冻融后小鼠休眠胚胎超微结构的变化

目的从亚细胞超微结构的角度揭示其抗冻能力优于正常孵化胚胎的原因。方法利用透射电子显微镜观察小鼠休眠胚胎与正常孵化期胚胎在细胞连接和各细胞器形态与分布上的差异,以及冻融培养后的变化,并进行相关比较分析。结果通过亚细胞结构对比分析发现:冷冻前小鼠休眠胚胎为紧缩状,处于能量代谢较低的"基态",通过冻融后培养,细胞器结构恢复与正常孵化胚胎冷冻前相似;而正常孵化胚胎经过冻融后,线粒体数量减少,细胞核松散,异染色质增多。结论小鼠休眠胚胎与正常孵化胚胎冻融后相比,其细胞状态更有利于物质储存及能量代谢,表明小鼠休眠胚胎从亚细胞超微结构的角度比其正常孵化胚胎更具抗冻性。     

National Surveillance on Vancomycin-Resistant Enterococcus faecium in Taiwan: Emergence and Widespread of ST414 and a Tn1546-Like Element with Simultaneous Insertion of IS1251-like and IS1678

Cases of bacteremia caused by vancomycin-resistant E. faecium (VRE-fm) increased significantly in Taiwan. The present multicenter surveillance study was performed to reveal the associated epidemiological characteristics. In 2012, 134 non-repetitive VRE-fm isolates were prospectively collected from 12 hospitals in Taiwan. Antimicrobial susceptibility, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), multilocus sequence typing (MLST), and analysis of van genes and Tn1546 structures were investigated. Two isolates carried vanB genes, while all the remaining isolates carried vanA genes. Three isolates demonstrated a specific vanA genotype - vanB phenotype. Nine (6.7%) isolates demonstrated tigecycline resistance, and all were susceptible to daptomycin and linezolid. Molecular typing revealed 58 pulsotypes and 13 sequence types (STs), all belonged to three major lineages 17, 18, and 78. The most frequent STs were ST17 (n = 48, 35.8%), ST414 (n = 22, 16.4%), and ST78 (n = 16, 11.9%). Among the vanA harboring isolates, eight structure types of the Tn1546-like element were demonstrated. Type I (a partial deletion in the orf1 and insertion of IS1251-like between the vanS - vanH genes) and Type II (Type I with an additional insertion of IS1678 between orf2 - vanS genes) were the most predominant, consisted of 60 (45.5%) and 62 (47.0%) isolates, respectively. The increase of VRE-fm bacteremia in Taiwan may be associated with the inter- and intra-hospital spread of some major STs and horizontal transfer of vanA genes mostly carried on two efficient Tn1546-like elements. The prevailing ST414 and widespread of the Type II Tn1546-like elements are an emerging problem that requires continuous monitoring.     

云南不同产地臭灵丹精油化学成分及抗菌活性

采用水蒸气蒸馏的方法,对采自云南4个不同地区（昆明,丽江,普洱,新平）的臭灵丹叶子进行挥发油提取,并利用GC MS和GC FID气相色谱联用技术分析其化学组成,分别从中鉴定出39、37、33、44个化合物。鉴定的化合物各占挥发油总量的9332% (昆明)、8057% (丽江)、9224% (普洱)和9385% (新平)。研究结果表明,采自这四个地区植物样品提取所得挥发油化学组成不尽相同：昆明产臭灵丹挥发油富含芳香族化合物(3806%);而从丽江和普洱样品中获得的挥发油化学成分以倍半萜（分别为1989%和4465%）和氧化倍半萜（分别为4085%和3511%）为主;非氧化单萜和非氧化倍半萜化合物（分别为4223%和3325%）则是新平产臭灵丹挥发油的主要化合物类型。同时,对这些不同产地的臭灵丹挥发油也进行了抗菌活性测试。从以上实验研究结果推测环境差异是影响臭灵丹挥发油化学组成差异的重要因素,而不同的化学组成可能是导致4种样品抗菌敏感程度不同的原因。     

志贺毒素及其预防治疗剂的研究进展

志贺毒素(Shigatoxin,Stx)主要由肠出血性大肠杆菌(EHEC)产生,是其主要的致病毒力因子,可通过引起急性肾衰竭导致死亡。迄今为止尚没有可推荐的治疗方案能够有效地预防或治疗Stx引起的疾病。目前,对于Stx的研究热点主要包括:Stx尚未清楚的致病机理研究,Stx与HUS的相关性研究,以及预防、治疗由Stx引起的疾病的研究。本文就以上几方面对国内外的相关研究进行总结及讨论。     

广东省福寿螺形态性状变异及其与体质量的关系

【背景】福寿螺是危害极其严重的入侵我国的水生生物,目前利用相关分析、通径分析对福寿螺形态性状变异的研究较少。【方法】随机采集7个地区的福寿螺(雌雄比例差别很大),测量其壳高、壳宽、口宽、层高4个形态性状和体质量,采用相关分析、通径分析方法计算福寿螺的各形态指标变异系数、相关系数和通径系数,剔除对体质量影响不显著的指标,确定每个地区与体质量最相关的指标。【结果】除惠州之外,其余地区福寿螺的壳高和壳宽与体质量的相关性较高,且口宽与壳高共同作用对体质量的直接影响很大。【结论与意义】此结果为研究不同生境、不同温度下福寿螺的形态性状变异程度奠定了基础,同时为福寿螺形态鉴定、分类及其灾害预测预报提供了基础数据。     

