绵羊胞内单精子注射技术

本文的主要目标是建立绵羊胞内单精子注射技术(intracyioplasmic sperm injection,ICSI)。并且尝试了ICSI技术生产绵羊转基因胚胎的可能性。实验1比较了绵羊卵母细胞孤雌激活的3种化学方法。结果显示,Ionomvcin/3 h/6-dimethylaminopurine(6-DMAP)和Ionomycin激活胚的卵裂率(71.7%和91.8%)和囊胚率(17.4%和11%)显著(P<0.01)高于Ca~(2+)激活胚(18.4%和0)。Ionomycin/3 h/6-DMAP激活胚的囊胚发育形态和比例相对较高。实验2中,活精子注射至卵母细胞质后,用Ionomycin/3 h/6-DMAP激活,排出第二极体(PB2)的71枚ICSI胚胎用SOFaaBSA溶液培养,卵裂率为71.8%(51/71),显著(P<0.01)高于体外受精(41.4%,IVF)和阴性对照胚胎(30.2%,sham-ICSI)。培养7天后,sham-ICSI组没有囊胚生成;ICSI和IVF胚胎的囊胚率分别为7.0%(5/71)和16.1%(9/56),两者差异不显著(P>0.05)。这些ICSI囊胚在冷冻前后均能孵化,显示初步建立了绵羊ICSI技术。另外,我们探索了ICSI技术生产转基因胚胎的可能性,-20℃冻融1次的死精子与pEGFP-N1质粒共注射,33枚2-细胞期ICSI胚胎中,2枚可见GFP蛋白。其中1枚停止发育,另外1枚继续发育至16-细胞期,仍然可见GFP基因的表达。4枚解冻的ICSI囊胚手术移植给2只发情同期化受体绵羊,60天时,B超未见怀孕。本文初步结果表明,ICSI技术生产转基因绵羊有可能性,需深入研究。     

黄海鳀鱼时空分布季节差异分析

利用1986-2010年的底拖网调查数据,基于GIS的空间分析和地统计分析技术,从不同角度阐明在捕捞压力和气侯变化的双重胁迫下,黄海鳀鱼资源密度时空分布及其变动的季节差异.结果表明:不同季节鳀鱼空间分布趋势变化明显,冬季,资源密度从调查区域东北部向岸边和南部水域递减,春季,与冬季相反,资源密度由岸边向东部水域递减,夏季,整体上资源密度呈北高南低的趋势,但高值点散乱分布,秋季,与冬季相似,资源密度由东部水域向岸边环形递减,但变化梯度较冬季缓和;鳀鱼资源密度重心季节变化明显,但不同年代变化规律并不相同;1986-2010年,春、夏和秋3个季节,鳀鱼资源密度重心均向北移动,冬季,资源密度重心年间变化明显,但无整体迁移规律;不同季节,鳀鱼资源密度高值聚集区空间分布位置不同.     

双重荧光染色监测听毛细胞游离钙

豚鼠耳蜗分离外毛细胞经fluo-3和fura-red染色后,用激光扫描共聚焦显微镜监测其胞内游离钙的空间分布和动态变化,以fluo-3/fura-red荧光比值大小指示游离钙浓度的高低。外毛细胞胞内游离钙呈不均匀分布,荧光比值分别为细胞质1.71±0.85,质膜1.61±0.75,表皮板1.47±0.65及胞核1.39±0.66,显示细胞质游离钙浓度最高而胞核游离钙浓度最低。静息状态下连续扫描时荧光比值变化小于0.1,而在受到机械刺激后荧光比值增加幅度达0.3—1.2。实验结果表明,fluo-3和fura-red双发射比例法能更准确反映听毛细胞胞内钙的空间分布和动态变化,第二信使钙可能参与了听毛细胞的机械-电换能过程,研究了换能过程中听毛细胞钙信号的时空模式。     

