HCV特异性反义RNA表达载体的构建及活性评价

反义RNA是反义技术的一个重要领域,为探索丙型肝炎病毒治疗新途径及验证转基因细胞模型HepG2.9706的有效性,设计了一条互补于HCV 5′NCR及翻译起始区(39713核苷酸)的反义RNA序列,将其插入pGL3载体SV40启动子下游,构建了HCV特异性的反义RNA真核表达载体(pHCV-asR)。通过PCR扩增、酶切反应及序列分析进行了初步鉴定,并将其转染HepG2细胞,通过RTPCR方法检测其在细胞中的表达并将pHCV-asR转染转基因细胞模型HepG2.9706,评价其对HCV 5′NCR的抑制活性。结果表明,构建的反义RNA表达载体插入序列正确,并能在HepG2细胞中表达;pHCV-asR在HepG2.9706中对HCV 5′NCR调控荧光素酶基因表达具有特异性的剂量依赖性抑制活性,最高抑制率可达57%。     

T细胞记忆的理论研究

基于CD8⁺ T记忆细胞的线性和逆线性分化假说分别建立了数学模型,并研究了各种T细胞亚类的动力学.发现在优化剂量抗原入侵的条件下,两个模型均能产生记忆,并可较好地模拟实验结果.通过进一步模拟发现CD8⁺ T细胞记忆与抗原的存在紧密相关,再次证实了抗原在维持T细胞记忆中的作用.另外还讨论了记忆细胞寿命的问题.认为逆线性假说具有更强的反应性和记忆性.     

用差异显示反转录PCR银染技术研究植物基因表达的差异

通过调整差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等关键试剂的用量,优化了适用于银染检测的DDRT-PCR方法.PCR扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后,银染能检测到多而清晰的条带.泳道中的条带数最少为40个,最多达80个,平均为60个,条带大小分布在100～900 bp范围,灵敏度为5 pg/mm² .此方法操作简便快速,灵敏度高,重复性好.采用这个改良的方法,分析了拟南芥野生型和ast突变型基因表达的差异.从16 000个cDNA扩增产物条带中筛选出28个差异条带.二次PCR扩增后,进一步筛选出13个差异条带,其中7个是野生型特异表达的,6个是突变型特异表达的,为进一步认识ast突变表型的产生机制奠定了基础.     

Expansion of CD34~+ cells from human umbilical cord blood by FL and/or TPO gene transfected human marrow stromal cell lines

To elucidate the effect of gene transfected marrow stromal cell on expansion of human cord blood CD34+ cells, a culture system was established in which FL and TPO genes were transfected into human stromal cell line HFCL. To establish gene transfected stromal cells co-culture system, cord blood CD34+ cells were purified by using a magnetic beads sorting system. The number of all cells and the number of CD34+ cells and CFC (CFU-GM and BFU-E) were counted in different culture systems. The results showed that in all 8 culture systems, SCF+IL-3+HFT manifested the most potent combination, with the number of total nucleated cells increasing by (893.3±52.1)-fold, total progenitor cells (CFC) by (74.5±5.2)-fold and CD34+ cells by 15.7-fold. Maximal expansions of CFC and CD34+ cells were observed at the end of the second week of culture. Within 14 days of culture, (78.1±5.5)-fold and (57.0±19.7)-fold increases in CFU-GM and BFU-E were obtained. Moreover, generation of LTC-IC from amplified CD34+ cells within 2     

Strain persistence of invasive Candida albicans in chronic hyperplastic candidosis that underwent malignant change

Objectives: The aim of this study was to assess persistence and tissue invasion of Candida albicans strains isolated from a 65 year‐old patient with chronic hyperplastic candidosis (CHC), that subsequently developed into squamous cell carcinoma (SCC). Materials and Methods: C. albicans (n=7) were recovered from the oral cavity of the patient over seven years. Confirmation of CHC and SCC in this patient was achieved by histopathological examination of incisional biopsy tissue. DNA fingerprinting was performed on the seven isolates from the CHC patient together with a further eight isolates from patients with normal oral mucosa (n=2), chronic atrophic candidosis (n=1), SCC (n=1) and CHC (n=4). Genotyping involved the use of inter‐repeat PCR using the eukaryotic repeat primer 1251. Characterisation of the tissue invasive abilities of the isolates was achieved by infecting a commercially available reconstituted human oral epithelium (RHE; SkinEthic, Nice, France). After 24 h. C. albicans tissue invasion was assessed by histopathological examination. Results: DNA fingerprinting demonstrated strain persistence of C. albicans in the CHC patient over a seven year period despite provision of systemic antifungal therapy. The strain of C. albicans isolated from this patient was categorised as a high invader within the RHE compared to other isolates. Conclusions: Candidal strain persistence was evident in a patient with CHC over seven years. This persistence may be due to incomplete eradication from the oral cavity following antifungal therapy or subsequent recolonisation from other body sites or separate exogenous sources. The demonstration of enhanced in vitro tissue invasion by this particular strain may, in part, explain the progression to carcinoma.     

