Type I microsatellite markers from Atlantic salmon (Salmo salar) expressed sequence tags

The detection of simple sequence repeats (SSRs) within expressed sequence tags (ESTs) connects potential microsatellite markers with specific genes, generating Type I markers. Using an in silico approach, we identified 1975 SSRs from the Genome Research on Atlantic Salmon Project EST database. We designed primers to amplify 158 SSRs, of which 65 amplified 76 loci (including 11 duplicated loci). Sixty‐one of the 76 loci were variable in 24 Atlantic salmon from seven populations, and 96% of these markers also amplify DNA from other salmonids. Functions for 16 of the SSR associated ESTs have been determined, confirming them as Type I markers.     

Analysis of non-TIR NBS-LRR resistance gene analogs in <Emphasis Type="Italic">Musa acuminata</Emphasis> Colla: Isolation,RFLP marker development,and physical mapping

Background  

Many commercial banana varieties lack sources of resistance to pests and diseases, as a consequence of sterility and narrow genetic background. Fertile wild relatives, by contrast, possess greater variability and represent potential sources of disease resistance genes (R-genes). The largest known family of plant R-genes encode proteins with nucleotide-binding site (NBS) and C-terminal leucine-rich repeat (LRR) domains. Conserved motifs in such genes in diverse plant species offer a means for isolation of candidate genes in banana which may be involved in plant defence.     

拼接信号序列单碱基变异提高马传染性贫血病毒mRNA拼接效率

分别以马传染性贫血(马传贫)驴强毒(D—A EIAV)RNA和马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLA EIAV)RNA为模板,利用RT—PCR的方法,克隆到马传贫强、弱毒株基因组外显子2及其下游的核苷酸序列。然后将报告基因CAT插入到EIAV内含子2env阅读框架中,构成CAT拼接报告系统。同时在强毒株重组表达质粒的基础上,将其外显子-3上游拼接受体位点的核苷酸序列CAG突变为弱毒株相应位置的核苷酸序列TAG,得到强毒单核苷酸突变株重组表达质粒。用构建的3个重组表达质粒DNA转染驴血白细胞,ELISA检测转染细胞CAT浓度。结果表明：EIAV强毒株重组表达质粒中CAT蛋白表达量最高,EIAV强毒株重组表达质粒次之,EIAV强毒突变株重组表达质粒最低。由于CAT基因被插入于各重组质粒中的EIAV内含子-2里,EIAV外显子-2、3之间的拼接可导致该基因的删除,因而其拼接效率低于EIAVmRNA外显子-2、3之间的拼接效率。实验数据表明,EIAV SA2拼接信号序列单碱基变异提高了SD2-SA2拼接效率;D—AEIAV SA2-SD2拼接效率比DLA EIAV相应位点拼接效率高。     

猪链球菌检测技术研究进展

猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是引起猪呼吸系统疾病的一类重要的病原菌,给世界养猪业造成了巨大经济损失; SS也可通过伤口、呼吸道等途径感染人。准确、敏感、快速的SS检测方法有助于在生产实践中及时确诊,进而采取相应的预防、治疗和综合防控措施。对SS的检测方法包括选择性培养基、PCR技术、免疫学及分子分型方法等的研究进展进行了综述,并比较了这些方法的优缺点及应用情况,为SS标准诊断方法的建立提供了参考资料。     

用于鉴定microRNA靶基因的新型双萤光素酶报告基因系统的构建及应用

目的:构建用于鉴定microRNA靶基因的报告基因系统。方法:在pGL3-Basic载体的luc基因上游插入CMV启动子,下游插入用于克隆靶基因3’UTR的多克隆位点,构建报告基因载体pMIR-luciferase;将pMIR-lu-ciferase载体的luc基因替换成Rluc基因,构建内参载体pMIR-control;将补体因子H(CFH)的3’UTR插入pMIR-luciferase载体的多克隆位点处,构建含有CFH 3’UTR的报告基因载体;用pIRES2-EGFP载体构建microRNA146a真核表达载体;将含有CFH 3’UTR的报告基因载体、microRNA146a真核表达载体及内参载体共转染HepG2细胞,进行报告基因的活性检测。结果:构建了报告基因载体、内参载体和microRNA146a真核表达载体,经酶切和测序鉴定正确;microRNA146a真核表达载体转染细胞72 h后,经荧光显微镜观察确认载体转染及表达;用实时定量PCR检测,microRNA146a的表达水平显著上调(P<0.01);用构建的报告基因系统检测,结果表明microRNA146a显著地抑制了含CFH 3’UTR的报告基因的活性(P<0.05)。结论:构建了一种新型的报告基因载体系统,该系统可用于miRNA靶基因的鉴定。     

甲型H1N1流感病毒HA基因RT-LAMP检测方法的建立与初步应用

目的:建立反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)检测甲型H1N1流感病毒HA基因的方法,并用于检测临床样本.方法:通过在线软件Primer Explorer V4设计H1N1 HA基因的RT-LAMP引物,建立RT-LAMP检测方法,并评价其灵敏度和特异度.结果:与传统RT-PCR方法相比,RT-LAMP检测方法具备更高的灵敏度,达到10个拷贝,并且具有良好的特异性;在76份呼吸道感染儿童的咽拭子标本中检测到2份阳性,与RT-PCR方法检测结果相同.结论:建立的H1N1 RT-LAMP检测方法灵敏特异,简单快速,具备H1N1现场检测应用前景.     

在同源二聚体转录因子识别螺旋相对运动中发现平面摆动现象

目的:考察同源二聚体转录因子的2个识别螺旋在自由状态下和结合状态下相对运动的特征。方法:从蛋白质结构数据库(PDB)得到1R4I、3JXB、1KB2、1LE8等4个复合物结构文件,分别在自由状态和结合状态下用NAMD进行16 ns分子动力学模拟,将2个识别螺旋所成角分解为垂直偏移角和水平偏移角,并做散点图。结果:2个中心对称结合的同源二聚体转录因子在2种状态下,2个偏移角都相等;串联结合的同源二聚体在结合状态下2个偏移角相等。结论:同源二聚体转录因子识别螺旋相对运动存在平面摆动现象。     

大熊猫胃肠道内分泌细胞分布型的研究

本文用ＰＡＰ法对３只大熊猫胃底,幽门腺区、十二脂肠,空肠,回肠、结肠和直肠的五羟色胺,生长抑素,胃素,胆囊收缩囊,神经降压素、胃动素、抑胃多肽、胰高血糖素、血管活性肠肽和内啡肽的ＩＲ细胞进行了研究。结果表明,大熊猫胃肠道粘膜上皮中具有前八种ＩＲ细胞。对７年龄个体胃肠各段相对数量的比较和各段内分布情况的观察结果表明,除五羟色胺ＩＲ细胞在空肠分布较多外,大多数种类的ＩＲ细胞集中分布于幽门区和十二指肠,     

电子供体及受体对棕色固氮菌抗氨阻遏能力的影响

电子供体连二亚硫酸钠,甲基紫精及电子受体亚甲蓝均能强烈的抑制棕色固氮菌表达固氮活性,并引起该菌的抗氨阻遏能力减弱,适当提高氧压,能提高菌体的固氮活性近15％,但过高的氧分压反而抑制菌体的固氮活性,此外,提高氢分压能降低棕色固氮菌菌体内的还原电位,从而达到提高菌体抗氨阻遏能力的效果。