人4-1BBL胞外区基因的克隆与表达研究

用RT-PCR方法从人单核THP-1细胞系克隆人4-1BBL胞外区基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建成人4-1BBL胞外区基因表达载体。将该载体转化大肠杆菌16C9,获得稳定表达,表达产物主要以可溶性状态存在;SDS-PAGE和Western blot分析显示,其分子量约为22kD,与预期结果一致。这是首次在大肠杆菌中获得4-1BBL胞外区可溶性表达。生物学活性检测显示4-1BBL对于维持T淋巴细胞系因子释放非常有益,同时PI单染表明它能抑制Jurkat细胞的凋亡。这将在抗肿瘤免疫治疗中具有潜在应用前景。     

硒对小麦和水稻种子萌发的生态毒理效应的比较研究

通过水培试验,比较研究了硒在不同浓度下对小麦和水稻种子萌发及幼苗生长的生态毒理效应。结果表明,硒在适量范围内(<0.5 mg.L-1)对种子萌发过程中各生理指标有促进作用,高剂量(>5 mg.L-1)时,对种子活力、α-淀粉酶及幼苗和根生长具有胁迫效应。硒对小麦种子发芽各指标抑制率大于水稻,硒对种子根伸长的抑制率远远大于发芽抑制率。对硒浓度与种子发芽各项指标抑制率相关分析,呈显著正相关。应用小麦根伸长抑制率可作为化学物质生态风险评价的一项生物标志物。     

Differentiation of velogenic, mesogenic and lentogenic strains of Newcastle disease virus by multiplex RT-PCR

A multiplex RT‐PCR technique has been developed for differentiation of velogenic, mesogenic and lentogenic pathotypes of Newcastle disease virus (NDV), using a set of three oligonucleotide primers designed from NDV genomic RNA (P1, P2 and P3). The primer pair P1 and P2 generated a RT‐PCR product of 204 bp, only with RNA from velogenic and mesogenic strains, whereas the P1 and P3 generated a 364 bp product only with RNA from mesogenic and lentogenic strains. Thirty four NDV strains, including some reference strains (known pathotypes), NDV field isolates and NDV vaccine strains, as well as other avian virus strains, were tested with multiplex RT‐PCR. All reference strains tested were differentiated in agreement with their intracerebral pathogenicity index (ICPI) values or with the pathotypes known in previous reports. The nucleotide sequence analysis of RT‐PCR products for four NDV strains was fully in agreement with the RT‐PCR characterisations of these strains. The RT‐PCR results of other avian RNA viruses further confirmed the reliability and specificity of this technique. However, the RT‐PCR failed to detect some other avian NDV, which may not originate from chicken. This multiplex RT‐PCR technique is simple and easy to perform. It could be applied not only to determine the origin of NDV, but also may be used diagnostically in molecular epidemiological analysis of ND and for prediction of pathotypes of NDV isolates.     

斑节对虾血淋巴中诺氟沙星含量测定及药代动力学

采用Agilent 110 0液相色谱仪测定斑节对虾血淋巴中诺氟沙星含量 ,并初步研究了斑节对虾一次性肌肉注射诺氟沙星的药代动力学 ,斑节对虾血淋巴药 时曲线可以用开放性二室模型来描述。由此推算诺氟沙星的药动学参数 ,分布和消除半衰期分别为 0 .0 6 35和 0 .6 12h ;曲线下面积 (AUC)、总体消除率 (CLs)和表观分布容积 (Vd)分别为 12 .42 5ug·h/mL、80 4.83mL/kg·h和 710 .35mL/kg。     

不同提取剂对麦醇溶蛋白提取效果的电泳比较

以大麦、小麦品种为材料,分别采用醇溶蛋白提取剂乙醇、乙二醇、2-氯乙醇、2-巯基乙醇、尿素等配成不同浓度的单一组分提取剂和复合提取剂,在同一条件下提取大麦和小麦去胚种子的醇溶蛋白,通过A-PAGE分离样品液发现,单一组分提取剂中25％的2-氯乙醇效果较好,5％的2-巯基乙醇效果较差;复合提取剂中由2-氯乙醇和2-巯基乙醇组成的提取剂效果最好。这种复合提取剂制备的样品液经电泳后,在图谱中条带丰富,带型清晰,无论对大麦还是小麦种子,都是最佳的醇溶蛋白提取剂。     