转SCaM—GFP融合基因烟草中钙调素分泌特性的研究

钙调素是一种重要的Ｃａ2 结合蛋白 ,在细胞内发挥着重要的生物学功能。一系列实验证实 ,钙调素也普遍存在于动植物细胞外[1- 3 ] ,并且具有重要的生物学功能[4 - 6] 。我们实验室的研究表明 :胞内外钙调素在Ｃａ2 依赖性以及在靶酶激活特性等方面基本相同 ,但在Ｃａ2 亲合力等方面存在差异[2 ,7] 。近年来 ,在植物细胞中发现存在多种钙调素亚型 ,特别是在大豆中对钙调素亚型研究得比较清楚[8] 。通过对大豆中钙调素亚型亚细胞定位的研究 ,一方面可以阐明钙调素是否具有向胞外主动分泌的特性 ,另一方面可以确定向细胞外分泌的钙调素是…     

英文贵州中寒武世凯里生物群中宏观藻类化石新材料(英文)

贵州省台江县中寒武世凯里生物群含有丰富的非钙质藻类和具有软躯体后生动物化石 ,它为布尔吉斯页岩型生物群在世界广泛分布提供了更有力的证据。在生物群的宏观藻类中描述了 5个属 5个种 ,包括 2个新属。它们是MarpoliaspissaWalcott、AcinocricusstichusConwayMorrisandRobison、UdotealgaerectaYang、EosargassumsawataYang和RhizophytonzhaoyuanlongiiYang ,并且将凯里生物群中的宏观藻类化石组合与加拿大布尔吉斯页岩生物群中的宏观藻类进行了对比 ,发现两个生物群不仅具有相似的动物化石组成 ,而且宏观藻类化石组成也很相似。     

转基因改良植物的营养价值

植物是人类所需大部分营养物质的主要来源,植物产品的营养品质直接影响着人类的健康。分子克隆和遗传转化技术的发展为改良植物的营养价值开辟了新途径。植物营养价值的转基因改良已在改进作物蛋白质含量及品质、淀粉和油脂成分及品质,提高抗氧化物水平（如类胡萝卜素、类黄酮等）,培育具有医疗效应的营养品质等方面取得了可喜的进展。迄今,已获得许多营养品质改良的转基因作物品系。这些转基因作物经过一系列的安全性及对人类营养有效性的验证后, 可直接食用,或应用于开发具有特殊营养品质和保健作用的“功能食品”。我们实验室开展了大豆油脂改良研究,构建了能特异抑制大豆FAD2-1基因表达的锌指转录因子,获得了油酸含量显著提高的转基因材料。初步结果表明锌指转录因子的分子设计是改良植物油脂代谢的一条可行途径,亦可用于调控植物其它内源靶基因的表达。     

小鼠39个微卫星的PCR条件及其运用

目的探索小鼠基因组39个微卫星的PCR条件,评价微卫星在小鼠遗传检测中的运用.方法采用梯度法探索39个微卫星的PCR条件;选择本中心不同来源及引种时间的C57BL/6、BALB/c、DBA/2J、CBA/N、FVB/NJ、ICR共6个品系(8个组)小鼠,每组采用10只个体的鼠尾,提取DNA并混合成DNA池,用39个微卫星扩增后电泳观察、比较种系纯度.结果小鼠微卫星的PCR条件差异较大,Mg2+浓度多数在1.5 mmol/L左右,退火温度多数在59℃左右.在6个品系小鼠的39个微卫星位点中,C57BL/6、BALB/c、DBA/2J都是纯合的; 其余品系有1～3个杂合位点. BALB/c在D5Mitl68、D8Mit320、D13Mit262三个位点,DBA/2J在D14Mit205位点与数据库记录有差异.结论本研究为小鼠39个微卫星提供了候选的PCR条件,并对6个品系小鼠的微卫星概貌及微卫星的运用价值进行了探讨.     

沙柳河青海湖裸鲤早期资源发生量及时空分布

为了掌握青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalksii)资源补充状况, 于2019年5月26日至9月2日逐日在青海湖第二大支流沙柳河开展了青海湖裸鲤早期资源丰度时空变化特征的调查研究, 共采集青海湖裸鲤鱼卵3386粒, 仔鱼4690尾。调查发现, 亲鱼自5月底开始洄游, 鱼卵6月初出现, 6月底至7月初达到高峰, 随后逐渐下降, 至8月中旬基本消失。仔鱼数量自7月初呈波动式上升, 8月达到高峰, 9月初逐渐消失。经估算, 沙柳河鱼卵径流量为25.58×106粒, 仔鱼径流量为62.00×106尾。鱼卵仔鱼空间分布为从河口往上丰度依次递减, 断面水平分布为右岸>左岸>中心。Kruskal-Wallis检验表明, 昼夜鱼卵丰度存在显著差异(P<0.05); 昼夜仔鱼丰度存在极显著性差异(P<0.01), 鱼卵仔鱼漂流高峰期均集中在夜间。鱼卵丰度与流速呈显著正相关(P<0.05), 仔鱼丰度与流速呈极显著正相关(P<0.01), 与径流量日上涨率呈极显著正相关(P<0.01)。研究报道了沙柳河青海湖裸鲤早期资源现状, 填补了该水域青海湖裸鲤早期资源研究的空缺, 为青海湖裸鲤上溯亲本资源量和入湖幼鱼资源量估算提供了数据支撑, 可为青海湖裸鲤资源管理与保护提供科学依据。