影响动物细胞同源重组发生与基因打靶效率的分子机制

真核细胞的基因打靶是基因结构与功能研究的一种非常有价值的技术,也是可应用于基因治疗的具有潜力的工具。有2个限制因素束缚真核细胞基因打靶的发展,即同源重组(HR)率非常低而随机整合率非常高。通过特定基因的过表达或表达干涉,使一些参与DNA重组的蛋白表达水平瞬间改变,可能会增加HR率,降低随机整合率。本文列举了一些与HR相关的候选基因,详细介绍了其中的Rad52上位簇基因,还讨论了打靶载体的设计与修饰、DNA转染方法的有效性等。     

分子标记技术的发展及应用

介绍了几种应用前景较广的分子标记,如基于DNA杂交技术的分子标记:限制性片段长度多态性(RFLP)和DNA可变串联重复数标记(VNRT);基于PCR技术的分子标记:随机扩增多态性 DNA(RAPD)、酶切扩增多态性(CAPS)、扩增片段长度多态性(AFLP)、微卫星DNA(SSR)和DNA单链构象多态性(SSCP);以及新兴的第3代分子标记,即基于DNA芯片技术的分子标记:单核苷酸多态性(SNP)等。分别阐述了它们的原理、方法步骤与优缺点、应用注意事项和适用范围,同时概述了它们在生物学研究中的应用和进展。     

家蚕瘫痪肽结合蛋白基因克隆与分析

ENF肽家族具有保守的N末端结构（Glu—Asn—Phe-）。该家族成员肽大多具有重叠功能活性,在鳞翅目昆虫的免疫反应,生长调控和自体调节等方面都发挥着重要的作用。在昆虫的免疫反应中,血细胞尤其是淋巴液的黏附性是针对外来侵入物的免疫应答过程中的重要因素。家蚕瘫痪肽（paralytic peptide）是ENF肽家族的一种,其具有多种的生物学活性,包括致瘫痪性及在家蚕血细胞免疫反应中的促吞噬细胞扩散活性。ENF肽家族的另一成员,粘虫（Pseudaletia separata）的生长阻抑肽（Growth-blocking peptide）,同家蚕瘫痪肽一样能够在粘虫的血细胞免疫反应中起到调节吞噬细胞的功能。目前,关于昆虫细胞免疫应答的终端调控分子机制的研究还比较少,有文献报道粘虫的生长阻抑肽结合蛋白（GBP—BP）能够起到沉默生长阻抑肽活性的功能,从而可能参与调节细胞免疫应答的终端调控。在本研究中,利用荧光差异显示技术（FDD）分析了家蚕感染BmNPV病毒后基因表达差异情况,在血淋巴中获得了一条差异条带G12782＊通过5＇-RACE技术,首次在家蚕中克隆得到了该基因的全长cDNA序列。通过同源性分析得知,该基因所编码的蛋白质与粘虫的生长阻抑肽结合蛋白具有很大的同源性,并被命名为家蚕瘫痪肽结合蛋白（Bmori paralytic peptide binding protein,PP-BP）。通过RT-PCR研究发现,该蛋白基因在血淋巴中大量表达。同时,利用实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR）技术分析了该基因在正常饲养家蚕与添食BmNPV病毒的家蚕中的表达差异,结果显示该基因在家蚕添食BmNPV病毒后的表达量大大增强,这就暗示该基因可能与BmNPV病毒刺激后所引起的家蚕血液细胞免疫反应相关。利用生物信息学方法对该基因的结构进行了分析,发现该基因具有两个外显子和一个内含子。这个基因已经登入GenBank数据库,收入号为DQ306881。     

不同大豆品种抗旱性综合评价

选用10个不同生态类型的大豆品种,在盆栽和大田条件下进行抗旱性研究.在正常供水与水分胁迫条件下,分别测定并分析了开花结荚期与品种抗旱性有关的多项生理生态指标.把大豆各性状的抗旱系数作为衡量各单项抗旱能力大小的指标,用主成分分析将各单项抗旱系数综合成几个新的、相互独立的综合指标,再利用隶属函数求出综合指标的隶属值,可以较准确地评价各大豆品种（系）的抗旱性.通过该方法评选出两个高抗旱大豆品种晋大74号和晋大53号,评定结果符合生产实际.     

