London/Swedish双突变APP转基因小鼠的鉴定

鉴定及评价APP双突变阿尔茨海默病的转基因小鼠模型。方法将London/Swedish双突变APP基因插入到PDGF启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立APP695^V652I/K596N/M597L双突变转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定APP695双突变转基因小鼠的基因表型,RT-PCR和Western blotting检测APP突变基因表达,免疫组化检测APP695双突变转基因小鼠大脑病理改变。水迷宫检测APP695^V652I/K596N/M597L转基因小鼠的行为学改变。结果建立了2个品系的人APP695^V652I/K596N/M597L转基因小鼠。抗Aβ1-17免疫组织化学显示APP695双突变转基因小鼠海马区阳性细胞数较APP695^V652I单突变转基因小鼠,及野生小鼠阳性细胞数明显增多,胞膜着色明显加深。双突变转基因小鼠在5月龄时可检测到老年斑。行为学检测显示APP695^V652I/K596N/M597L双突变转基因小鼠学习记忆能力比APP695^V652I单突变转基因小鼠有明显下降。结论APP695^V652I/K596N/M597L转基因小鼠较APP695^V652I转基因小鼠更早出现老年斑及学习认知能力障碍。成功建立了人APP695^V652I/K596N/M597L转基因小鼠阿尔茨海默病模型,为研究阿尔茨海默病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。     

α1-抗胰蛋白酶的分离纯化

为建立从Cohn's组分IV沉淀中分离纯化α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)的技术路线,以Cohn's组分IV为原料,利用还原剂1,4-二硫苏糖醇(DTT)、气相二氧化硅等处理,再经压滤、离子交换层析和疏水层析提取α1-AT.用SDS-PAGE及合成基质法检测α1-AT的纯度以及生物活性.结果可见,Cohn组分IV沉淀中α1-AT占蛋白总量的11%～13%,经该工艺提取的α1-抗胰蛋白酶纯度为97.6%,疏水层析后α1-AT的收获率为21%,比活为每毫克总蛋白中含 0.54 mg功能活性α1-AT.可见用此方法从Cohn组分IV沉淀中可制备高纯度的α1-AT.     

紫杉醇对NK-92MI细胞杀伤功能及凋亡的影响

探讨紫杉醇对人自然杀伤细胞系NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响。用不同浓度的紫杉醇处理NK.92MI细胞后,测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;同时检测NK·92MI细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Ba】【的表达。结果表明,紫杉醇可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK.92MI细胞的凋亡,而后者与Bcll2/Ba】【基因表达增高有关。     

麻疯树Jc-Tctp1基因的同源性分析及时空表达模式鉴定

从麻疯树胚乳cDNA文库中获得了翻译调节肿瘤蛋白（translationally controlled tumor protein, TCTP）cDNA序列,命名为Jc-Tctp1（GenBank登录号为EF091818）.该序列全长1 410 bp,开放阅读框由507个碱基组成.Jc-Tctp1编码的推测蛋白产物含有168个氨基酸残基,该蛋白具有典型的TCTP蛋白特点：由3个α螺旋组成α螺旋核心、4个β片层结构构成β片层核心,及微管结合结构域（MTB）和钙结合结构域（CaB）.其推测氨基酸序列与巴西橡胶树（Hevea brasiliensis）、油棕（Elaeis guineensis）、大豆（Glycine max）、水稻（Oryza sativa,japonica cultivar-group）、黑杨（Populus trichocarpa）、番茄（Lycopersicon esculentum）、西加云杉（Picea sitchensis）、拟南芥（Arabidopsis thaliana）以及玉米（Zea may）的TCTP同源性依次为93 %、90 %、85 %、84 %、85 %、84 %、77 %、80 %和77 %.经构建含Jc-TCTP1在内的植物TCTP蛋白分子进化树分析,发现单子叶植物并未按照其生物学分类的地位出现聚合.用半定量RT-PCR研究Jc-Tctp1基因的表达模式,结果显示,其表达在转录水平上具有一定的组织和时间特异性,茎、Ⅰ期胚乳、胚中最为丰富,而在Ⅱ期胚乳和花中表达最弱.     

yapsin蛋白酶家族研究进展

yapsin蛋白酶是一类糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定的天冬氨酸蛋白酶,能特异性地切割底物中的单或双碱性氨基酸残基位点,起着加工前肽的作用。近年来研究发现,工程菌表达某些外源蛋白时发生的降解现象与yapsin蛋白酶有紧密的关系。概述了yapsin蛋白酶家族的命名、结构、定位、酶原激活、基因表达及底物特异性和功能。     

