位点特异整合微环DNA的体内制备

目的:应用诱导表达的LR克隆酶系统,建立一种在细菌体内获得基于链霉菌噬菌体ФC31整合酶系统的位点特异整合型微环DNA的方法,为实现无细菌骨架等冗余序列的转基因奠定基础。方法:构建包含阿拉伯糖启动子的LR克隆酶系统和ФC31整合酶系统的亲本质粒,在L-阿拉伯糖的诱导下重组产生表达ФC31整合酶的微质粒和包含有目的基因和attB位点等元件的微环DNA。以限制性内切核酸酶酶切电泳定性其重组效率,qPCR定量分析微环、微质粒及亲本质粒的比例,定量计算重组效率。观察随着诱导时间的推进微环/微质粒值的变化。结果:细菌体内LR克隆酶系统可有效催化亲本质粒的重组,重组率达85%以上。相比商品化LR克隆酶体外反应具有更高的稳定性而且更经济。结论:获得了一种高效、稳定的细菌体内产生位点特异性整合型微环DNA的亲本质粒。     

高效液相色谱法测定五味子乙素含量

采用高效液相色谱法,测定了五味子果实中五味子乙素的含量,检测波长为254 nm,标准曲线线性关系R²为0.9907,相对标准偏差为0.48%,平均加样回收率为99.14%。结果表明,此方法准确度较高,为五味子生药及成品药中五味子乙素含量测定提供了一种切实可行的方法。     

用6个微卫星座位研究BMY牛和婆罗门牛的遗传多样性和群体遗传结构

 对6个牛微卫星座位的遗传变异及多态性分析,以期了解BMY牛和婆罗门牛的群体遗传结构与育成情况。6个微卫星座位的多态信息含量为在0.524～0.752间,BMY牛、婆罗门牛两个群体的平均期望杂合度和观察杂合度值接近,分别为0.737 6和0.739 6,0.641 2和0.653 7,进入横交固定第二世代的BMY牛期望杂合度值较高,这与我们的育种进展相符。红安格斯的期望杂合度较低(0.460 9)接近日本和牛0.471,暗示红安格斯牛的同质性较高。                       

黄颡前驼形线虫发生和成熟的季节动态

报道了寄生于黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)胃、肠中的黄颡前驼形线虫(Procamallanus fulvidraconis)的成熟和感染丰度的季节动态。从2001年2月到2002年7月的18个月中,对来自于湖北省梁子湖的900尾黄颡鱼进行了调查,结果表明:该线虫的感染率除在2002年1月比较低(32%)外,其他月份都在90%以上,且没有显著的季节性变化(G=16.9620.0517=27.58);平均丰度也是在2002年1月较低(0.46),其他月份都高于6.32,但感染丰度表现出显著的季节性变化(F=12.58>F0.0117,882=1.98)。在对黄颡前驼形线虫雌虫成虫的三个阶段(成熟期、怀卵期和怀幼期)和雄虫成虫的季节变化分析中发现:该线虫的生命周期为一周年;处于成熟期的雌虫在2-3月达到高峰,怀卵期雌虫在5-7月达到高峰,怀幼期雌虫则在6-9月达到高峰。因此推测:雌虫从第一期幼虫发育到成熟期(显隐前期)可能需要5-6个月,成熟期到怀卵期需要4-5个月,怀卵期到怀幼期需要1-2个月;第一期幼虫的释放应该在秋季,第三期幼虫的感染主要发生在晚冬和早春。本文还讨论了引起黄颡前驼形线虫在黄颡鱼中高感染率和高感染强度的原因。       

基于PBL 构建的儿科学实习教学

PBL教学以问题为核心,以启发的方式和讨论的方式进行教学,该教学方法可以充分调动学生学习的主动性,比传统的教学方法更能有效完成儿科学实习教学,且有利于早期培养医学生良好的临床问题处理能力。本文论述如何将PBL教学模式引入儿科学实习教学,以及PBL教学法在儿科学实习教学中需注意的问题:问题设计合理、根据病人的不同调整教学方法、根据实习同学的不同调整教学内容和带教老师正确掌握角色任务。     

