免疫蛋白质组学及疫苗靶位筛选

蛋白质组学自建立起即向生命科学的其他研究领域渗透,形成了多样的交叉学科。免疫蛋白质组学即由蛋白质组学与蛋白质免疫印迹技术相结合而产生的一个新研究方向,在免疫原性蛋白质研究及疫苗靶位筛选中展示出广泛的应用前景。该文就免疫蛋白质组学的形成、主要研究技术体系及其进展、在免疫原性蛋白质鉴定、新型高效候选疫苗靶位发现等方面进行概述。     

桶形芋螺毒管蛋白质组双向电泳条件优化

目的：优化双向电泳的条件,建立适用于桶形芋螺毒管蛋白质组分析的双向电泳方法。方法：对毒管蛋白的提取、上样量及SDS-PAGE凝胶浓度等影响因素进行优化。结果：乙酸提取法适宜于毒管蛋白的提取,对于pH3～10、17cm的IPG胶条,当上样量为0.75mg,聚焦70000Vhr,SDS-PAGE凝胶浓度为15%时,可提高双向电泳的分离效果,所得蛋白点清晰、数目达到1003个。结论：采用优化的条件进行双向电泳,能得到分辨率高、重现性好、完整的双向电泳图谱,为后续桶形芋螺毒管蛋白质组学研究打下基础。     

药用植物佛甲草愈伤组织的诱导和培养

目的：佛甲草（Sedum lineare Thunb）是景天科植物中具有多种药用功能的植物,其肉质多浆的特点是愈伤组织成功诱导和培养的瓶颈。方法：以佛甲草的叶和茎为外植体,用正交试验对培养基中的激素浓度（2,4-D、6-BA和Kt）进行配置,在配置的18种培养基中筛选到适合佛甲草叶和茎愈伤组织诱导和继代的培养基配方。结果：MS＋3%蔗糖＋2,4-D2＋Kt1和MS＋3%蔗糖＋2,4-D2＋6-BA1培养基对茎和叶愈伤组织的诱导率分别达到70%和80%左右,而MS＋3%蔗糖＋2,4-D2＋6-BA1更有利于佛甲草愈伤组织的继代培养。结论：在愈伤组织培养中,佛甲草的茎和叶都可以作为优良的外植体进行愈伤组织的诱导和培养。实验结果为进一步通过组织培养手段提高佛甲草的药效成分提供了有益参考。     

一种烟粉虱成虫唾液酶鉴定与活性分析的方法

以B型烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)成虫为材料,介绍了一种微型刺吸式昆虫唾液酶鉴定和分析的方法,主要包括人工饲养、唾液收集、唾液多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)的鉴定与活性分析。结果显示,B型烟粉虱在特异性嗜好寄主甘蓝上分泌的多酚氧化酶与过氧化物酶的比活力分别为嗜好寄主番茄上的1.54和1.65倍。该方法操作简捷,鉴定结果直观清晰,酶活测定灵敏,适合于其他微型刺吸式昆虫如蚜虫、木虱等的唾液酶研究。     

望江南总蒽醌苷抗肿瘤作用的研究

探讨望江南总蒽醌苷(CSAG)的抗肿瘤作用及其作用机制.利用MTT法检测望江南总蒽醌苷对肝癌细胞HepS、肺癌细胞(A549)、小鼠肉瘤(S180)腹水型肿瘤细胞等肿瘤细胞和人正常肝细胞L-02增殖的影响;实体瘤称重法测定CSAG对肝癌(HepS)实体瘤的抑制情况,将接种肿瘤的小鼠分成5组,每组6只小鼠,雌雄各半,给药12 d,停药后24 h处死动物,秤鼠体重,剥离出肿瘤,秤瘤重,测定生化指标.结果显示,CSAG对以上肿瘤细胞的增殖均有抑制作用,对肝癌细胞荷瘤小鼠肿瘤生长具有明显的抑制作用;同时可增加胸腺指数和脾指数.因此,CSAG具有明显的抗肿瘤效果,其抗肿瘤作用可能与提高机体免疫力和诱导细胞凋亡有关.     