草原蘑菇圈的土壤-植物系统研究

在内蒙古锡林郭勒草原,比较研究了蒙古口蘑形成的蘑菇圈各环带的植物生长状况和土壤生态因子的变化。结果表明,绿草环上的植物体内营养元素和叶绿素的含量明显增加,其地上部分植物生物量显著高于正常草区,产生增产效应;枯草环上的植物生长则受到抑制。蘑菇圈土植物的区系组成有所变化。蘑菇圈上土壤养分特别是速效态的N和P含量有显著增加。蒙古口蘑菌丝体生长对土壤理化性质产生影响并产生明显的土壤生物学效应。     

鸽基因Ⅶ型新城疫病毒的分离鉴定

从外表健康的法国进口鸽中分离到一株鸽Ⅰ型副粘病毒(FP株),电镜观察病毒形态不规则,以圆形为主,平均直径100mm～120mm,表面有许多突起。其鸡胚平均死亡时间(MDT)为59．2h,鸡脑内接种指数(IcPI)为1．88。接种1月龄鸽能使其发病。出现明显症状和病变并有80％试验鸽死亡,接种2月龄SPF鸡全部死亡。经多重RT—PCR鉴定,属速发型新城疫病毒。应用RT—PCR技术对F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定、分析表明,F蛋白裂解位点处的序列(112R—R—Q—K—R—117F)与新城疫强毒在这一区域的序列相符。与国内强毒F48E9株、疫苗毒Lasota株的核苷酸同源性分别为84．1％、82％,氨基酸同源性为84．5％、80．6％。与多株已报道的NDV参考株相应片段进行序列比较,经遗传基因进化树分析,鉴定为基因Ⅶ型,由此首次报道了鸽源基因Ⅶ型NDV株的存在。     

辽宁丹东地区柞树菌根真菌生态分布的研究

通过5年连续调查研究,发现辽宁丹东地区天然次生柞林中及部分柞树经济林中柞树菌根菌种类共有36种,隶属于7个科13个属,在此基础上研究分析了柞树菌根菌的生态分布与共生树种、树龄及季节的关系,结果表明,与蒙古栎共生的菌根菌种类最多,达29种;红菇属种类与柞树共生的树龄范围最广,鹅膏属种类偏重于与树龄较大的柞树共生;夏季的7、8月份为菌根菌发生的高峰期,75％的种类在7月份发生。100％的种类在8月份发生,8月中下旬菌根菌发生的相对密度最高,分别为19．5％和18．4％。     

恒河猴外周血及肾组织SV40病毒基因分析

SV40即猿猴病毒40 (simian virus 40),是DNA肿瘤病毒的原型代表,其基因结构为共价闭合环状双股DNA分子,标准参考株SV40-776含5243个核甘酸。不同分离株bp数略有差异。SV40病毒为强DNA肿瘤病毒,具有使啮齿类动物及人源多种组织培养细胞永生化和转化能力。SV40病毒早期基因编码两个早期非结构蛋白即小T抗原(ST-ag、)和大T抗原(LT-ag),与病毒诱导的肿瘤发生有关。近年来研究表明,从猴体组织新分离的SV40株与实验室参考株SV40-776及SV40-B株相比较,具有明显的遗传异质性,并且SV40遗传变     

表达HIV-I CN54株gagpol基因重组痘苗病毒疫苗株的构建

为研制不带筛选标记的HIV活载体疫苗,首先构建含有neo基因和lacZ基因双重筛选标记的pV175转移质粒,并将HIV—I中国主要流行株B’／C重组株CN54 gagpol基因置于pV175的启动子pE／L下,构建重组质粒pVl75—Gagpol。重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染鸡胚细胞。前三轮通过G418加压,噬斑纯化,得到既含目的基因又含筛选标记的蓝色重组痘苗病毒;后三轮在无G418选择压力下,筛选只含目的基因而缺失了筛选标记的白色重组痘苗病毒。结果表明筛选到了一株重组病毒,经PCR和Dot blot检测确认该株重组痘苗病毒的neo基因和lacZ基因已丢失;PCR鉴定表明目的基因已插入重组痘苗病毒中;抗体染色和Westem blot结果证实该重组病毒能很好地表达目的蛋白。