花生四烯酸油脂高产菌株的选育

以高山被孢霉为出发菌株,抗氧化剂——没食子酸辛酯为筛选剂,经过紫外-LiCl复合诱变处理,筛选出抗脂肪酸脱氢酶抑制剂的菌株。将筛选出的菌株经过摇瓶发酵复筛,筛选到1株生产性能优于出发菌株的突变株R807。与原始菌株相比,该菌株的油脂组成脂肪酸分布中C18系列脂肪酸相对较少,花生四烯酸(ARA)占总脂肪酸的含量保持在40%(质量分数)以上。其菌体生物量达到39.2 g/L,油脂产量达到16.3 g/L,ARA占总脂肪酸含量为41.72%(质量分数),ARA产量达6.81 g/L。各数值比原始菌株分别提高了22.9%、3.2%、35.1%和39.8%。连续传代多次,其产量性状无显著变化。     

TaqMan探针荧光PCR检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7方法的建立

肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagie Escherichia coli,EHEC)O157:H7是一种重要的传染病病原菌,以EHEC O157:H7标准菌株rfbE保守区设计一对特异引物和一条探针,建立了检测EHEC O157:H7核酸的荧光定量PCR检测方法。实验结果表明荧光定量PCR检测方法特异性好,最低检测限为20 cfu/mL,线性范围是102～108cfu/mL。稳定性试验表明批内变异系数和批间变异系数分别为2.06%和2.45%。     

新生猪胰岛保存运输的实验研究

探索新生猪胰岛较长时间有效保存运输的方法,使不同胰岛应用单位间分享胰岛资源成为可能.用胶原酶消化、分离得到新生猪胰岛,培养5 d后收集,将所得胰岛置于自行设计制作的保存运输系统内,分别于置入后2、4、5、7 h,分次取出胰岛进行双硫腙(DTZ)染色、吖啶橙荧光染色、体外葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,确定胰岛细胞的功能和活性,并使用流式细胞仪检测凋亡情况.使用本研究的保存运输方法,在5 h以内,胰岛的功能和活性无明显受损,超过5 h,胰岛明显凋亡,功能、活性显著降低.在脱离培养箱环境情况下,本方法5 h内可以有效保存胰岛.     

慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中蛋白激酶CβI的膜转位和蛋白表达量的影响

目的通过观察慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中蛋白激酶CBI（PKCβI）的膜转位和蛋白表达量的影响,初步探讨PKCpI在慢性低氧诱导大鼠肺动脉高压的发生、发展过程中所起的作用。方法建立慢性常压低氧肺动脉高压大鼠模型,将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组,应用蛋白免疫印迹和免疫组化技术检测肺动脉高压形成过程中大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中PKCβI的膜转位和蛋白表达水平。结果（1）RVSP和RV／（LV＋S）比值较正常对照组明显增加（P〈0．05）,低氧后3d、7d、14d和21d后大鼠肺血管明显增厚;（2）大鼠肺血管平滑肌细胞和成纤维细胞均有PKCβI的表达,且低氧14d后PKCβI的蛋白表达量较正常对照组相比降低（P〈0．05）。结论PKCβI蛋白表达量的下调可能参与了慢性低氧诱导的大鼠肺动脉高压肺血管重塑的发生、发展过程。     

长波紫外线照射对花背蟾蜍肾脏结构损伤

为研究长波紫外线对花背蟾蜍(Buforaddei)肾脏的损伤,用波长为365nm的长波紫外线(UVA)以352μW.cm-2的辐射量对花背蟾蜍亚成体进行150、300和450min的连续照射,分别在照射后立即、3、6、9、12和15d取材,常规石蜡切片。结果表明:UVA照射后,3组不同照射时间的花背蟾蜍肾脏整体结构基本完整,但均出现肾小管管壁破裂,管径显著缩小,肾小囊消失,而300min照射组的损伤则极为明显,其后依次为450min照射组与150min照射组,300与450min照射组的肾小体塌陷程度较150min照射组更为严重;经15d的恢复,虽出现明显好转,但大多指标仍与对照组间存在极显著性差异;UVA对花背蟾蜍肾脏有着不可忽视的损伤,虽然具有一定的自我修复的能力,但在野外,紫外辐射的增强和植被的减少可导致两栖类遭受过度的紫外辐射,进而引起两栖类种群的衰减。