人CCL20基因打靶载体的构建与鉴定

目的:构建针对人CC亚族趋化因子配体20(CC chemokine ligand 20,CCL20)基因外显子2的置换型打靶栽体.方法:设计和合成引物,利用长距离聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)从永生化人角质形成细胞系(HaCaT)基因组DNA中克隆出CCL20基因组DNA片段,再以CCL20基因为模板扩增出长度为1969 bp的同源短臂和2356 bp的同源长臂.分别插入pioxP栽体的Neo基因上游和下游,构建针对人CCL20基因外显子2的置换型打靶载体(ploxP-hCCL20).将打靶载体线性化并以电穿孔方法转移入HaCaT,观察克隆的形成.结果:经过PCR、限制性内切酶鉴定及DNA序列测定.证实该载体的两条同源臂包含人CCL20基因的外显子1、3、4及其邻近的部分内含子.结论:ploxP-hCCL20载体构建成功,增加Neo基因下游同源臂长度的策略有可能提高细胞基因敲除的同源重组率.     

定位于5q31-5q32的DFNA52的20个候选基因的突变筛查

为了克隆定位于5号染色体微卫星标记D5S2056和D5S638之间约8.8 cM的区间内的非综合征性常染色体显性遗传性耳聋 DFNA52 (OMIM: 607683)的致病基因, 文章根据基因在耳蜗组织的表达情况, 筛选出20个候选基因, 设计合成了扩增20个基因外显子及外显子与内含子交界的引物, 用DNA直接测序法进行序列变异分析。结果显示, 在基因外显子及侧翼区共发现了45个单核苷酸多态, 其中42个变异在多态数据库已报道, 其余3个为新发现的单核苷酸多态, 序列变异与疾病表型无共分离现象, 排除了这些基因外显子突变导致遗传性耳聋的可能性。     

人工合成启动子SAR在拟南芥中的表达分析

利用植物防御基因中的病原诱导响应元件和最小35S启动子(-62～+1),人工合成了启动子SAP,并以GUS基因为报告基因,在转基因拟南芥中分析了合成启动子的表达特性.通过对转基因拟南芥GUS组织染色的分析表明:SAR启动子在子叶、毛刺、根茎交接处和根系中优势表达,在老叶中的表达量高于幼叶,说明SAR启动子具有组织和发育表达特异性.     

内生黄曲霉对丹参悬浮细胞氧化酶活性的影响

目的:研究内生黄曲霉对丹参悬浮细胞次生代谢相关氧化酶活性影响,探讨丹参组织培养和次生代谢产物产生的有效诱导途径和诱导机理.方法:将丹参内生黄曲霉以活菌、发酵茵液及制作成诱导子方式分别添加到丹参悬浮细胞中,测定丹参悬浮细胞过氧化物酶、过氧化氢酶及多酚氧化酶活性.结果:不同处理方式,内生黄曲霉对丹参悬浮细胞氧化酶表达均有明显的诱导作用,其中将黄曲霉制作成诱导子对三种酶活诱导作用最明显.结论:内生黄曲霉诱导子能有效提高丹参悬浮细胞氧化酶活性.     

膀胱镜检对前列腺增生患者血清PSA、FPSA的影响

目的:探讨膀胱镜检对BPH患者血清前列腺特异性抗原(PSA)、游离PsA(FPSA)的影响.方法:32例BPH患者,均行膀胱镜检,研究其对患者血清PSA、FPSA的影响程度及时阃.结果:膀胱镜检前患者平均血清PSA值为2.28±1.86ng/ml,FPSA值0.48±0.31ng/ml;镜检后24h内PSA值4.89±3.72ng/ml,FPSA值1.07±0.65ng/ml;镜检后第3天患者平均血清PSA值2.42±1.92ng/ml,FPSA值0.51±0.28ng/ml.镜检后24h内患者血清PSA、FPSA值较镜检前相比P<0.05,有统计学意义;镜检后第3天患者血清PSA、FPSA值较镜检前相比P>0.05,无统计学意义.而各组F/T差异均无统计学意义(P>0.05).结论:膀胱镜检可引起BPH患者血清PSA和FPSA值显著改变,但对F/T值改变无影响,重复血清PSA和FPSA的测定可在膀胱镜检后72h进行.