细胞角蛋白19启动子调控的双报告载体的构建及其在肝干/祖细胞分化研究中的应用

肝干/祖细胞是肝细胞和胆管上皮细胞(biliary epithelial cells,BECs)共同的前体细胞,为了对这一前体细胞的分化情况进行研究,利用报告基因来监测肝干/祖细胞的分化走向．首先,通过PCR方法从肝癌细胞系HepG2的全基因组中克隆了细胞角蛋白19(CK19)启动子片段,构建了CK19启动子调控的海肾荧光素酶和红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)双报告载体(pSicoR-CK19-hrl-mrfp)．其次,将上述慢病毒载体转染肝干/祖细胞后,通过流式细胞分选获得稳定转染的细胞株．再次,将上述细胞株与表达“上皮形态发生素”(Epimorphin,EPM)的PT67细胞共培养后,整合有pSicoR-CK19-hrl-mrfp表达载体的肝干/祖细胞不仅形态发生了变化,而且排列为二维环状结构,另外还检测到由CK19启动子启动表达的海肾荧光素酶和RFP,细胞形态和基因表型都证明肝干/祖细胞经诱导已经分化成为BECs．与此形成对照的是肝干/祖细胞与不表达EPM的PT67细胞共培养后,没有观测到上述的变化．所以,CK19启动子调控的双报告载体不仅可以实时地显示肝原始细胞在不同的诱导环境下的分化走向,而且还可以定量地检测CK19启动子活性的变化情况．总之,这一载体的成功构建将为研究肝干/祖细胞的分化提供了便捷的工具,同时也有助于筛选可诱导肝干/祖细胞定向分化的分子．     

重组抗A型肉毒毒素人鼠嵌合单克隆抗体的瞬时表达及中和活性研究

为了制备重组抗A型肉毒毒素(botulinum neurotoxin A,BoNT/A)人鼠嵌合单克隆抗体并分析中和活性,以BoNT/A作为抗原筛选鼠源抗BoNT/A噬菌体单链抗体库,将筛选得到的鼠源抗BoNT/A特异性单链抗体的重链和轻链可变区分别克隆到pGP5KCγ和pGP5KCκ载体构建表达质粒。表达质粒共转染HEK-293EBNA1细胞,瞬时表达抗BoNT/A人鼠嵌合单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。蛋白A亲和纯化mAb,分子排阻高效液相色谱(size exclusion high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)分析mAb纯度,小鼠中和试验评价mAb中和活性。结果显示,经过筛选得到4个序列正确且各不相同的抗BoNT/A单链抗体。4个抗BoNT/A人鼠嵌合mAb表达质粒均构建成功并转染HEK-293EBNA1细胞,根据转染效率指示绿色荧光蛋白的表达推测,50%～62. 5%的细胞表达抗BoNT/A抗体。表达上清经过蛋白A亲和纯化,浓度均200μg/mL,单体纯度均90%。小鼠中和试验显示mA1、mA2、mA3和mA4单株抗体均不能完全中和4 LD_(50)的A型肉毒毒素,但从延迟小鼠生存时间可以得出4个抗体的中和活性为mA3mA2mA1mA4。mA1、mA2、mA4中任何一个抗体与mA3连用中和活性为80 LD_(50)/mg。本研究制备了4个具有不同程度中和活性的抗BoNT/A人鼠嵌合mAb,为A型肉毒神经毒素鸡尾酒疗法奠定了基础。     

莲的非可食用部分中生物碱分布

研究了莲的非可食用部分荷叶、莲子心、莲房、藕节、莲子壳和藕皮中生物碱的组分及含量。采用乙醇水溶液从非可食用部分提取生物碱,然后用高效液相色谱法进行测定。结果表明莲子心提取物中含有5种主要的生物碱,其中4种为莲心碱、异莲心碱、荷叶碱和甲基莲心碱。除莲子心外的其他部分的提取物组分较相似,都含有6～8种主要的生物碱。荷叶碱在荷叶中的含量最高,可达149.64μg/g;莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱在莲子心中的含量最高,分别为457.76、6155.85、1420.90μg/g。莲的六个非可食用部分中都含有5～8种主要的生物碱,有很好的开发利用价值。     

急性肺损伤大鼠肺组织TOLL样受体4及CD14mRNA的表达

目的 探讨内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织TOLL样受体4及CD14 mRNA表达的变化.方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为2组:对照组、LPS模型组,每组再分为4 h和8 h两个亚组.尾静脉注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg)建立大鼠急性肺损伤模型.检测大鼠动脉血气、肺体指数,实时荧光定量PCR测定肺组织TOLL样受体4及CD14 mRNA的表达,并观察肺组织病理变化.结果 与对照组相比,模型组4 h和8 h时大鼠肺组织中的TLR4及CD14 mRNA表达均显著增高(P＜0.05或P＜0.01).病理学观察显示,模型组大鼠肺组织出现出血及坏死.结论 内毒素致急性肺损伤的发病机制可能与TLR4及CD14 mRNA的表达升高有关.     

