蛋白质组学的研究方法

近年来,蛋白质组学的研究在生物医学领域正逐步深入,研究方法也正逐步完善。本文综述了蛋白质组学的几种研究方法,指出了各种方法的优点及局限性,并且对蛋白质组学的研究方法和前景进行了展望。     

已烯雌酚对免疫性卵巢早衰小鼠卵巢细胞凋亡的影响

目的探讨已烯雌酚对免疫性卵巢早衰小鼠卵巢颗粒细胞和卵母细胞凋亡的影响。方法以小鼠透明带3蛋白的第330～342个氨基酸的序列（NSSSSQFQIHGPR）合成透明带多肽并作免疫原,免疫SPF级BALB/c雌性小鼠。设对照、模型和已烯雌酚组。灌胃给药4周后,采用Tunel方法检测颗粒细胞与卵母细胞的细胞凋亡数并作统计学分析。结果已烯雌酚组可显著减少小鼠卵巢卵母细胞的凋亡率（P〈0.05）。结论已烯雌酚组能改善免疫性卵巢早衰小鼠体重降低症状并能诱导发情。已烯雌酚能改善免疫性卵巢早衰小鼠症状的机制可能是由于能有效地抑制卵母细胞的凋亡所引起的。     

实验猴饲料盘的改进和应用

目的探讨对当前实验猴养殖场广泛使用的饲料盘进行改进,减少饲料浪费。方法在对实验猴采食习性进行观察的基础上,提出饲料盘改进办法,并对改进前后饲料浪费情况进行分析。结果新型饲料盘饲料浪费量明显少于旧饲料盘,增大新型饲料盘面积,饲料浪费量也明显减少。结论改进型饲料盘具有制作简单,容易清洁,大大减少饲料浪费等特点,值得在实验猴养殖场推广应用。     

胶原/纤维蛋白止血效果观察

目的研究胶原/纤维蛋白对新西兰兔的止血作用,并与胶原蛋白海绵止血效果作比较。方法选用胶原/纤维蛋白止血贴,对新西兰兔耳部动、静脉出血、耳表创面、股动脉割伤、肝损伤、体表创面进行止血试验,同时与胶原蛋白海绵止血效果作比较,观察其止血时间、失血量、敷料与创面的粘合等情况,并定期观察创面愈合、体内吸收和抗炎情况。结果胶原/纤维蛋白复合止血贴组、胶原蛋白海绵组新西兰兔耳动、静脉、耳表创面、股动脉割伤、标准肝创伤的止血时间与对照组比较,差异显著（P〈0.05）。胶原/纤维蛋白复合止血贴组新西兰兔耳动、静脉、耳表创面的止血时间与胶原蛋白海绵组,差异显著（P〈0.05）。胶原/纤维蛋白复合止血贴组、胶原蛋白海绵组动物的耳表创面、标准肝创伤失血量与对照组比较,差异显著（P〈0.05）。体内标准肝创伤、体表创伤后期观察,胶原/纤维蛋白复合止血贴与胶原蛋白海绵均能在21d内完全吸收,未见炎症反应。结论胶原/纤维蛋白复合止血贴对新西兰兔耳动脉割伤、耳静脉割伤、耳标创伤、股动脉割伤和标准肝损伤模型都具有明显的止血作用,体表创面伤口恢复良好,体内吸收速度快,具有一定的抗炎作用,而且在新西兰兔耳动脉、耳静脉割伤和耳表创伤的止血效果明显优于胶原蛋白海绵。胶原/纤维蛋白复合止血贴是一种较安全有效的局部止血生物材料。     

丙烯对柿果实采后细胞壁物质代谢和几种生理指标的影响

丙烯处理的柿果实,其软化进程显著加快,呼吸速率和乙烯释放高峰提前,且峰值升高,细胞壁各组分的代谢速度加快,柿果实中多聚半乳糖醛酸酶（PG）和纤维素酶（Cx）活性提高,且高峰提前。     

Production of bioactive,SUMO-modified,and native-like TNF-α of the rhesus monkey, <Emphasis Type="Italic">Macaca mulatta</Emphasis>, in <Emphasis Type="Italic">Escherichia coli</Emphasis>

