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A whole-genome RNAi Screen for C. elegans miRNA pathway genes 总被引:1,自引:0,他引:1
BACKGROUND: miRNAs are an abundant class of small, endogenous regulatory RNAs. Although it is now appreciated that miRNAs are involved in a broad range of biological processes, relatively little is known about the actual mechanism by which miRNAs downregulate target gene expression. An exploration of which protein cofactors are necessary for a miRNA to downregulate a target gene should reveal more fully the molecular mechanisms by which miRNAs are processed, trafficked, and regulate their target genes. RESULTS: A weak allele of the C. elegans miRNA gene let-7 was used as a sensitized genetic background for a whole-genome RNAi screen to detect miRNA pathway genes, and 213 candidate miRNA pathway genes were identified. About 2/3 of the 61 candidates with the strongest phenotype were validated through genetic tests examining the dependence of the let-7 phenotype on target genes known to function in the let-7 pathway. Biochemical tests for let-7 miRNA production place the function of nearly all of these new miRNA pathway genes downstream of let-7 expression and processing. By monitoring the downregulation of the protein product of the lin-14 mRNA, which is the target of the lin-4 miRNA, we have identified 19 general miRNA pathway genes. CONCLUSIONS: The 213 candidate miRNA pathway genes identified could act at steps that produce and traffic miRNAs or in downstream steps that detect miRNA::mRNA duplexes to regulate mRNA translation. The 19 validated general miRNA pathway genes are good candidates for genes that may define protein cofactors for sorting or targeting miRNA::mRNA duplexes, or for recognizing the miRNA base-paired to the target mRNA to downregulate translation. 相似文献
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蔡承魁贠喆张涛姜扩高杰裘秀春马保安 《现代生物医学进展》2011,11(8):1417-1419
目的:探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法:将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a+miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物(hsa-miR-15a mimics)上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果:通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高(P<0.05);实验组的细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05)。结论:上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。 相似文献
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胡萝卜雄性不育材料,在胡萝卜育种中具有重要作用。本研究描述了一种从武汉市洪山区野生胡萝卜材料中获得的野生瓣化型胡萝卜雄性不育材料(‘武野-不育’,简称‘Wuye-BY’)的特征。该野生瓣化型雄性不育胡萝卜特征在于:无明显膨大的肉质根,嫩茎、叶片及其叶柄深绿色,几乎无毛,无花瓣和花药。花萼数量8~10个,花丝数量为0~2个,染色体数目为2n=18。双悬果顶端及其花丝顶端具有大量的蜜液,能接受栽培胡萝卜花粉。杂交F1的根大小、根重,胡萝卜素、总糖和维生素C含量,具有明显优势。 相似文献
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目的:探讨CysC、mALB和尿BGM联合检测在2型糖尿病早期肾损中的临床价值。方法:选取2010年11月至2013年6月我院内分泌科收治的130名2型糠尿病患者,根据空腹血糖值的不同程度将其分为A、B两组,A组72例,B组58例,另选取同期在我院体检的年龄、性别等资料与之匹配的64名健康者设为C组。分别对其CysC、mALB和尿BGM进行测定,并进行对比分析。结果:通过分析可知,A组和B组的Cys C分别为(3.29±1.09)mg/L、(2.86±1.05)mg/L,相对于C组的(0.87±0.99)mg/L,均明显升高,但A组升高更加明显;A组、B组、C组的mALB分别为(37.36±4.82)mg/L、(36.55±4.31)mg/L、(6.61±3.84)mg/L,B组高于A组,C组高于A组和B组;三组的BGM中,以A组最高,为(634.15±55.24)μg/L,B组其次,为(626.92±48.18)μg/L,均高于C组的(57.12±11.75)μg/L;Cys C、mALB、BGM等阳性指标的检出率分别为76.15%、77.69%、72.31%,而Cys C、mALB、BGM联合检测的检出率为93.85%,明显高于其他单指标检测。且P0.05,差异具有统计学意义。结论:对CysC、mALB和尿BGM进行联合检测对2型糖尿病早期肾损患者具有较高的检出率,相对于单指标检测,敏感性更高。 相似文献
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本文在大肠杆菌中表达了与GST融合无跨膜区的丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)E1蛋白,并通过免疫兔制备了兔抗E1的抗血清。然后利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了含有HCV结构蛋白E1基因的重组杆状病毒vAcHCVE1。通过Western blot分析,E1蛋白在Sf9细胞中表达分子量大小为30kDa大于预测的20kDa,表明存在翻译后修饰如糖基化等。通过Confocal显微镜观察当感染48h后E1蛋白定位在细胞质和细胞膜上。 相似文献