快速检测核糖体失活蛋白活性质粒的构建及应用

核糖体失活蛋白专一地断裂28S rRNA第4 324位的腺嘌呤与核糖之间的N-糖苷键,具有特异破坏核糖体的结构,抑制蛋白质生物合成的功能。核糖体失活蛋白在医疗方面有极大的应用价值。为了能简单快速筛选出核糖体失活蛋白,本实验构建了一种包含核糖体失活蛋白识别位点的双荧光素酶质粒psiCHECKTM-2-F28RNA。用具有N 糖苷酶活性的苦荞凝集素(tartary buckwheat lectin,TBL)作用于psiCHECKTM-2-F28RNA质粒,电泳检测发现,TBL可以将质粒DNA由超螺旋型切割为缺刻型。将psiCHECKTM-2-F28RNA转染HCT116细胞,发现海肾/萤火虫荧光比值也明显降低,表明构建的质粒可以用于检测核糖体失活蛋白对细胞的毒性作用。当将psiCHECKTM-2-F28RNA中的GAGA序列中腺嘌呤分别突变后进行同样实验,确定该质粒中的GAGA为核糖体失活蛋白的识别位点。进一步构建包含GAGA特征序列的Wnt1-3′UTR区的质粒psiCHECKTM-2-Wnt1-3′UTR,实验也发现,在胞外和胞内TBL与psiCHECKTM-2-Wnt1-3′UTR都具有相互作用,表明细胞内具有GAGA序列的mRNA也可能成为核糖体失活蛋白的靶点。选用几种食源性作物中提取的蛋白质,分别与psiCHECKTM-2-F28RNA作用,进行体外检测,结果显示,该质粒能快速地筛选来源于不同生物的核糖体失活蛋白。这些结果表明,本实验构建的psiCHECKTM-2-F28RNA质粒,可用于核糖体失活蛋白的快速筛选和酶活性鉴定。     

启动子荧光素酶报告系统检测低浓度过氧化氢激活神经肽PACAP特异受体PAC1-R启动子的作用

垂体腺苷酸环化酶激活多肽（pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP）特异受体PAC1-R (PACAP receptor 1)是神经系统疾病药物开发的重要靶点。为了研究其表达的生物学机制,本研究克隆了PAC1-R基因转录起始位点上游从-2 500到+26的2 526 bp启动子片段,构建PAC1-R启动子驱动的荧光素酶基因报告载体pGL3-PAC1-Rp,并确证PAC1-R启动子荧光素酶报告系统在小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a和人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中工作正常。运用此PAC1-R启动子荧光素酶报告系统,首次发现低浓度过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）有效激活PAC1-R启动子,此作用可被转录因子特化蛋白1（specificity protein 1,SP1）抑制剂光神霉素A（mithramycin A）所抑制,提示SP1参与介导H2O2对PAC1-R启动子的激活作用。生物信息学分析显示,PAC1-R启动子含有多个SP1结合位点。PAC1-R启动子的荧光素酶报告系统的构建为深入探索PAC1-R高表达的作用与机制奠定了基础,低浓度H2O2对PAC1-R启动子激活作用的发现有助于深入诠释低浓度活性氧的生理学作用。     

银杏叶提取物猴头菌转化前后降血糖作用的比较研究

The regulatory effects of blood glucose, lipid metabolism and free radical elimination were compared in streptozotocin-induced hyperglycemic rats among the following treatments: Ginkgo biloba leaf extract (EGB), the biotransformation of EGB by Hericium erinaceus, a cultural filtrate of H.erinaceus, and the cultural filtrate of H.erinaceus plus EGB, together with the normal control, the model control and the positive control (Metformin). The best results were obtained from the biotransformation treatment group, which could significantly reduce the levels of blood glucose and fructosamine. However, the treatment did not increase the blood insulin level. The EGB transformed products could obviously increase the serum superoxide dismutase activity and reduce the malondialdehyde level, but the reduction of malondialdehyde was not obvious as compared with that of the other treatment groups. This study provides a useful information on improving the medical properties of the herb extracts by biotransformation.     

