草剂胁迫对空心莲子草叶甲种群的影响及应对策略

为探讨除草剂胁迫对空心莲子草叶甲种群的影响,寻求合理施用除草剂,有效保护叶甲,提高其控草效果的应对策略,利用叶片残留法测试了在草甘膦、农达、水花生净与35%苄·丁可湿粉等除草剂胁迫下空心莲子草叶甲卵孵化率,幼虫、成虫存活率以及蛹羽化率。结果表明被测试的4种除草剂均不同程度地降低空心莲子草叶甲卵孵化率,幼虫与成虫存活率及蛹羽化率,特别是水花生净28.0、35.0 g/L两种浓度处理,35%苄·丁可湿粉4.0 g/L浓度处理显著降低卵孵化率;农达13.4 g/L浓度处理显著降低1龄前期幼虫存活率,农达40.1 g/L与 53.4 g/L两种浓度处理显著降低2龄前期幼虫存活率;水花生净28.0 g/L浓度处理显著降低3龄前期幼虫存活率;草甘膦97.6 g/L与 122.0 g/L浓度处理、农达26.7 g/L与66.8 g/L浓度处理、35%苄·丁可湿粉2.0 g/L浓度处理显著降低后期蛹的羽化率;35%苄·丁可湿粉1.0 g/L浓度处理显著降低羽化后3 d雌虫的存活率。除草剂除直接杀死空心莲子草叶甲,降低其种群数量外,使叶甲失去食物与避护所,快速地引起叶甲种群崩溃。建议合理施药,并在施药时,随机留若干小斑块不施药,保护叶甲,可望提高其田间控草效果。     

刺激延脑内侧网状结构对猫胃电慢波影响的定位与猫胃电慢波的FFT分析

本工作在48只猫上观察电刺激延脑P6-P13中央部分对胃电的影响。并采用直观和微机FFT分析的方法,分别比较Ag-AgCl圆盘电极与环状铂丝电极引导的猫胃电的差异。结果表明,在延脑存在着分别能使胃体部胃电或胃窦部胃电的幅度或频率产生兴奋、抑制或兴奋/抑制的三种不同效应的结构。提示在延脑的中央部分,主要是内侧网状结构,在调整胃功能的活动中有一定的作用。     

A novel peptide isolated from a phage display peptide library with trastuzumab can mimic antigen epitope of HER-2

Trastuzumab, a humanized antibody to HER-2, has been shown to be effective in the treatment of breast cancer in which HER-2 overexpression and metastasis occurs. In our search for an effective mimic epitope of HER-2 binding with trastuzumab and to develop HER-2 peptide vaccine, we screened a phage display 12-mer peptide library with trastuzumab as the target. A mimetic peptide (mimotope) H98 (LLGPYELWELSH) that could specifically recognize trastuzumab was isolated. The DNA encoding peptide H98 was cloned and expressed as the fusion protein GST-H98 in Escherichia coli BL21. The purified GST-H98 could specifically bind to trastuzumab and block the binding of trastuzumab to HER-2 protein. Moreover, H98 could significantly block the function of trastuzumab inhibiting the growth of cancer cells. Mice that were immunized with GST-H98 made specific antibody to H98 as well as to HER-2. In addition, T-cell proliferation occurred in mice immunized with GST-H98. Although no sequence homology was found between H98 and HER-2, through the use of structure analysis we were able to determine that peptide H98 contributed to a conformational epitope of HER-2. Furthermore, we determined that the last two amino acids at the C terminus, and the third together with the fourth amino acid at the N terminus of peptide H98 are critical to the binding of H98 to trastuzumab. As a result, we conclude that peptide H98 has potential for being developed as a HER-2 vaccine for biotherapy of cancer with HER-2 overexpression.     

P37腺病毒表达载体的构建及对乳癌细胞的促迁移作用

胃癌组织中存在着较高的猪鼻支原体感染率,而P37是猪鼻支原体的主要免疫原.以往研究表明,P37能抑制肿瘤细胞的黏附,促进肿瘤细胞浸润和转移.为了更好地研究P37在肿瘤发生和转移中的功能,通过基因克隆的方法,利用Ad-easy体系,在细菌BJ5183中同源重组后,转染293细胞,成功包装出重组P37腺病毒.它能有效感染乳腺癌细胞BICR.通过RT-PCR和蛋白质印迹检测表明,感染重组P37腺病毒后的BICR细胞能大量表达并分泌P37蛋白.运用该腺病毒体系进行细胞迁移实验表明,P37能显著增强BICR细胞的体外迁移能力.