电脉冲穿孔法将苏云金杆菌δ-内毒素基因导入野生型芽孢杆菌

利用电脉冲穿孔法将带有苏云金杆菌毒蛋白基因的穿梭质粒导入几株野生型芽孢杆菌中。它们是野生型的蜡状芽孢杆菌、短芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。通过观察在新霉素和氨苄青霉素平板上长出的抗性菌落数,计算出转化效率为10~1—10~4转化子/μgDNA。从转化子中分离到的质粒DNA大小及其用HindⅢ酶切的片段与原始质粒DNA相同,毒性测试表明重组转化子对烟青虫六天的致死率达90—100％。     

基因工程链激酶(r—SK)纯化及其单克隆抗体制备和鉴定

采用Rotofor等电聚焦和分子筛技术纯化大肠杆菌表达的重组链激酶(r—SK),其纯度为97%。比活性1×10⁶IU／mg,回收率41％。分析所纯化的r—SK　N端氨基酸顺序证实其1—15个氨基酸顺序与SK基因的核苷酸顺序所示3联密码子一致。以纯化r—SK为抗原,通过杂交瘤技术构建了分泌抗r—SK单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞(4D11),该McAb属IgG1亚型．特异地作用于r-SK和C组口溶血性链球菌分泌的SK。用底物显色法测定该McAb可抑制SK对纤溶酶原的激活。Western blot法证实该McAb能识别分子量为16 250Da的r—SK的CNBr裂解片段。推测SK蛋白中第71残基至第237残基间的氨基酸顺序参与SK与纤溶酶原的结合。     

抗人PAI—1单克隆抗体制备,鉴定和应用

以重组PAI-(rPAI-1)为抗原,通过杂交瘤技术获得6株阳性杂交瘤细胞(AP1、AP2、AP3、AP4、AP5和AP6),并用SPA亲和层析纯化了抗PAI-1单克隆抗体(McAb)。所有McAb均能识别rPAI和天然PAI-1,腹水滴度均为10~6以上。6种McAb对PAI-1亲和常数在3.45×10~7—1.05×10~9mol/L之间。AP2、AP3 McAb能完全抑制PAI-1活性,AP4、AP和AP6只能部分抑制PAI-1活性,AP1则不抑制PAI-1活性。6种McAb中只有AP1、AP4和AP5能识别PAI-1/t-PA复合物。利用AP1、AP3、和AP4 McAb制备免疫亲和柱一步纯化HepG_2细胞分泌的PAI-1,纯度大于98％,回收率92％,纯化倍数51倍。利用抗PAI-1 McAb建立了夹心法ELISA,测定了人血浆PAI-1水平,正常人血浆PAI-1平均含量(±D)为24.7±7.75ng/ml。     

云贵鹅耳枥群落乔木种群生态位初探

木文应用Ｌｅｖｉｎ公式和王刚改进公式分别计测了贵阳喀斯特山地云贵鹅耳枥群落中乔木种群的生态位宽度和生态位重叠,并对这些种群的生态位关系及其对群落结构和动态的影响进行了分析。     

云南阿昌族的红细胞血型分布

调查了１０２名云南阿昌族的ＡＢＯ,ＮＮＳｓ,Ｒｈ和Ｐ系统的红细胞血型,结果表明,阿昌族的基因频率ｐ（０．３８７４）是迄今国内调查过人群中的最高值,Ｅ（０．２４５９）和ＣＤｅ（０．６９３６）基因或染色体频率较高,而Ｓ（０．０６８６）和Ｐ１（０．１０８９）频率较低;Ｍｓ（０．５９５０）连锁率高于Ｎｓ（０．３３５３）;未发现ＳＳ和Ｒｈ（－Ｄ）阴性表现型。     

Specificity and function of monoclonal antibodies directed against Ewing sarcoma cells

A selection of 16 monoclonal antibodies has been produced against a fresh Ewing's sarcoma (ES) tumor mixed with a permanent ES cell line. The majority of antibodies identify an 80-kDa molecule, which is not detected on healthy tissues except on certain cultured monocytes. One antibody recognize the CD2 ligand MIC2 and 2 antibodies (numbers 13 and 16) define a higher-molecular-mass antigen. Antibody 16 is also expressed on mesenchymal fibroblasts of bone marrow or fetal origin. Tumorspecific antigen expression is potentially linked to the chromosome 22 abnormality decribed in Ewing's sarcoma.     