慢性病毒性肝炎小鼠动物模型的建立及其特征分析

慢性病毒型肝炎是一种严重危害人类健康的常见病,多发病,目前尚缺乏理想的实验动物模型来阐明其具体的发病机制,从而使得对其防治的研究受到限制.本研究采用纯化的3型鼠肝炎病毒(MHV-3)经腹腔注入近交系C3H/HeJ小鼠体内,小鼠感染MHV-3后,约63%存活,存活的小鼠一般情况较正常对照组差,肝脏组织呈现持续炎性改变,血清ALT、AST升高而TP、ALB有所下降,与人类慢性病毒性肝炎的发生发展极为相似,可作为研究慢性病毒性肝炎的比较理想动物模型.     

黔北晚奥陶世Hirnantian期观音桥层四射珊瑚新资料及其地质意义

报道黔北毕节、仁怀和石阡地区晚奥陶世Hirnantian期观音桥层中首次发现的四射珊瑚Axiphoria,Bodophyllum,Dalmanophyllum,Leolasma,Brachyelasmaunicum(Neuman),Grewingkiaanguinea(Scheffen),结合前人报道的该层所产的Borelasma,Kenophyllum,Streptelasma,Ullernelasma等属,进一步表明黔北观音桥层四射珊瑚动物群与斯堪的纳维亚(Scandinavia)、中亚、阿尔泰地区同期珊瑚群关系密切。该动物群对阐明晚奥陶世四射珊瑚古地理关系具有重要意义。黔北观音桥层四射珊瑚十分丰富,总计有18属39种。文中共描述10属12种,其中1新属3新种,即AmplexobrachyelasmaHeetChengen.nov.,GrewingkiadensicolumnaHeetChensp.nov.,KenophyllumfossulatumHeetChensp.nov.,LeolasmaqianbeienseHeetChensp.nov.。     

The F-box protein AhSLF-S2 physically interacts with S-RNases that may be inhibited by the ubiquitin/26S proteasome pathway of protein degradation during compatible pollination in Antirrhinum

Self-incompatibility S-locus-encoded F-box (SLF) proteins have been identified in Antirrhinum and several Prunus species. Although they appear to play an important role in self-incompatible reaction, functional evidence is lacking. Here, we provide several lines of evidence directly implicating a role of AhSLF-S(2) in self-incompatibility in Antirrhinum. First, a nonallelic physical interaction between AhSLF-S(2) and S-RNases was demonstrated by both coimmunoprecipitation and yeast two-hybrid assays. Second, AhSLF-S(2) interacts with ASK1- and CULLIN1-like proteins in Antirrhinum, and together, they likely form an Skp1/Cullin or CDC53/F-box (SCF) complex. Third, compatible pollination was specifically blocked after the treatment of the proteasomal inhibitors MG115 and MG132, but they had little effect on incompatible pollination both in vitro and in vivo, indicating that the ubiquitin/26S proteasome activity is involved in compatible pollination. Fourth, the ubiquitination level of style proteins was increased substantially after compatible pollination compared with incompatible pollination, and coimmunoprecipitation revealed that S-RNases were ubiquitinated after incubating pollen proteins with compatible but not with incompatible style proteins, suggesting that non-self S-RNases are possibly degraded by the ubiquitin/26S proteasome pathway. Fifth, the S-RNase level appeared to be reduced after 36 h of compatible pollination. Taken together, these results show that AhSLF-S(2) interacts with S-RNases likely through a proposed SCF(AhSLF-S2) complex that targets S-RNase destruction during compatible rather than incompatible pollination, thus providing a biochemical basis for the inhibition of pollen tube growth as observed in self-incompatible response in Antirrhinum.     

