悬浮培养HEK-293 N3S细胞生产重组腺病毒Ad-GFP的实验研究

利用5L生物反应器悬浮培养HEK-293 N3S细胞生产携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(recombinant adenovirus-green fluorescent protein,Ad-GFP),为规模化生产腺病毒基因药物建立一种稳定可行的生产工艺。复苏的种子细胞进行逐级放大最后接入5L搅拌式生物反应器中,采用含5％胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培基灌流培养293 N3S细胞,当细胞密度达到(2～4)×10⁶个/mL时感染Ad-GFP,48h后收获细胞,经两步氯化铯超速离心获得纯化的Ad-GFP。采用紫外分光光度计比色法和高压液相色谱法（HPLC）测定病毒颗粒数和纯度,采用组织培养半数感染剂量（TCID₅₀）法检测腺病毒的感染滴度。连续培养10～12d,细胞密度可达到(2～4)×10⁶6个/mL左右,纯化的Ad-GFP感染滴度和颗粒数分别为1.0×10¹¹IU/mL和1.68×10¹²VP/mL,比活性为6.0%,A₂₆₀A₂₈₀比值为1.33,产品纯度达到99.2%。建立了5L生物反应器悬浮培养293 N3S细胞生产重组腺病毒Ad-GFP的生产工艺,对携带其他基因的重组腺病毒药物生产具有一定的指导意义。     

重楼皂甙Ⅱ对狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25+T调节细胞表达的细胞因子的影响

目的:研究重楼皂甙Ⅱ对狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25+Treg分泌的细胞因子IL-10和TGF-β的影响。方法:10例健康人为正常对照组,20例LN病人随机分为四组:LN对照组(n=5)、重楼干预组1(n=5,接种细胞数为1×105/1.5ml/孔)、重楼干预组2(n=5,接种细胞数为2×105/1.5ml/孔)、重楼干预组3(n=5,接种细胞数为5×105/1.5ml/孔)。分离外周血单个核细胞,利用免疫磁珠法分离CD4+CD25+Treg。重楼干预组予重楼皂甙Ⅱ干预,正常对照组和LN对照组不予处理,各组培养72h。取各组上清,用ELISA分别检测IL-10和TGF-β的水平。结果:与正常组比较,其余各组TGF-β和IL-10的水平明显降低(P<0.01)。与LN对照组比较,重楼皂甙Ⅱ干预后各组TGF-β和IL-10的水平升高(P<0.05)。重楼干预组之间比较,重楼干预组2的TGF-β和IL-10水平较其他两组明显升高(P<0.01),而重楼干预组1和3的TGF-β和IL-10水平变化无显著性差异(P>0.05)。结论:重楼皂甙Ⅱ可上调LN患者TGF-β和IL-10的水平,上调的幅度受接种细胞数量的...     

四川绵阳地区野生猕猴肠道寄生虫感染的调查研究

对四川绵阳地区野生猕猴抽样100只,分别采用饱和食盐水漂浮法和沉淀集印法检查粪便中寄生虫卵,监测肠道寄生虫的感染率和感染强度。结果显示,感染当地野生猕猴的肠道寄生虫主要有8种,总感染率为78．0％,分别为：吸虫50．0％,毛尾线虫48．0％,蛲虫41．0％,钩虫32．0％,蛔虫26．0％,泡状带绦虫16．0％,球虫4．0％,后圆线虫4．0％,感染强度为毛尾线虫“＋＋＋＋”,蛲虫“＋＋＋＋”,吸虫“＋＋＋”,钩虫“＋＋＋”,蛔虫“＋＋”,泡状带绦虫“＋”,球虫“＋”,后圆线虫“＋”。表明该地区野生猕猴寄生虫感染较普遍,感染强度较大。     

广东鳞伞属的研究初报

本文报导广东鳞伞属Pholiota(Fr.)Kummer 12种,其中1个新种,6个国内新纪录种。新种是短柄鳞伞Phollota brevipes Bi。     

生殖器疱疹初发患者外周血淋巴细胞检测结果分析

目的检测生殖器疱疹初发患者（GH）外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞和B细胞的表达水平,探讨其发病机制与细胞免疫功能之间的关系。方法应用流式细胞仪检测20例初发生殖器疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞和B细胞的表达水平,并与60例复发性生殖器疱疹患者（RGH）、35例健康对照者外周血检测结果相比较。结果（1）初发组和对照组相比,除NK细胞降低差异有显著性外,其他差异无显著性;（2）初发组与复发组相比,初发组T细胞、CD4^＋细胞、CD4^＋／CD8^＋均高于复发组,CD8^＋细胞百分比低于后者,差异有显著性;B细胞、NK细胞比例差异无显著性;（3）复发组与对照组相比,外周血中T细胞、CD4^＋细胞、NK细胞所占比例,CD4^＋／CD8^＋均降低,差异有显著性;CD8^＋细胞百分比升高,差异有显著性;B细胞比例差异无显著性。结论生殖器疱疹初发患者存在细胞免疫功能异常。     

敲低EDAG抑制乳头状甲状腺癌细胞的增殖

为研究EDAG在人乳头状甲状腺癌病人组织中的表达及在乳头状甲状腺癌细胞中的作用,利用免疫组化检测31例乳头状甲状腺癌癌组织及癌旁组织中EDAG蛋白的表达,并进行数据分析.包装EDAG敲低慢病毒颗粒,感染乳头状甲状腺癌细胞系K1,建立EDAG敲低稳定细胞株,检测EDAG敲低对细胞增殖、克隆形成、周期和凋亡的影响. 结果显示,EDAG蛋白在乳头状甲状腺癌癌组织中异常高表达,而在对应癌旁组织极低表达或不表达.建立稳定敲低EDAG的K1细胞株,敲低效果达到约96%,敲低EDAG后细胞增殖变缓,倍增时间由18.49±0.19 h变为19.47±0.11 h,且克隆形成能力下降,G0/G1期比例升高,无血清培养时凋亡增多.本文报道了EDAG在乳头状甲状腺癌病人中高表达,且敲低甲状腺癌细胞系K1中内源EDAG抑制细胞增殖,降低细胞克隆形成能力,G0/G1期增多,凋亡升高,提示EDAG异常高表达可能在甲状腺癌发生发展中具有重要作用.     