Distribution of zinc metallothionein I mRNA in rat brain using in situ hybridization

Metallothionein (MT) isoforms I and II were first identified and characterized in our laboratories in several regions of brain, in hippocampal neurons in primary culture, and in retinoblastoma and neuroblastoma cell lines. In this study, by having employed the MT-I cDNA as a probe, we sought to gain additional insight about the function of MT by discerning the regional distribution of its mRNA. Northern blot analyses of brain mRNA revealed that the administration of zinc enhanced dramatically MT-I mRNA (570 bp). The in situ hybridization study revealed that MT-I mRNA was located in several areas of brain, with the highest concentrations found in the cerebellum, hippocampus, and ventricles. The results of these studies are interpreted to suggest that zinc enhances the synthesis of MT mRNA and MT in turn may participate in zinc associated functions in neurons.Abbreviations MT-I Metallothionein I isoform - mRNA Messenger ribonucleic acid - ³⁵S dCTP ³⁵S Deoxycytidine triphosphate - ³²P dCTP ³²P Deoxycytidine triphosphate - icv Intracerebroventricularly - IP Intraperitoneally - PBS Paraformaldehyde phosphate buffered saline solution - Tris 2 amino-2-hydroxymethylpropane-1,3 diol - EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid - cDNA Complimentary deoxyribonucleic acid - bp Base pair     

一种能表现水稻基因组DNA分化特征的重复DNA顺序

用ＤＮＡ 复性动力学方法克隆到一个水稻中度重复顺序。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交、限制性内切酶分析及序列分析资料表明,该重复顺序在水稻基因组中具有串联重复和散布状态两种存在方式。以该ＤＮＡ 片段作探针,用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交方法分析了多种野生稻种和栽培稻品种的基因组分化特征。某些限制性内切酶消化过的水稻ＤＮＡ,其图谱呈现出多达４０ 条以上的杂交带,包括强杂交带和弱杂交带两种类型。重复实验结果证明,强杂交带表现为ＢＢＣＣ染色体组型特异而弱带则在栽培稻各品种间显示出丰富的多态性,表明该重复顺序片段在水稻理论研究和育种实践中可能具有重要意义     

离体条件下诱导番茄果实状结构的再生

以番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｉｌｌ．）雌蕊和幼果的组织作外植体可以诱导果实状结构的再生。这种果实状结构在离体条件下能培养成熟,成熟时具红色。解剖观察表明：果实状结构由果肉和包围在外面的果皮组成,无种子和胎座。外源激素和外植体年龄的试验揭示：１．以雌蕊组织作外植体时,仅附加外源细胞分裂素就可以诱导果实状结构的再生,外源生长素似乎不是必需的,最高的诱导频率（５０．０％ ）出现在仅附加玉米素０．５ ｍ ｇ／Ｌ的组合。２．从直径４—１２ ｍ ｍ 的幼果上分离的外植体在附加外源激素的培养基上均可诱导果实状结构的再生,但只有从直径８ ｍ ｍ 的果实分离的组织块作外植体并将它们培养在６－ＢＡＰ ２ ｍ ｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．１ ｍ ｇ／Ｌ的培养基上时,果实状结构的诱导频率最高（６２．５％ ）。为了探讨在果实状结构再生中表现出来的细胞全能性的表达,提出了植物细胞全能性的部分表达（Ｐａｒｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆｐｌａｎｔ ｃｅｌｌｔｏｔｉｐｏｔｅｎｃｙ）的概念并进行了讨论。     

细叶黄芪叶肉原生质体发育早期细胞壁再生的研究

采用透射电镜术、电镜多糖细胞化学染色、细胞壁荧光染色以及香豆素抑制细胞壁再生等方法,对细叶黄芪（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓｍ ｅｌｉｌｏｔｏｉｄｅｓ ｖａｒ．ｔｅｎｕｉｓ）叶肉原生质体细胞壁的再生及其化学特点进行了研究。结果表明,离体培养２４ 小时的原生质体表面产生一些突起小泡,有时可见少量纤维组分的形成。培养３ 天时这种纤维组分明显增多。至５ 天时可清楚看到再生壁是由纤维和颗粒构成。六亚甲四胺银染色证明它们都是由多糖组分组成的。另外,培养３６ 小时的原生质体有相互粘连的现象。电镜观察、荧光染色及香豆素处理的研究表明粘连与再生壁的形成有关。根据上述观察结果,对原生质体再生壁的结构及其化学性质等问题进行了讨论