锅炉管道回水、厌氧污泥中硫酸盐还原菌的筛选

目的研究硫酸盐还原菌及其筛选、分离鉴定体系.方法在锅炉管道回水和厌氧污泥中驯化、筛选硫酸盐还原能力强的菌株,以铬酸钡光度方法检测液体培养基中的硫酸根含量,测定了菌株的硫酸盐降解能力.结果在水样A和泥样B中,A1和B2菌株能够较好地降解培养基中的硫酸盐,通过计数得出A1和B2的最大可能菌数分别为1.65×10(6)个/ml、2.25×10(6)个/ml.并利用改进的稀释涂布-叠皿夹层培养方法分离鉴定A1和B2菌株,观察硫酸盐还原菌的形态,为进一步了解SRB的生长特性,进而从根本上解决硫酸盐还原菌腐蚀问题提供理论基础.结论经过实验,所筛选分离鉴定体系可行.     

非磷酸化肌球蛋白在血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞迁移中的作用

为了阐明非磷酸化肌球蛋白在平滑肌细胞迁移中的作用,研究探讨了非磷酸化肌球蛋白是否介导了血小板衍生生长因子(PDGF)诱导豚鼠脑基底动脉平滑肌细胞(GbaSM-4)的迁移。研究结果显示,20ng/ml以下剂量的PDGF可诱导GbaSM-4细胞发生迁移,此时肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化水平无变化。该迁移作用可被肌球蛋白特异性抑制剂blebbistatin所拮抗。应用RNA干扰技术抑制肌球蛋白轻链激酶表达,经免疫印迹检测经果显示,MLC20的磷酸化水平发生了显著下降;但对PDGF诱导的迁移作用无影响;在RNA干扰后blebbistatin也可抑制其迁移作用。体外ATP酶活性测定结果显示,blebbistatin对从平滑肌中提取的非磷酸化肌球蛋白的ATP酶活性有明显的抑制作用,其主要作用位点位于肌球蛋白头的头部S1。上述结果提示,非磷酸化的肌球蛋白参与了PDGF诱导的平滑肌细胞迁移。     

人类免疫缺陷病毒/丙型肝炎病毒混合感染者免疫细胞和肝生化指标的分析

目的 探讨人类免疫缺陷病毒/丙型肝炎病毒(HIV/HCV)混合感染者的免疫淋巴细胞亚群和肝脏生化指标的特征。方法 检测并分析研究组(40例混合感染HIV/HCV的血友病患者)和对照组(12例单独感染HIV的血友病患者)若干相关实验室指标。结果两组(研究与对照)结果 差异显著的指标分别为:自然杀伤(NK)细胞9.26%±5.98%对12.19%±5.80%,P<0.05;CD4/CD8细胞比值0.39±0.21对0.53±0.24,P<0.05;CD3细胞74.99%±10.33%对68.42%±8.82%,P<0.05;CD8细胞52.28%±12.59%对43.58%±10.99%,P<0.05;丙氨酸氨酶(ALT)(48.59±40.21)U/L对(26.87±27.23)U/L,P<0.01;天冬氨酸转氨酶(AST)(61.66±51.02)U/L对(34.17±30.24)U/L,P<0.001;谷氨酰转肽酶(GGT)(136.50±111.50)U/L对(43.88±36.17)U/L,P<0.001;甘胆酸(CG)(683.41±962.22)μg/L对(250.96±290.81)μg/L,P<0.001;透明质酸(HA)(180.94±196.69)ng/ml对(64.68±32.74)ng/ml,P<0.001;白/球蛋白(A/G)比值1.35±0.24对1.50±0.34,P<0.05。与单独HIV感染者比较,HIV/HCV混合感染者的NK细胞、CD4/CD8细胞比值和A/G比值显著降低,而ALT、AST、GGT、CG和HA的水平显著增加。结论 HIV/HCV混合感染可能加剧患者淋巴细胞亚群的不平衡,加重肝脏损伤和出现肝硬化趋势。