美国白蛾天敌研究进展

美国白蛾Hyphantria cunea(Drury)是国家林业和草原局的重点防控对象,也是我国重大外来林业检疫性有害生物.现阶段美国白蛾在我国的种群密度持续增加和扩散,缺乏有效天敌的控制应该是重要的原因之一.本文综述了国内、外美国白蛾的捕食性和寄生性天敌的种类.捕食性天敌主要包括昆虫、蜘蛛、两栖类和鸟类,整理出国外报道的捕食性天敌名录119种,国内捕食性天敌名录29种;寄生性天敌主要包括寄生蜂和寄生蝇类,整理出国外报道的寄生性天敌名录47种,国内寄生性天敌名录53种.本文回顾了我国在美国白蛾天敌利用方面取得的阶段成果,并针对将来天敌复合体的应用和原产地天敌的引进提出了展望.     

Cu 型医用抗菌不锈钢在大鼠体内抗细菌感染研究

目的:比较普通304医用不锈钢和304-Cu型医用抗菌不锈钢的体内抗细菌感染性能。方法:将两种不锈钢片涂布浓度为1×107cfu/mL的金黄色葡萄球菌培养24 h,植入SD大鼠胫腓骨肌袋内,继续饲养并在术前及术后第1、4、7、14天进行大体观察、植入部位细菌培养、白细胞计数、组织学观察等检测。结果:普通304不锈钢组术后中度化脓,检测到较多细菌,白细胞增多且有大量的炎症细胞出现;而304-Cu型抗菌不锈钢术后只有轻微化脓,检测到的细菌较少,白细胞数稍有增多但无统计学差异,炎症细胞少,感染程度轻。结论:与医用304不锈钢相比,304-Cu型抗菌不锈钢有较好的抗细菌性能,有一定的抗感染作用。     

Availability of unfertilised eggs increases the fitness of nymphal crickets (Gryllidae)

1. Female insects of many species lay both fertilised and unfertilised eggs, with the latter accounting for up to 50% of the total number laid. These unfertilised eggs do not hatch and so their relevance is unclear. 2. In the present study, it was found that nymphs of the cricket Velarifictorus aspersus ate unfertilised eggs regardless of whether there was other food available. This provision enabled nymphs to develop successfully when no other food was provided, and to gain additional body mass when other food was available under crowded conditions. These results suggest that unfertilised eggs have an important role in the survival and development of nymphs. 3. Nymphs preferred to eat unfertilised rather than fertilised eggs, suggesting that they may have the ability to distinguish between these two types of eggs. 4. Crowding promoted feeding on unfertilised eggs and accelerate nymphal development, suggesting that greater food consumption accounts for faster growth under grouped conditions.     

苦皮藤籽粕蛋白质品质评价研究

对苦皮藤籽粕氨基酸种类和含量进行了测试,运用模糊识别法和化学分析法对苦皮藤籽粕与文献提供的同科2种植物及常用饲料植物玉米进行蛋白质品质比较。结果表明：苦皮藤籽粕比同科2种植物的氨基酸总量高,蛋白质品质也比同科2种植物的要高;其蛋白质品质与玉米基本相当。作为植物源杀虫剂的副产品,苦皮藤籽粕具有开发利用价值。     

许树中苯乙醇苷类化合物的研究

用层析方法从许树Clerodendrum inerme的乙醇提取物中分离得到9个糖苷类化合物,通过光谱分析,鉴定结构为毛蕊糖苷（verbascoside,1）、异毛蕊糖苷（isoverbascoside,2）、脱咖啡酰基毛蕊糖苷（decaffeoylverbascoside,3）、campneosideI（4）、cistanosideE（5）、markhamiosideF（6）、isocistanosideF（7）、benzyl glucoside（8）和purpureasideB（9）。其中化合物4—9为首次从该植物中分离得到。     

四川省茂县药用种子植物区系分析

为摸清四川茂县药用种子植物资源状况,在茂县第3次和第4次中药资源普查资料的基础上,对茂县药用种子植物区系进行统计分析。结果表明,茂县县域内药用种子植物共130科582属1 342种,包括裸子植物7科14属18种,被子植物123科568属1 324种,其中国家重点保护野生植物18科37属57种。15个大型科(科内种数大于20)分别占总属、种数的48.45%、56.56%,处于主导地位;小型属(含2~4种)共507属783种,分别占总属、种数的87.11%、58.35%。茂县药用种子植物科以热带成分占明显优势(56.52%),而属以温带成分占优势地位(68.11%);茂县的药用种子植物区系比剑阁县和盐边县呈现更为明显的温带性,而较澜沧江源区与错那县的热带成分更为活跃,揭示纬度和海拔可能是决定茂县药用种子植物区系性质的关键因素。因此,茂县药用种子植物区系不仅具有较高的物种多样性,同时还具有一定的区系地理成分复杂性,主要体现在温带性质占主导地位的同时亦呈现较为明显的过渡性质,因此茂县可视作研究横断山脉地区南北植物交流的关键地区之一,在药用种子植物的多样性保护和开发利用研究方面值得重点关注。