细胞周期检控点

细胞周期是高度有组织的时序调控过程,受到DNA损伤检控点、DNA复制检控点和纺锤体检控点等细胞周期检控点的精确调控。细胞周期检控点的作用主要是调节细胞周期的时序转换,以确保DNA复制、染色体分离等细胞重要生命活动的高度精确性,并对DNA损伤、DNA复制受阻、纺锤体组装和染色体分离异常等细胞损伤及时做出反应,以防止突变和遗传不稳定的发生。细胞周期检控点的功能缺陷,将导致细胞基因组的不稳定,与细胞癌变密切相关。因此细胞周期检控点对于维持细胞遗传信息的稳定性和完整性以及防止细胞癌变和遗传疾病的发生起着至关重要的作用。     

重组人白细胞介素－6与肿瘤坏死因子突变体融合蛋白的构建及表达

针对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在肿瘤治疗剂量下产生的严重毒副作用及一些肿瘤细胞上白细胞介素－６（ＩＬ－６）受体明显增高的事实,根据ＴＮＦ结构与功能研究的最新信息,利用ＰＣＲ技术,对人ＴＮＦα基因进行了改造,并将其与人ＩＬ－６成熟肽编码区ｃＤＮＡ通过人工接头进行融合。融合蛋白在大肠杆菌中表达后,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明,分子量约为３７ｋＤ;活性检测结果证实,该融合蛋白兼具有ＴＮＦ抗肿瘤活性和结合ＩＬ－６受体的能力,在高表达ＩＬ－６受体的人骨髓瘤细胞上测得的细胞毒活性较同样位点突变的ＴＮＦ高约３倍。     

植物几丁质酶的研究进展

几丁质酶是植物抗真菌基因工程的热点之一。本文叙述了植物几丁质酶的特性、结构和功能、基因结构;按最新资料对以前的植物几丁质酶的分类系统进行了完善;概述了几丁质酶的分子进化的各家观点及其模型,并归纳了植物几丁质酶的生物学作用 。     

Visualization of polarized membrane type 1 matrix metalloproteinase activity in live cells by fluorescence resonance energy transfer imaging

Membrane type 1 matrix metalloproteinase (MT1-MMP) plays a critical role in cancer cell biology by proteolytically remodeling the extracellular matrix. Utilizing fluorescence resonance energy transfer (FRET) imaging, we have developed a novel biosensor, with its sensing element anchoring at the extracellular surface of cell membrane, to visualize MT1-MMP activity dynamically in live cells with subcellular resolution. Epidermal growth factor (EGF) induced significant FRET changes in cancer cells expressing MT1-MMP, but not in MT1-MMP-deficient cells. EGF-induced FRET changes in MT1-MMP-deficient cells could be restored after reconstituting with wild-type MT1-MMP, but not MMP-2, MMP-9, or inactive MT1-MMP mutants. Deletion of the transmembrane domain in the biosensor or treatment with tissue inhibitor of metalloproteinase-2, a cell-impermeable MT1-MMP inhibitor, abolished the EGF-induced FRET response, indicating that MT1-MMP acts at the cell surface to generate FRET changes. In response to EGF, active MT1-MMP was directed to the leading edge of migrating cells along micropatterned fibronectin stripes, in tandem with the local accumulation of the EGF receptor, via a process dependent upon an intact cytoskeletal network. Hence, the MT1-MMP biosensor provides a powerful tool for characterizing the molecular processes underlying the spatiotemporal regulation of this critical class of enzymes.     