临床分离嗜血杆菌的菌群分布及其耐药性分析

目的调查中山大学附属第一医院嗜血杆菌的临床分布及耐药性情况。方法按照标准方法分离嗜血杆菌并进行药物敏感试验及其检测：结果共分离出146株嗜血杆菌,嗜血杆菌对青霉素敏感率仅为14％,对氨苄西林、头孢克洛、头孢丙烯、莫西沙星、阿奇霉素的敏感率分别为77．9％,98．2％,98．2％,68．7％,98．3％。结论头孢克洛、头孢丙烯、阿奇霉素是治疗嗜血杆菌感染的有效抗生素,应加强对嗜血杆菌的培养及耐药性监测工作。     

拟南芥LFR原核重组蛋白纯化和多克隆抗体制备

拟南芥中有一类含ARM结构域的蛋白质,研究表明它们中的一些在植物的生长发育和激素应答等方面发挥着重要的作用.在拟南芥突变体筛选中,获得了一个推测编码蛋白含ARM重复序列的新基因突变体lfr(leaf and flower related mumnt),它在叶子和花的发育过程中表现出较明显的表型.为进一步研究该基因编码蛋白的生物学功能及其分子作用机制,构建了pGEX-2TGST:LFR融合蛋白重组表达载体,将重组质粒转化到工程菌中诱导表达菌体蛋白,经SDS.聚内烯酰胺凝胶电泳检测,结果表明,融合重组蛋白成功获得了高效表达,分子质量在77 ku左右.重组蛋白经谷胱甘肽S.转移酶(GST)标签蛋白亲和层析法纯化,SDS-PAGE制备胶割胶富集,电洗脱法纯化后得到纯度较高的抗原.经对新西兰兔进行5次免疫,获得了多克隆抗血清.采用免疫吸附方法对抗血清进行了纯化,结果得到只识别LFR重组蛋白的抗血清.进一步提取拟南芥野生型及突变体的核蛋白,经蛋白质印迹检测,结果显示,在分子质量50ku左右处出现特异的蛋白质条带,证明所制备的抗血清可以与拟南芥LFR蛋白特异性结合.     

乌头营养器官中生物碱组织化学与积累动态研究

应用组织化学、荧光显微观察与生物碱提取技术相结合,研究了成熟的乌头(Aconitum carmichaelii)各营养器官中生物碱的分布及不同生长期生物碱含量的变化。结果表明,生物碱主要分布在主根(川乌)次生韧皮部薄壁组织细胞与束间形成层的外侧细胞以及不定根(附子)和茎基部的内皮层和韧皮部外侧薄壁细胞中,叶中含量极少,主根、不定根和茎中生物碱的含量峰值分别出现在8月、7月和5月,而叶中生物碱含量很低且随时间的变化不明显。     

新疆焉耆盆地博湖拗陷早侏罗世大孢子及孢形体化石

新疆焉耆盆地的下侏罗统自下而上分为八道湾组和三工河组,产孢形体和大孢子化石。孢形体有5种：Kuqaia quadrata Li,K．concentrica Li,K．radiata Li,K．yangii sp．nov．和K．yanqiensis sp．nov．,大量分布于八道湾组和三工河组。大孢子Nathorstisporites yanqiensis sp．nov．,Hughesisporites gibbosus(Reinhardt et Fricke)Kannegieser只见于八道湾组,而Paxillitriletes phyllicus(Murray)Hallet Nicolson,Bacutriletes corynactis(Harris)Marcinkiewicz和Erlansonisporites sparassis(Murray)Potoni6仅在三工河组有少量分布,对盆地内探区地层的划分和对比有指示意义。大孢子和孢形体化石证据表明：焉耆盆地的八道湾组和三工河组可与准噶尔盆地的八道湾组和三工河组及塔里木盆地的阿合组和阳霞组分别对比,时代同属早侏罗世。描述3新种：Nathorstisporites yanqiensis sp．nov．,Kuqaiayangii sp．nov．和Kuqaia yanqiensis sp．nov．和1新联合种Kuqaia cucuma(Yang et Sun)comb．nov．。     

甜菜M14品系花期cDNA文库的构建及特异表达基因的筛选

构建了甜菜M14品系在花期的ZAP表达载体的cDNA文库,利用抑制消减杂交方法所获得的M14品系特异表达的2个EST片段为探针筛选cDNA文库,获得了M14品系特异表达cDNA片段Me-86和Me-84;进一步利用RACE技术获得了基因M14-86 cDNA片段的全长序列。生物信息学分析表明M14品系特异表达基因M14-86的cDNA片段与cDNA片段Me-84分别与大花马齿苋(Portulaca grandiflora)及瓶子草(Sarracenia purpurea)的26S核糖体RNA具有很高的同源性。