张家口地区木糖氧化无色杆菌耐药性的相关基因分析

目的：了解张家口地区木糖氧化无色杆菌耐药性的相关基因的基因型别,为临床合理使用抗生素提供实验依据。方法：应用改良三维试验法筛选耐β-内酰胺类药物的菌株,再结合PCR技术和序列测定检测耐药菌ESBLs和AmpC酶的基因型别,最后进行统计学分析。结果：2010年12月~2011年12月本地区临床分离的48株木糖无色杆菌菌株中有32株对β-内酰胺类药物耐药,检出率高达66.7%,其中14株单产ESBLs,5株单产AmpC酶,9株同时产ESBLs和AmpC酶,4株为未知型菌株;筛选出的耐药菌中有24株PCR结果阳性,分属于不同耐药基因型并发现存在多重耐药基因。ESBLs以TEM型检出率最高,均为TEM-1亚型;AmpC酶检出率也较高,均为DHA-1型;多重耐药基因TEM＋CTX-M-1＋AmpC检出率最高。结论：张家口地区木糖氧化无色杆菌的耐药现象严重,临床上应严格掌握头抱菌素类药物的使用以取得更好的治疗效果。     

某部入伍新兵心理卫生服务状况及需求调查

目的：调查入伍新兵心理卫生服务状况及对心理卫生服务的需求。方法：采用质性研究和量性研究相结合的方法,对42名入伍新兵作半结构性访谈,编制《部队心理卫生服务状况和需求》调查表,采用调查表对1609名新兵进行调查。结果：9．4％的新兵心理健康知识比较了解;接近半数新兵（43．5％）对心理健康知识很感兴趣;新兵获取心理知识的途径依次为网络、心理知识讲座、报刊杂志、广播电视、面对面咨询;新兵最期望获得的心理知识依次为如何调节自己的情绪、如何建立良好的人际关系、如何塑造自己的个性和常见的心理障碍表现;新兵认为最有帮助的心理服务形式依次为一对一心理咨询、心理知识讲座、心理测验和团体心理活动;只有7．7％的新兵接受过心理卫生服务。结论：新兵对心理健康知识感兴趣,但认知度和利用度均较低,应通过网络、心理知识讲座等方式普及新兵需要的心理健康知识。     

A chronocoulometric aptasensor based on gold nanoparticles as a signal amplification strategy for detection of thrombin

A sensitive chronocoulometric aptasensor for the detection of thrombin has been developed based on gold nanoparticle amplification. The functional gold nanoparticles, loaded with link DNA (LDNA) and report DNA (RDNA), were immobilized on an electrode by thrombin aptamers performing as a recognition element and capture probe. LDNA was complementary to the thrombin aptamers and RDNA was noncomplementary, but could combine with [Ru(NH₃)₆]³⁺ (RuHex) cations. Electrochemical signals obtained by RuHex that bound quantitatively to the negatively charged phosphate backbone of DNA via electrostatic interactions were measured by chronocoulometry. In the presence of thrombin, the combination of thrombin and thrombin aptamers and the release of the functional gold nanoparticles could induce a significant decrease in chronocoulometric signal. The incorporation of gold nanoparticles in the chronocoulometric aptasensor significantly enhanced the sensitivity. The performance of the aptasensor was further increased by the optimization of the surface density of aptamers. Under optimum conditions, the chronocoulometric aptasensor exhibited a wide linear response range of 0.1–18.5 nM with a detection limit of 30 pM. The results demonstrated that this nanoparticle-based amplification strategy offers a simple and effective approach to detect thrombin.     

