Cleavage of the Carboxyl-Terminus of LEACS2, a Tomato 1-Aminocyclopropane-1-Carboxylic Acid Synthase Isomer, by a 64-kDa Tomato Metalloprotease Produces a Truncated but Active Enzyme

1-Aminocyclopropane-1-carboxylic acid （ACC） synthase （ACS） is the principal enzyme in phytohormone ethylene biosynthesis. Previous studies have shown that the hypervariable C-terminus of ACS is proteolytically processed in vivo. However, the protease responsible for this has not yet been identified. In the present study, we investigated the processing of the 55-kDa full-length tomato ACS （LeACS2） into 52-, 50- and 49-kDa truncated isoforms in ripening tomato （Lycopersicon esculentum Mill. cv. Cooperation 903） fruit using the sodium dodecyl sulfate-boiling method. Meanwhile, an LeACS2-processing protease was purified via multi-step column chromatography from tomato fruit. Subsequent biochemical analysis of the 64-kDa purified protease revealed that it is a metalloprotease active at multiple cleavage sites within the hypervariable C-terminus of LeACS2. N-terminal sequencing and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight analysis indicated that the LeACS2-processing metalloprotease cleaves at the C-terminal sites Lys^438, Glu^447, Lys^448, Asn^456, Ser^460, Ser^462, Lys^463, and Leu^474, but does not cleave the N- terminus of LeACS2. Four C-terminus-deleted （26-50 amino acids） LeACS2 fusion proteins were overproduced and subjected to proteolysis by this metalloprotease to identify the multiple cleavage sites located on the N-terminal side of the phosphorylation site Ser^460. The results indisputably confirmed the presence of cleavage sites within the region between the α-helix domain （H14） and Ser^460 for this metalloprotease. Furthermore, the resulting C-terminally truncated LeACS2 isoforms were active enzymatically. Because this protease could produce LeACS2 isoforms in vitro similar to those detected in vivo, it is proposed that this metalloprotease may be involved in the proteolysis of LeACS2 in vivo.     

一个用于转染细胞分选的双顺反子载体的构建及其应用

为简化转染细胞的分选过程,构建了一个含有细胞表面标志 CD34 基因的双顺反子载体 p3.1-IRES-CD34. 利用来源于脑心肌炎病毒 (EMCV) 的内部核糖体进入位点 (IRES) ,实现目的基因与 CD34 基因的共同表达 . 将绿色荧光蛋白 (EGFP) 作为目的基因插入载体的多克隆位点,然后转染 NIH-3T3 细胞,通过免疫磁珠分选 (MACS) 方法来分选细胞 . 结果表明：对于转染细胞,均可实现快速分选 ( 瞬时转染细胞约 48 h ,稳定转染 10~15 天 ) ,并且获得较高纯度 (95% 以上 ) 的表达目的基因细胞 .     

南瓜属4个栽培种种子蛋白质电泳分析

通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对南瓜属4个栽培种中国南瓜、印度南瓜、美洲南瓜及黑籽南瓜的12个品种种子蛋白组分进行了分析。结果显示,黑籽南瓜种子以盐溶蛋白条带居多;其它3个栽培种以水溶蛋白条带居多,其次为盐溶蛋白;4个栽培种酸溶蛋白条带均较少;醇溶蛋白未分离得到蛋白谱带。水溶、盐溶、酸溶蛋白电泳图谱显示各栽培种间蛋白谱带差异明显,同一栽培种品种间蛋白谱带较为一致。     

人附红细胞体感染FMMU白化豚鼠的研究

用附红细胞体分别感染FMMU白化豚鼠和普通花色豚鼠,同时测定两组豚鼠的红细胞免疫功能,探讨FMMU白化豚鼠的免疫学特性与病原体敏感性之间的关系。结果表明,FMMU白化豚鼠对人附红细胞体比普通花色豚鼠敏感。封闭群FMMU白化豚鼠有独特的免疫学特性,红细胞免疫功能低于普通花色豚鼠,对病原体敏感性高于普通花色豚鼠,更适于建立感染性疾病动物模型。     

