达氏鲟生长激素基因cDNA克隆、表达及免疫荧光定位研究

为研究达氏鲟(Acipenser dabryanus)生长激素(Growth Hormone, GH)基因的功能, 合成了达氏鲟垂体SMART cDNA, 克隆得到GH全长cDNA序列。达氏鲟GH全长cDNA序列为1008 bp, 由52 bp的5'端非编码区(Untranslated region, UTR)、编码214个氨基酸的645 bp开放阅读框(Open reading frame, ORF)和311 bp的3'UTR构成。运用GH氨基酸序列构建进化树分析发现, 达氏鲟与两栖类、爬行类和哺乳类的一致性要高于真骨鱼类。实时荧光定量PCR结果表明, 达氏鲟GH mRNA主要在垂体和下丘脑中表达, 且垂体中GH的表达量约为下丘脑的110倍; Western-blot研究结果与qRT-PCR一致, 仅在垂体和下丘脑中检测到生长激素蛋白, 且垂体中GH的表达量远高于下丘脑。免疫荧光定位结果显示, GH主要定位于垂体中部, 下丘脑中也有少量荧光信号; 苏木精-伊红组织切片染色研究表明, GH主要是由嗜酸性的生长激素分泌细胞分泌。研究为深入研究脊椎动物生长激素基因的进化和人工养殖达氏鲟的生长调控提供了基础。       

甲醛氧化途径关键酶重组蛋白的生化特性及固定化酶吸收甲醛效果研究

甲醛脱氢酶(formaldehyde dehydrogenase,ADH)与甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase,FDH)是甲醛氧化途径的两个关键酶.恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的PADH是一种不依赖谷胱甘肽可以把游离甲醛直接氧化为甲酸的脱氢酶,博伊丁假丝酵母菌(Candida boidinii)的FDH在有NAD+存在时可以把甲酸氧化为二氧化碳.以基因组DNA为模板用PCR方法,从P.putida中扩增出PADH基因的编码区(padh),从C.boidinii中扩增出FDH的编码区(fdh),然后亚克隆到pET-28a(+)中分别构建这两个基因的原核表达载体pET-28a-padh和pET-28a-fdh,转化大肠杆菌,利用IPTG诱导重组蛋白PADH和FDH的表达.通过优化条件使重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的70%以上,通过亲和层析法纯化出可溶性PADH和FDH重组蛋白.对重组蛋白的生化特性分析结果表明:PADH在最适反应温度50℃的活性为1.95 U/mg;FDH在最适反应温度40℃的活性为0.376 U/mg.所表达的重组蛋白与之前报道过的相比,具有更好的热稳定性和更广的温度适应范围.将PADH、FDH两个重组蛋白及辅因子NAD+固定到聚丙烯酰胺载体基质上,对固定化酶甲醛吸收效果的初步分析结果显示固定化酶对空气中的甲醛有一定的吸收效果,说明这两种酶被固定后具有开发成治理甲醛污染环保产品的潜力.     

茶园土壤耐酸铝酵母菌的分离鉴定及其耐铝特性的初步研究

目的为研究铝毒及耐铝机制提供更好的模式生物材料和进一步研究耐铝机制提供依据。方法通过对云南龙陵县茶园土壤耐酸铝微生物的筛选、分离和纯化,筛选出一株Y31耐酸铝酵母。结果经D1/D2区域克隆测序获取全长26S rDNA区域序列,构建系统发育树,初步鉴定Y31为长形隐球酵母（Cryptococcus longus）。在LPM培养基及GM培养基上耐铝水平检测表明Y31分别能耐100 mmol/L和50 mmol/L铝。用不同铝浓度处理酵母菌后,进行FDA PI双染色并用荧光显微镜观察,当铝浓度达到100 mmol/L时,出现明显的细胞凋亡过程。结论本研究为铝毒和生物体耐铝机制提供了生物材料。     

团毛菌目粘菌个体发育比较研究

利用有饲培养方法,对团毛菌目粘菌的盖碗菌属、团网菌属、半网菌属、变毛菌属及团毛菌属 7个种的个体发育进行了比较研究。描述了其原质团发育特征及小胞囊的特点,并将团毛菌目粘菌原质团划分为两种类型,即原始中间型和发达中间型。同时利用光学显微镜及电子显微镜观察描述了子实体的主要发育特征。结果表明,孢丝或孢子表面纹饰不明显的种类较原始,表面纹饰明显的种类为发达类型。     