常用萃取剂提取福寿螺卵中类胡萝卜素的初步研究

【背景】福寿螺为世界性恶性入侵水生动物,也是我国公布的第一批外来人侵物种之一。福寿螺大量啃食为害水稻、茭白、白莲等重要农作物,对我国南方各省农业生产造成了巨大威胁,因此,预防和控制福寿螺灾害显得尤为重要。合理利用福寿螺能有效控制福寿螺的数量和危害,是生物防治的一个重要部分。福寿螺卵中含丰富的类胡萝卜素,充分利用螺卵中的类胡萝卜素能拓展福寿螺的利用途径和方法。【方法】为探寻福寿螺卵中类胡萝卜素的提取方法,本研究采用甲醇、无水乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚等6种常用萃取剂提取福寿螺卵中类胡萝卜素,用紫外可见光分光光度计测定其含量。【结果】结果显示,不同萃取剂中类胡萝卜素的提取量不同,醇类为较适合的提取液（甲醇〉无水乙醇〉丙酮）。【结论与意义】本研究对福寿螺卵中类胡萝卜素的提取方法进行了探索和研究,找出了合适的提取液,为拓展福寿螺的利用途径,以及福寿螺的综合防治提供了参考。     

红冬孢酵母苯丙氨酸解氨酶基因pal在大肠杆菌中的克隆与表达

以红冬孢酵母总RNA为模板反转录获得其苯丙氨酸解氨酶基因pal,测序与已公布蛋白序列进行比对,相似度为99％.并以含有T7强启动子的pET - 28a(+)为载体构建重组质粒pET - 28a(+)- pal,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导实现苯丙氨酸解氨酶(PAL)在大肠杆菌中的表达.对诱导条件进行初步优化后,重组茵PAL比酶活可达到42.99 U/g.转化实验中肉桂酸的转化率为48.52％,L-苯丙氨酸生成量为1.73 g/L.结果表明,红冬孢酵母pal基因通过表达载体pET - 28a(+)在E.coli中获得了高效表达.     

小麦TILLING分析中CELⅠ酶切及PCR反应体系的优化

在小麦中建立稳定的基于CELⅠ酶切的目的基因突变位点检测技术,有助于高通量鉴定目的基因片段的点突变及提高突变检测效率。本研究以冬小麦品种新麦18空间诱变SP2群体为材料,以小麦糯质基因Waxy为目标片段,通过优化基因组DNA提取方法、调整PCR反应体系中dNTP、Mg2+及引物浓度、改变目标片段CELⅠ酶切缓冲液成分,以及调整纯化过程中的空气相对湿度等方式,优化了小麦TILLING技术体系。在利用PVP-40法提取DNA过程中,研磨器振动频率提高到30/s,KAc溶液的反应时间延伸为20min时,基因组DNA质量和纯度最佳;在设定的浓度范围内dNTP和Mg2+浓度对产物影响差异不明显,均能高效扩增出目的条带。引物浓度对产物影响差异显著,最佳引物浓度为0.4μmol/L。20μl酶切体系中,最佳CEL I酶浓度为0.1U且利用超纯水代替CELⅠ缓冲液。最终在小麦中建立起了基于CELⅠ酶切的高通量TILLING筛选技术体系。     

秦岭秀雅杜鹃7个野生群体形态性状的变异分析

对秦岭山区的7个秀雅杜鹃野生群体的表型变异情况进行分析。结果表明:秀雅杜鹃表型性状在种群间和种群内都存在一定程度的变异,但变异不大。各性状总的平均变异系数在0(雄蕊数目)~0.28(花梗长)之间,种群间总的平均变异系数在0.08(周至)~0.14(南郑),花色性状种群间变异大,种群内变异较小。秀雅杜鹃表型性状与地理生态因子的相关分析表明,各个性状的变异和地理生态因子并无显著的相关性,说明表型受环境影响的程度相对较小。利用群体间欧氏距离进行的UPGMA聚类分析结果表明,秀雅杜鹃野生群体可以划分为3类。     

分枝PEI 修饰的PLGA 纳米粒转染DNA 的研究*

目的:建立基于聚(乳酸-羟基乙酸)纳米粒(PLGA)载DNA的基因转染体系,比较用空白聚(乳酸-羟基乙酸)纳米粒(PLG-A-E)吸附质粒DNA和用分枝PEI修饰后的PLGA纳米粒(PLGA-BPEI)吸附质粒DNA优缺点。方法:用乳化蒸发法制备纳米粒,对纳米粒进行表征研究,包括包封率、Zeta电位、粒径大小、稳定性,用荧光显微镜观察它们对NIH3T3和HEK293细胞的转染效率,用MTT检测对它们细胞的毒性。结果:制备了两种基于PLGA的纳米粒,PLGA-E和PLGA-BPEI粒径大小为200-270nm,zeta电位为0-30mV,在血清和不同的pH值时两者均较稳定,转染效率PLGA-BPEI较PLGA-E高,且释放时间早,但前者较后者对细胞毒性大。结论:这两种基于PLGA纳米粒均能有效转染质粒DNA,它们存在不同的优缺点,应根据不同需要进行选择。