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用PCR方法扩增人微小纤溶酶原(Microplasmingen,mPlg)基因,再与表达载体重组.构造mPlg原核表达质粒并转化大肠杆菌。阳性克隆pSSE-mPlg经温度诱导表达,SDS-PAGE等方法证明表达产物的分子量约为29kDa。占全菌总蛋白的24%左右,并在菌内形成包涵体。经半胱氨酸再氧化法和空气氧化法复性。表达产物r-mPlg经SK作用后显示纤溶活性。同时对蛋白质浓度、复性时间等因素对复性的影响进行了初步探讨。 相似文献
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HhaI and HpaII DNA methyltransferases bind DNA mismatches, methylate uracil and block DNA repair. 总被引:10,自引:7,他引:3 下载免费PDF全文
The hydrolytic deamination of 5-methylcytosine (5-mC) to thymine (T) is believed to be responsible for the high mutability of the CpG dinucleotide in DNA. We have shown a possible alternate mechanism for mutagenesis at CpG in which HpaII DNA-(cytosine-5) methyltransferase (M.HpaII) can enzymatically deaminate cytosine (C) to uracil (U) in DNA [Shen, J.-C., Rideout, W.M., III and Jones, P.A., Cell, 71, 1073-1080, (1992)]. Both the hydrolytic deamination of 5-mC and enzymatic deamination of C create premutagenic DNA mismatches (G:U and G:T) with the guanine (G) originally paired to the normal C. Surprisingly, we found that DNA-(cytosine-5) methyltransferases have higher affinities for these DNA mismatches than for their normal G:C targets and are capable of transferring a methyl group to the 5-position of U, creating T at low efficiencies. This binding by methyltransferase to mismatches at the recognition site prevented repair of G:U mismatches by uracil DNA glycosylase in vitro. 相似文献
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Cathy M. Tuck-Muller Harold Chen José E. Martínez Chuen-Cheh Shen Shibo Li Christine Kusyk Denise A. S. Batista Yogendra M. Bhatnagar Edmund Dowling Wladimir Wertelecki 《Human genetics》1995,96(1):119-129
Dicentrics are among the most common structural abnormalities of the human Y chromosome. Predicting the phenotypic consequences of different duplications and deletions of dicentric Y chromosomes is usually complicated by varying degrees of mosaicism (45,X cell lines), which may, in some cases, remain undetected. Molecular studies in patients with dicentric Y chromosomes have been few, and only two studies have attempted to determine the presence of SRY (the putative testis-determining factor gene). We report an 18-year-old female with short stature, amenorrhea, hirsutism, hypoplastic labia minora, and clitoromegaly who has a 45,X/46,X,idic(Y)(p11.32)/47,X,idic(Y)(p11.32),idic(Y) (p11.32) karyotype. Southern analysis using Y-specific probes (Y97, 2D6, 1F5, pY3.4) and polymerase chain reaction (PCR) analysis using primers for ZFY and SRY were positive for all loci tested, indicating that almost all of the Y chromosome was present. Our findings and an extensive review of the literature emphasize the importance of molecular analyses of abnormal Y chromosomes before any general conclusions can be reached concerning the relative effects of the Y-chromosome abnormality and mosaicism on sexual differentiation. 相似文献
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棒状类细菌电击转化中多种条件对转化效率的影响 总被引:9,自引:0,他引:9
以质粒PXZl0145电击转化不同棒状类细菌菌株,研究了影响电击转化效率的诸个因素,在含4%甘氨酸的培养基中生长至对数前期的菌体最适用于电击转化,当以同源DNA进行电击转化时,1.μgDNA中转化效率最高可达到8×1O6转化子,但用异源DNA时,转化效率要比前者低102~103倍。 相似文献
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IL-6受体结构与功能的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
IL-6是一个多功能的细胞因子,其生物学作用在很大程度上受IL-6受体(IL-6R)结构和功能的影响。IL-6R由两条多肽链组成,即配体结合链gp80和信号传导链gp130。它们在结构和功能上既有分工又有合作。两种亚基组成的高和力IL-6R是介导细胞效应所必需的。IL-6Rα中的造血功能区属于造血因子受体超家族成员,它决定着结合IL-6的能力,然而gp130则是多种细胞因子共用的信号传递分子,其胞 相似文献
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