Discovery of a disused desaturase gene from the pheromone gland of the moth Ascotis selenaria, which secretes an epoxyalkenyl sex pheromone

Female Ascotis selenaria (Geometridae) moths use 3,4-epoxy-(Z,Z)-6,9-nonadecadiene, which is synthesized from linolenic acid, as the main component of their sex pheromone. While the use of dietary linolenic or linoleic fatty acid derivatives as sex pheromone components has been observed in moth species belonging to a few families including Geometridae, the majority of moths use derivatives of a common saturated fatty acid, palmitic acid, as their sex pheromone components. We attempted to gain insight into the differentiation of pheromone biosynthetic pathways in geometrids by analyzing the desaturase genes expressed in the pheromone gland of A. selenaria. We demonstrated that a Δ11-desaturase-like gene (Asdesat1) was specifically expressed in the pheromone gland of A. selenaria in spite of the absence of a desaturation step in the pheromone biosynthetic pathway in this species. Further analysis revealed that the presumed transmembrane domains were degenerated in Asdesat1. Phylogenetic analysis demonstrated that Asdesat1 anciently diverged from the lineage of Δ11-desaturases, which are currently widely used in the biosynthesis of sex pheromones by moths. These results suggest that an ancestral Δ11-desaturase became dysfunctional in A. selenaria after a shift in pheromone biosynthetic pathways.     

野野村氏菌FIM02-765的分类鉴定及Simaomicin α的抗肿瘤活性

明确海洋沉积物来源的放线菌FIM02-765的分类地位,揭示其代谢产物Simaomicinα的抗肿瘤活性。通过形态学、生理生化特征、细胞糖分组成分析以及16S rRNA序列分析,对海洋放线菌FIM02-765进行菌种鉴定;通过大孔吸附树脂柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱层析从该菌的发酵产物中分离得到稠环氧杂蒽酮类化合物Simaomicinα;通过MTT法对化合物Simaomicinα的体外抗肿瘤细胞活性进行了研究。结果表明,菌株FIM02-765属于野野村氏菌(Nonomuraea sp.),同时该菌产生的稠环氧杂蒽酮类化合物Simaomicinα具有较强体外抑制多种肿瘤细胞增殖的活性。研究表明1株经鉴定的海洋野野村氏菌FIM02-765产生稠环氧杂蒽酮类化合物Simaomicinα对肿瘤细胞具有较强体外抑制活性,为深入开展该菌的遗传育种以及Simaomicinα的生物合成研究提供参考。     

不同干预时机下复方嗜酸乳杆菌片联合四联疗法在根除幽门螺杆菌失败补救治疗中的应用

目的探讨不同干预时机下复方嗜酸乳杆菌片联合四联疗法在首次根除幽门螺杆菌(H. pylori)失败患者补救治疗中的作用。方法选择西安市第一医院消化内科90例经标准四联疗法根除H. pylori失败的患者为研究对象,随机分为研究组A(A组)、研究组B(B组)与对照组(C组),各30例。A组患者使用复方嗜酸乳杆菌片联合补救四联疗法治疗。B组患者在补救四联疗法结束后序贯使用复方嗜酸乳杆菌片2周。C组患者单独采用补救四联疗法治疗。比较3组患者临床症状、不良反应发生率及H. pylori根除率。结果A组、B组、C组患者总有效率分别为93.33%(28/30),90.00%(27/30),66.67%(20/30),差异有统计学意义(χ²=9.120,P=0.010)。A组、B组、C组患者总不良反应发生率分别为13.33%(4/30)、16.67%(5/30)、66.67%(20/30),差异有统计学意义(χ²=24.522,P<0.001)。A组、B组、C组患者H. pylori根除率分别为60.00%(18/30)、63.33%(19/30)、33.33%(10/30),差异有统计学意义(χ² =6.502,P=0.039)。A组与B组患者H. pylori根除率相比差异无统计学意义(χ²=0.071,P=0.791)。结论复方嗜酸乳杆菌片联合四联疗法可提高首次四联疗法根除H. pylori失败患者H. pylori根除率,改善患者临床症状,降低总体不良反应发生率,但不同干预时机下复方嗜酸乳杆菌片对H. pylori根除率无明显影响。