兴国红鲤ER基因克隆表达及EE2暴露对肝中ER表达的影响

为评估环境内分泌干扰物对鱼类的影响,研究克隆了兴国红鲤雌激素受体（Estrogen receptor,ER）4种亚型ERα、ERβ、ERβ1、ERβ2的全长cDNA序列,氨基酸序列比对发现兴国红鲤ERs分别与3种鲤科鱼类相应亚型具有较高的同源性。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测结果表明,4种ER亚型mRNA在雌雄成体组织中呈现差异表达,雌性个体中,肝、卵巢和肠中4种ERs的表达量均较高;在雄性个体中,ERα和ERβ主要在肝中表达,ERβ1、ERβ2分别在肠和精巢中的表达量最高。将150日龄的兴国红鲤幼鱼分别暴露在0.01、0.1和1 nmol/L的17α-乙炔基雌二醇（EE2）中4周,检测了雌性幼鱼肝中4种ER基因的表达变化情况。在EE2中暴露1-2周后,兴国红鲤雌性幼鱼肝中ERα基因的表达水平有极显著的提升;各浓度EE2能持续显著促进其肝中ERβ的表达;在1-2周内各浓度EE2对ERβ1表达有所抑制;第1周EE2能够抑制ERβ2基因mRNA的表达,并在0.01 nmol/L时抑制作用达到了显著的水平。上述研究结果表明,EE2暴露能诱导或抑制兴国红鲤雌性幼鱼肝中ER亚型的表达,相对于ERβ、ERβ1和ERβ2、ERα可作为EE2短期（1-2周）敏感性生物学标记。     

一株耐铝隐球酵母菌株5-2的分离鉴定及耐铝特性分析

目的分离高耐铝的微生物菌株,为耐铝基因克隆和耐铝机制研究奠定基础。方法用含5 mmol/L铝的平板逐级筛选和纯化,PCR扩增ITS序列和26S r DNA D1/D2序列,用菌株在不同铝浓度的固体培养基和液体培养基中的生长状况鉴定耐铝能力,用ICP-AES测量菌液上清中剩余活性铝的含量。结果通过ITS序列和26S r DNA D1/D2序列比对及形态观察,初步鉴定该菌株为Cryptococcus podzolicus,该菌株的最大耐铝能力达到100 mmol/L,而且该菌株能够吸附溶液中的活性铝,这可能是其耐铝的原因之一。结论该菌种是首次发现具有耐铝能力,从而为土壤微生物耐铝机制的研究及克隆耐铝基因提供了很好的实验材料。     

人参多糖对低温应激大鼠颗粒细胞与卵母细胞的调节

目的 应用体外细胞培养观察人参多糖对低温应激大鼠卵巢卵母细胞发育与颗粒细胞蛋白合成的影响,为研究人参多糖对低温应激大鼠卵巢功能的变化,提高机体耐寒能力提供科学实验解释.方法 培养Wistar大鼠卵巢卵母细胞与颗粒细胞,设37℃对照组,0、-15、-25与-35℃低温应激实验组,观察细胞计数.采用放免分析法测定3H-TdR与3H-Leu CPM值.结果 带卵泡卵母细胞低温应激实验组与对照组比较,生发泡破裂百分率57.14%/36.70%,人参多糖组68.97%/41.13%;带卵丘卵母细胞低温应激实验组与对照组比较,生发泡破裂百分率75.71%/41.14%,人参多糖组71.21%/39.28%,P＜0.05.3H-TdR掺入量人参多糖为参照与对照组比较,人参多糖实验组为1279±191与913±212,低温人参多糖实验组均值为651±211与499±116.低温应激为参照与对照组比较低温实验组均值为499±116与913±212,低温人参多糖实验组均值为651±211与1279±191,P＜0.05.3H-Leu掺入量人参多糖为参照与对照组比较,人参多糖实验组为889±153与617±119,低温人参多糖实验组均值为431±1144与300±119.低温应激为参照与对照组比较低温实验组均值为300±119与617±119,低温人参多糖实验组均值为431±144与889±153,P＜0.05.结论 低温应激抑制卵母细胞发育与颗粒细胞蛋白合成,人参多糖能促进卵母细胞成熟,能使低温应激大鼠卵巢颗粒细胞蛋白合成增加,而对带卵丘的卵母细胞无作用.     

Comparative leaf anatomy of Alpinia Roxb. species (Zingiberaceae) from China

The leaf anatomy of 20 Alpinia species from China was investigated. Results show that there is interspecific variation in the structure of the leaf midrib and petiole which can be used for species identification. Adaxial hypodermis is present in the lamina in all species of subgenus Catimbium and absent from all species of subgenera Dieramalpinia and Aobolocalyx and Alpinia , excepting A. conchigera, A. galanga and A. aquatica , which appear to be closely allied in having subepidermal fibres in midribs and petioles, which are absent from the rest of the species.     

冷驯化对中缅树鼩能量代谢的影响

在5 ±1 ℃条件下对中缅树鼠句进行冷驯化处理, 测定其能量代谢。冷驯化28 d 后, 体重比对照组显著增加7.33 %; 整体能值达到30.47 ±0.46 kJ / g (N = 8) , 比对照组增加4.98 %; 摄入能比对照组增加36.17 %; 同化能比对照组增加66.2 %; 生长能达到6.98 ±0.53 kJ / 100 g (N = 7) 体重·天, 是对照组的4.85 倍; 维持能比对照组增加64.0 % , 达到352.96 ±28.34 kJ / 100 g 体重·天(N = 7) 。以上结果表明中缅树鼠句在冷胁迫影响下, 以增加能量摄入、能量储存和维持能和降低排泄能量的生理机制来维持能量代谢平衡, 以此对策来提高低温环境适应能力。