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Genetic and physiological studies of Bacillus subtilis sigma A mutants defective in promoter melting. 总被引:1,自引:0,他引:1 下载免费PDF全文
The Bacillus subtilis sigA gene encodes the primary sigma factor of RNA polymerase and is essential for cell growth. We have mutated conserved region 2.3 of the sigma A protein to substitute each of seven aromatic amino acids with alanine. Several of these aromatic amino acids are proposed to form a melting motif which facilitates the strand separation step of initiation. Holoenzymes containing mutant sigma factors recognize promoters, but some are defective for DNA melting in vitro. We have studied the ability of each mutant sigma factor to support cell growth by gene replacement and complementation. The two region 2.3 mutants least impaired in promoter melting in vitro (Y180A and Y184A) support cell growth in single copy, although the Y184A allele imparts a slow-growth phenotype at low temperatures. A strain expressing only the Y189A variant of the sigma A protein, known to be defective in DNA melting in vitro, grows very slowly and is altered in its pattern of protein synthesis. Only the wild-type and Y180A sigma A proteins efficiently complement a temperature-sensitive allele of sigA. Overexpression of three of the sigma A proteins defective for promoter melting in vitro (Y189A, W192A, and W193A) leads to a decrease in RNA synthesis and cell death. These results indicate that mutations which specifically impair DNA melting in vitro also impair sigma function in vivo and therefore support the hypothesis that sigma plays an essential role in both DNA melting and promoter recognition. 相似文献
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Threeextrinsicpolypeptides,whicharelocatedontheinnersurfaceofthylakoidmembrane,playessentialrolesinmaintainingthephotosyntheticevolutionofoxygen.Theyaregenerallyrecognizedasliablecomponentsofthephotosyntheticapparatus,andcanbereleasedbyavarietyofphysic… 相似文献
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目的 探索不同酸水解酪蛋白对W135群与Y群脑膜炎奈瑟菌(脑膜炎球菌)荚膜多糖产量的影响。方法 分别以NaCl质量分数为37%和14%的酸水解酪蛋白作为有机氮源配制改良半综合高盐培养基和低盐培养基,利用全自动细菌发酵罐分别在两种培养基里培养W135群和Y群脑膜炎球菌,比较这两种菌株在两种培养基中的生长时间、收获液菌密度( A 600 nm 值)、收获液去菌体后与去复合多糖后上清中的荚膜多糖含量,以及纯化后的精糖产量;比较高盐培养基收获液及其2倍稀释液中不同终含量的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide, CTAB)溶液对多糖沉淀效果的影响。结果 W135群与Y群脑膜炎球菌在两种培养基中的培养时间差异无统计学意义( P >0.05),但高盐培养基收获液的菌密度、收获液去菌体后上清液中的多糖含量均高于低盐培养基收获液,差异有统计学意义( P < 0.05),而高盐培养基收获液纯化后的精糖产量低于低盐培养基,差异有统计学意义( P <0.05)。高盐培养液2倍稀释后,在CTAB终体积分数为0.04%时,W135群与Y群脑膜炎球菌多糖全部沉淀,而未稀释高盐培养液即使CTAB终体积分数提高到0.14%,依然也不能完全沉淀 W135群与Y群脑膜炎球菌多糖。结论 不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎球菌的生长密度和荚膜多糖产量有影响,用CTAB溶液沉淀荚膜多糖时需控制收获液盐含量。 相似文献
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超高分辨率毛细管等电聚焦—电喷雾质谱联用方法观察蛋白质亚型 总被引:1,自引:0,他引:1
在线的毛细管等电聚焦 电喷雾质谱联用 ,作为一种二维的分离系统 ,对毛细管等电聚焦过程中形成的蛋白质亚型进行了分析。这种分析系统通过使用中性的涂层毛细管 (80cm长 )、动态的毛细管位置调整方法和鞘流液接口得以建立。蛋白质首先在毛细管等电聚焦过程中根据它们等电点的差异得到分离 ,然后被电喷雾质谱鉴定。已聚焦好的蛋白质区带通过结合阴极移动和重力移动的方法从毛细管中流出而进入质谱仪。由于在此特定情况下这种方法具有极高的分辨率 ,有三种血红蛋白A和镰刀型血红蛋白的亚型 (具有几乎相同的电荷分布和分子质量 ,但它们的等电点差异在 0 .0 4到 0 .0 8之间 )和两种乳球蛋白A的亚型 (等电点差异为 0 .6 )被检测到。这些蛋白质亚型的等电点、相对含量和分子质量都通过毛细管等电聚焦 电喷雾质谱联用方法同时得到了确定。 相似文献
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