Biotechnologically produced tumor necrosis factor alpha (TNF-α) neutralizing agents have proven efficient in patients suffering from disparate autoimmune diseases. The rhesus monkey (Macaca mulatta) could be developed as a model for human autoimmune disease. Consequently, a large amount of M. mulatta TNF-α (mmTNFα) is required to further understand TNF-α-related pathogenesis and evaluate novel human TNF-α (hTNFα) neutralizing agents. We therefore attempted to express mmTNFα by using a small ubiquitin-like modifier (SUMO) fusion system. The synthetic gene, encoding the fusion protein SUMO-mmTNFα, was inserted into a pQE30 plasmid and was transformed into Escherichia coli M15. The fusion protein was expressed as both soluble and insoluble protein in E. coli. Approximately 10–12 mg of SUMO–mmTNFα was obtained from the soluble fraction of 1 L of bacterial culture. Cleavage of the fusion protein with SUMO protease produced native-like mmTNFα. Both native-like and SUMO-modified mmTNFα formed functional trimers and showed excellent cytotoxicity (ED₅₀, 0.05–0.1 ng/ml) in standard L929 cells. In addition, SUMO–mmTNFα and mmTNFα also exhibited cytotoxicity in human cancer cell types, such as, breast, lung, and liver cancer cells. The hTNFα neutralizing agents, including soluble receptors of hTNFα and antibodies against hTNFα, interacted with the mmTNFα. These results demonstrate that the bioactive mmTNFα produced with the SUMO fusion system is useful for further research, especially for the in vitro preclinical evaluation of biological hTNFα neutralizing agents.     

A novel anti-lymphoma protein RE26 from <Emphasis Type="Italic">Rozites emodensis</Emphasis> (Berk.) Moser

A novel antitumor protein, designated RE26, with anti-lymphoma activity was purified from a Tris–HCl buffer extract of Rozites emodensis (Berk.) Moser by three successive steps of ion exchange chromatography. SDS-PAGE and gel filtration chromatography revealed that RE26 is a monomeric protein of 26 kDa, and isoelectrofocusing assay indicated its isoelectric point of 4.3–4.4. RE26 has high stability over a wide pH range (pH 3–11) but is sensitive to temperature and only stable under 40 °C. Partial amino acid sequences of two RE26 peptide fragments were determined by Edman degradation as GLEEEETLLLLFFPP and GTEQE. The half-maximal inhibitory concentration (IC₅₀) of RE26 against tested lymphoma cell lines was around 4 μg/ml. In vitro experiments showed that RE26 could specifically bind to lymphoma cells; activate the caspases, including caspases 3, 8, and 9 in host cells; and induce apoptosis. Experiments in nude mice indicated local RE26 injection adjacent to tumor site could inhibit lymphoma formation.     

高能量膳食对中老年食蟹猴糖尿病相关基因表达的影响

本研究选择空腹血糖值(FPG)在正常范围内(3.20 mmol/L≤FPG<5.50 mmol/L)的中老年食蟹猴(Macaca fascicularis)60只,高能量膳食诱导12个月后,将其分为正常血糖组和诱高血糖组(FPG≥5.50 mmol/L)。采用荧光定量PCR技术对2组中36个糖尿病相关基因在诱导前后外周血白细胞中的mRNA表达量进行分析。结果表明,高能量膳食诱导后,诱高血糖组FPG和甘油三酯(TG)显著高于正常血糖组(P<0.05),而胆固醇(TCHO)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)与分组无显著相关性(P>0.05)。基因表达水平上,诱高血糖组和正常血糖组均有血管紧张素转换酶基因(ACE)、肝糖原磷酸化酶基因(PYGL)、水通道蛋白基因(AQP2)等19个基因的mRNA表达量在高能量膳食诱导前后存在显著差异(P<0.05),且基因的表达模式变化一致,但诱高血糖组的mRNA表达量变化大,且三磷酸腺苷柠檬酸裂解酶(ACLY)、选择素L(SELL)、突触相关蛋白23(SNAP23)、突触融合蛋白(STX4)这4个基因的mRNA表达水平仅在诱高血糖组高能量膳食诱导前后呈差异表达(P<0.05)。     

鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定

目的建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法。方法通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化。超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定。结果本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯。与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了最优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量：1∶500,酶解时间：72 h,盐析浓度：2 mol/L,提取所用酸溶液：0.05mol/L醋酸溶液。结论为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。     

ICU开放人工气道患者下呼吸道病原菌分布及耐药性分析

目的了解重症监护室（ICU）开放气道患者下呼吸道感染病原菌分布及耐药特点,为临床用药提供依据。方法回顾性分析2007年1月至2008年12月,重症监护室开放气道患者下呼吸道感染者的痰标本418株病原菌进行鉴定及药敏试验。结果革兰阴性杆菌占69．6％,其中铜绿假单胞菌27．02％,其次为鲍曼不动杆菌20．16％。革兰阳性球菌占20．16％,以金黄色葡萄球菌为主占12．5％,真菌10．24％。结论目前重症监护室下呼吸道致病菌以G^-杆菌为主,细菌的耐药性严重,应根据药敏试验选择抗生素。