土壤与大气Cu处理下迎春的耐性和富集特征研究

作为北京市常见园林灌木树种之一，迎春(Jasminum nudiflorum)因其在早春独特的观赏性而深受市民喜爱。Cu污染是北京市较为严重的重金属污染类型之一。为探讨迎春对城市Cu污染的修复作用，该文通过模拟北京市土壤和大气Cu污染条件，采用盆栽试验，设置9种不同浓度的土壤和大气Cu处理，以验证迎春Cu富集能力及生理生长特性。结果表明：(1)土壤和大气沉降处理均能显著增加迎春根、茎、叶中的Cu含量，其中土壤贡献率为63.48%～96.99%。各处理中Cu含量均表现为根>茎>叶。(2)大气处理下光化学转化效率(F_v/F_m)和相对叶绿素含量(SPAD值)提高，初始荧光(F₀)降低，光合能力增强，而土壤处理及土壤和大气双重处理则对迎春的光合作用产生抑制影响。(3)与大气处理相比，土壤处理及土壤和大气双重处理导致活性氧(ROS)积累增多，膜脂过氧化作用加剧，丙二醛(MDA)含量大幅升高，抗氧化酶活性与脯氨酸(PRO)含量逐渐下降，造成生物膜系统损伤。(4)低浓度Cu处理对迎春生长有促进作用，而高浓度Cu处理(SHA...     

生物化学混合式教学模式的效果评价

目的 翻转课堂的教学模式可以提高学生的学业成绩和认知,培养学生学习的主动性和创新能力,但在系统化掌握知识和育人方面存在明显的不足。传统教学“以教师为中心”的教学理念却有着知识学习系统化和育人方面的独特优势。近年来将翻转课堂和传统教学相结合的混合式教学模式改革时有报道,但在护理和临床医学专业的生物化学教学中尚未开展相关研究。方法 在山东大学齐鲁医学院2020级护理专业（31人）和临床医学专业（245人,分2个班）的生物化学教学中引入了翻转课堂与传统教学相结合的混合式教学模式,并与2019级的传统式教学模式进行比较,对学生的学业成绩和认知情况进行统计分析。结果 与传统教学相比,接受混合式教学的学生成绩高于传统式教学的学生成绩（P<0.01）,学生的认知能力也有显著改善（P<0.01或P<0.05）;混合式生物化学教学在小班（护理专业）的实施效果比在大班（临床医学专业）的效果更好,该研究为医学院校的相关教学和研究工作提供了参考。结论 生物化学混合式教学模式有益于医学院校的教学改革。     

VCTDSA联合CT灌乌司他丁联合硝苯地平控释片对ESWL术后肾功能的保护作用

目的：观察乌司他丁（商品名天普洛安）和硝苯地平控释片（商品名拜新同）对体外冲击波碎石术（ESWL）所致急性肾功能损害的保护作用。方法：将80例接受ESWL治疗的肾结石患者,随机分为天普洛安组、拜新同组、天普洛安和拜新同联合组以及对照组,每组20例。检测并比较ESWL前1d和后1、3、5d患者尿丙二醛（MDA）、N-乙酰-β-1）．氨基葡萄糖苷酶／肌酐（NAG／Cr）和24h尿B2-微球蛋白（p2-MG）的变化。结果：EWSL术后第1天,对照组MDA、NAG／Cr和β2-MG水平均明显高于术前（P〈0．05）,且随着术后时间的延长,患者MDA、NAG／Cr和β2-MG水平呈逐渐下降趋势,术后第1、3、5天治疗组MDA、NAG／Cr和132．MG数值均明显低于相同时点对照组（P〈0．05）。术后第1、3天,联合用药组MDA、NAG／Cr和[32-MG水平明显低于单独用药的两组（乌司他丁组和拜新同组）（P〈0．05）,第5天联合用药组MDA、NAG／Cr和β2-MG水平与单独用药的两组（乌司他丁组和拜新同组）比较均无明显差异（P〉0．05）,单独用药的两组（乌司他丁组和拜新N组）之间在相同时点MDA、NAG／Cr和β2-MG水平无明显差异。结论：乌司他丁可显著减轻ESWL所致的肾损伤,与钙离子拮抗剂联合用药效果更佳。     

底栖铜藻和漂浮铜藻生长与光合生理的比较

铜藻是构成"金潮"的关键种.为了探索"金潮"的爆发原因,采集同一位点的底栖和漂浮铜藻,在温度15℃、光照强度5000 lx条件下,经过7天培养后,比较了两类铜藻生长速率和各组织部位(新生叶、老叶、气囊、枝干)生长以及光合生理的差异.结果表明:漂浮铜藻的生长速率(RGR)为8.25％? d-1,而底栖铜藻的RGR仅为5....