猪生产激素基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及产物的N—糖基化分析

利用含有强启动子PAOX1和α-MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重复组质粒pPICZαA－pST。通过电击将经SacI酶后线化的pPICZαA－pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X－33菌中,并筛选Mut^ 表型的重型的生组菌。表达产物的SDS－PAGE和Western blot结果表明,分泌于胞外的PST蛋白分子量比天然PST分子量稍大,而胞内的PST蛋白分子量与天然PST大小相同,将经SacI酶切后线性化的pPICZαA－pST再次转化重组酵母细胞X－33／pPICZαA－pST(Mut^ ）,所得表达产物的SDS－PAGE和Western blot结果显示,PST基因的表达水平明显提高,且表达产生的蛋白均可发生正确的抗原－抗体结合反应,表达量达956mg/L。将发酵液上清进行N－糖基化分析,显示rPST无N－糖基化加工修饰。     

自然保护区管理有效性评价方法的比较与应用

建立自然保护区是保护生物多样性的最重要的途径之一,开展自然保护区管理有效性评价是了解自然保护区管理状况、提升保护区管理水平、实现保护区管理目标的有效途径。在国际自然保护联盟世界保护区委员会(WCPA)提出的保护区管理有效性评价框架的基础上, 世界上很多国家和组织机构根据本国的实际情况开发了更为详细的评价方法。这些方法可以归为4类, 包括基于证据的深入评价法、基于同行评定的综合评价法、基于专家知识的快速记分评价法, 以及基于假设的分类评价法。本文比较了这4类方法的应用范围、对象、目的、形式, 以及各类方法的优缺点及其适用条件, 总结了8种主要方法的评价指标的构成及其应用现状。在此基础上, 分析了自然保护区管理有效性评价方法在中国自然保护区中的应用及存在的问题, 并提出了适用于中国自然保护区管理有效性评价的方法及其评价指标构成。     

大血藤的化学成分及药理作用研究进展

以近几十年来国内外的文献为依据,从化学成分和药理作用方面综述了大血藤的研究进展。迄今已从大血藤中分到了多种化学成分,主要为酚酸、木脂素、三萜、挥发油等化合物,药理研究表明其具有抑菌、抗炎、抗病毒、抗过敏、抗氧化、抗肿瘤、耐缺氧、防辐射等作用,对心血管系统有较好的保护作用。大血藤化学成分复杂,药理作用广泛,具有较高的研究开发价值和广泛的应用前景。     

烟曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析

探索获得优良的β-葡萄糖苷酶基因,对实现其工业化生产具有重要意义。烟曲霉Aspergillus fumigatus基因组中含有一个bgl基因(1 752 bp),编码的蛋白约65 kDa,推测为属于糖苷水解酶家族的β-葡萄糖苷酶。将bgl基因克隆并构建了重组表达载体pGEX-bgl,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导获得表达。重组蛋白经亲和层析纯化后,以七叶苷为底物进行了酶学分析,结果表明该酶的最适温度是45℃,最适pH在5.5~6.0之间,对七叶苷的Km值为17.7 mmol/L。该酶在pH 4~7范围内稳定;70℃保温2 h后仍能保持60%的活性。金属离子和化学试剂对酶活性有不同程度的影响,Ca2+对重组酶有轻微的激活作用,而SDS可强烈抑制其活性。由于其相对于真菌来源的其他葡萄糖苷酶稳定性较高,为进一步的研究与应用奠定了基础。     

丝氨酸蛋白酶抑制剂Ea的表达纯化与活性分析

Ea是一种植物来源的丝氨酸蛋白酶抑制剂,分子量为18kD。利用其与丝氨酸蛋白酶家族成员的结合特性,可用于丝氨酸蛋白酶的结构与功能研究,也可作为亲和层析的配体而用于丝氨酸蛋白酶的纯化。将Ea基因插入大肠杆菌表达载体pET11a,在BL21(DE3)菌中以包涵体形式表达出重组蛋白质,表达量可占菌体蛋白质总量的30%。将包涵体变性、复性,得到具有天然抑制活性的rEa。经两步纯化所得rEa的纯度达到967%以上。活性分析表明,rEa对胰蛋白酶和人组织型纤溶酶原激活剂均有抑制作用。制备成rEaSepharose亲和柱可有效结合胰蛋白酶。     

中国附丝壳属研究Ⅱ.

报道了中国附丝壳属AppendiculellavonHoehnel5个种。其中野桐附丝壳AppendiculellamallotiB.SongetY.X．Hu为新种,其余4个种为我国大陆的初次报道。新种有拉丁文、中文描述和显微结构图。所有标本保藏于广东省微生物研究所标本室（HMIGD）。