从米糠中提取降血管紧张素转换酶抑制剂

采用盐析法提取米糠蛋白,分别选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等单独或联合水解米糠蛋白,以从酶解米糠蛋白中分离获得具有血管紧张素转换酶（ACE）抑制活性的短肽组分。经Sephadex G-15凝胶层析和SP—Sephadex C-25离子交换层析分离各酶解组分,并检测各组分的ACE抑制活性。结果表明,米糠蛋白的酶解分离产物中含有较强ACE抑制活性的组分,其中经胃蛋白酶和胰蛋白酶共同水解时得到的小分子量寡肽组分的抑制活性最强,为后续对其进行结构分析奠定了基础。     

基于自适应光学的视网膜单细胞光学相干层析成像技术

介绍了一种基于CCD相机的并行光学相干层析成像技术,将所建立的层析成像系统和自适应光学视网膜相机结合。利用一维光学相干层析系统对人眼视网膜进行追踪并控制相干门在视网膜内的位置,利用基于CCD相机的二维光学相干层析成像系统记录视网膜的干涉图像。用眼模型和牛眼视网膜组织对系统进行了测试,通过将4幅干涉图像的获取时间控制在7 ms以内来减少视网膜运动对成像的影响;系统的轴向点扩展函数和灵敏度分别达到10 μm和76 dB。实验结果表明,所建立的基于自适应光学的视网膜光学相干层析成像系统的空间分辨率和灵敏度远远高于其它基于自适应光学的视网膜成像技术。     

通过原位反转录研究MADS盒基因M79的时空表达模式

通过设计可以引发特定mRNA进行转录的特异引物,采用了一种新的原位反转录的方法检测mRNA,这种原位反转录的方法是把原位杂交和反转录进行有机结合的结果,其实用性能和关键步骤都已进行优化。研究表明,只要设立合适的对照原位反转录方法, 检测mRNA的灵敏度高、假阴性和假阳性率低。用这种方法对一个属于AGL2亚组的水稻(Oryza sativa L.)的MADS-盒基因M79的表达进行了分析,结果表明,在水稻从营养到生殖的各个发育阶段,M79均有表达,与平行进行的传统原位杂交的方法得到的结果类似。相对而言,原位反转录法耗时短、容易操作,可以成为一种可靠的原位定位mRNA的基本技术。     

枸杞原生质体培养及高效成株体系的建立

由枸杞髓部组织诱导出胚性愈伤组织,并由此愈伤组织建立起稳定的细胞悬浮系。从悬浮细胞游离的原生质体在改良KM培养基(1.5 mg/L 6_BA,0.5 mg/L NAA和0.5 mg/L 2,4_D)中进行液体浅层培养,3～4 d后出现第一次分裂,第7 d统计分裂频率为50.3%,15 d左右可形成细胞团,3～4周后形成肉眼可见的愈伤组织,愈伤组织植板率为1.25%。将细胞团转移到液体分化培养基(MS+6_BA 1.5 mg/L+2,4_D 0.2 mg/L) 8～10 d可形成大量胚状体,及时将胚性愈伤组织块转移到固体分化培养基上(MS+6_BA 0.2 mg/L),可形成大量绿芽,分化率54.17%。绿芽在生根培养基（MS+NAA 0.2 mg/L）可形成完整植株,移栽后成活良好。     

昆虫抗菌肽结构与功能关系及其在分子设计中的应用

昆虫抗菌肽在自然分布广泛,结构多样,其作用机制尚未确切阐明,但其结构上的某些共同特征与其功能密切相关,同时,对其结构与功能间关系的研究有利于设计合成新的抗菌肽,为以后发现活性更强,毒性更低且作用广谱的抗菌素奠定基础。     

肺炎链球菌在复发性阿弗他溃疡中定居部位的变化

目的探讨复发性阿弗他溃疡表面细菌的定居状态.方法 分别对病例组溃疡灶及对照组唇部粘膜进行了细菌学分离对比研究.结果 病例组溃疡灶以肺炎链球菌为主,而对照组唇部粘膜以甲型溶血性链球菌为主. 结论复发性阿弗他溃疡患者中肺炎链球菌定居部位发生改变.