蛋白质翻译中的反转运

在蛋白质的翻译过程中,氨酰-tRNA进入核糖体,解密mRNA上的一个密码子,并带着mRNA向其5'的方向运动,直到空载的tRNA离开核糖体,整个过程tRNA在核糖体内始终沿着一个方向运动.但随着LepA(EF4)蛋白的发现和其功能的明确,tRNA在核糖体内的新运动形式--"反转运"被揭示,即tRNA带着mRNA倒退一步,向其3'的方向运动.通过对tRNA反向运动生理意义的研究,引发了对蛋白质翻译调控的深入思考.     

天津八仙山自然保护区狍春季的卧息地利用

2007年春季,在天津八仙山自然保护区对狍卧息地利用进行了研究。共发现52个狍的卧息地,同时设置93个对照地。资源选择指数结果表明,狍偏好阔叶林,利用中上坡位,喜欢阳坡和半阴半阳坡,选择水源距离适中,偏爱远离人为干扰的卧息地。逐步判别分析结果显示,灌木盖度、隐蔽度、灌木高度、郁闭度、灌木距离和坡度是判别卧息地和对照地的关键因子,即为影响其卧息地利用的主要因子,判别正确率为98．1％。作为生性胆怯易惊的偶蹄类,具有隐蔽条件较好[灌木盖度适中（转换后为16．77±1．07。）、隐蔽度高（29．54±1．47m）、灌木高度稍高（1．22±0．05m）]的地点是狍适宜的卧息地,以逃避捕食者;与此同时,卧息地较舒适[郁闭度低（转换后为5．48±0．31°）、灌木距离较远（2．99±0．13m）、坡度小（2．11±0．09°）],以利于怀孕母狍呼吸与活动,反映其繁殖期生理需求。     

Tenascin-r基因在斑马鱼胚胎发育中时空表达规律

Tenascin-r(TNR)是一种脊椎动物细胞外基质糖蛋白,在不同的物种间具有高度保守性,主要表达于神经系统,通过调节基质粘附状态和基质间相互作用而促进细胞的迁移、增殖和分化.在小鼠等动物模型中,TNR在中枢神经系统的发育中起重要作用,能控制大脑活动、调节适应性行为.而在斑马鱼研究中,TNR仅在视神经的发育和修复中起作用,通过对TNR在斑马鱼胚胎发育时期时空表达规律的研究,可以为利用斑马鱼进一步研究TNR的功能建立一个平台.     

肺内调节肽对人支气管上皮细胞HLA-DR、CD80、CD86表达的影响

为了探讨肺内调节肽对人支气管上皮细胞（human bronchial epithelial cells,HBECs）人类白细胞抗原DR（human leukocyte antigen DR,HLA—DR）、CD80和CD86表达的影响,采用免疫细胞化学技术和流式细胞术检测HBECs在非应激和臭氧应激两种状态下HLA-DR、CD80、CD86的表达。结果显示,HBECs表达HLA—DR,臭氧应激状态下HBECs HLA-DR表达降低（P〈0．05）;VIP、P3513和CGRP使非应激和臭氧应激两种状态下的HBECs HLA—DR表达增高（均P〈0．05）。HBECs表达协同刺激分子CD80,臭氧应激状态下CD80表达降低（P〈0．05）,VIP对非应激的HBECs的CD80表达无影响,使臭氧应激状态下CD80表达增高（P〈0．05）;CGRP使非应激状态下的HBECs的CD80表达降低（P〈0．05）,使臭氧应激状态下CD80表达增高（P〈0．05）;P3513使非应激状态下CD80表达增高（P〈0．05）,可使臭氧应激状态下CD80表达降低（P〈0．05）。在HBECs没有检测到CD86表达,臭氧攻击也不能刺激其表达。上述结果提示,HBECs具备成为抗原递呈细胞的必要条件,肺内调节肽可通过调节HLA—DR和协同刺激分子的表达调节HBECs的抗原递呈作用。     

不同浓度NaCl对离体培养的滨梅茎段增殖生长和几种生理指标的影响

在离体培养条件下,经0．1％NaCl处理的滨梅茎段的不定芽增殖数、茎高、鲜重、干重,可溶性蛋白含量和硝酸还原酶活性均有提高,0．1％-0．3％NaCl处理的脯氨酸和丙二醛（MDA）含量无明显变化,在盐梯度0-0.5％NaCl浓度范围内叶绿素含量变化不明显。