sFGFR1Ⅲc的原核表达及其抑制NIH3T3增殖的作用

目的:克隆sFGFR1Ⅲc胞外段进行原核表达和纯化。方法:将sFGFR1Ⅲc胞外段基因转入pET3c载体后转化BL21工程菌,以包涵体形式表达胞外段。经凝胶层析法复性(复性率为20%)和肝素亲和层析纯化后得到纯度95%以上的目的蛋白。通过电泳鉴定其纯度以及MTT法检测其生物学活性。结果:成功获得大小为660bp的人sFGFR1Ⅲc基因片段,转化菌诱导表达了24kDa的sFGFR1Ⅲc胞外段并通过MTT证实它对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)的增殖具有明显的抑制作用,其抑制FGF2引起的细胞增殖呈剂量依赖性,其中作用最为明显的是80ng/ml。结论:成功获得了高纯度的sFGFR1Ⅲc胞外段,该胞外段具备较好的生物学活性,为下一步的研究工作奠定了良好的物质基础。     

大蒜素对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响及结构定量化分析

目的利用激光共聚焦显微镜（Confocal Laser Scanning Microscopy, CLSM）观察大蒜素对铜绿假单胞菌PA01菌株生物膜（biofilms,BF）形成过程的影响,并用ISA（Image Structure Analyzer）软件对BF结构进行定量化分析。方法体外建立1d．3d和7d组PA01菌株BF模型,每组分3小组,分别用生理盐水、大蒜素128μg／mL、大蒜素10μg／mL作用6h。通过荧光探针SYT09／PI标记,利用CLSM进行动态观察,并用ISA软件对其BF结构进行定量分析。结果（1）生理盐水对照组铜绿假单胞菌生物膜厚度随时间的增加而增加,但在后3d增加的速度减慢;同时区域孔率（Areal Porosity,AP）呈下降趋势,平均扩散距离（Average Diffusion Distance,ADD）有逐渐增加趋势,结构熵（Textural Entropy,TE）有增加的趋势。（2）7d组模型中,大蒜素128μg／mL作用后,BF厚度由（28．83±0．67）μm减低到（16．50±0．69）μm;AP由0．76±0．10增加到0．92±0．02;TE由6．78±0．93减低到5．61±0．55。10μg／mL大蒜素干预后,有同样趋势,但效应不如高浓度明显。（3）1d、3d模型组,大蒜素作用后同对照组相比,厚度、AP、TE的差异均有统计学意义,趋势同7d组。结论通过ISA软件对干预前后的BF进行结构定量分析,大蒜素对各个时间段BF的形成均有影响,高浓度效果更显著。     

微生态制剂防治婴幼儿肺炎继发腹泻的卫生经济学评价

目的 评价预防性应用微生态制剂(培菲康)防治婴幼儿肺炎继发腹泻的疗效及成本效益.方法 2008年1月到2010年9月住院治疗的婴幼儿肺炎966例为研究对象,对患儿的临床特征、微生态制剂(培菲康)预防性应用情况、是否出现继发腹泻及住院治疗费用的关系进行分析.结果 干预组594例,对照组372例,两组住院治疗期间继发腹泻的发病率分别为18.69％、39.78％,两组比较,x2 =51.889,P ＜0.01,RR=0.470;干预组99例发生继发腹泻后继续原有微生态制剂治疗,对照组134例因继发腹泻才开始应用同类微生态制剂治疗,两组腹泻治疗总有效率分别86.87％、74.63％,差异无统计学意义(x2=5.299,P=O.021).干预组、对照组每例(次)患儿住院总费用分别为(2775.0±1724.2)元和(3130.7±1899.8)元,预防性应用微生态制剂(培菲康)次均节省直接医疗费用支出355.6元,差异有统计学意义(t =2.998,P=0.003);预防性应用微生态制剂(培菲康)的效益成本比为13.02.结论 预防性应用微生态制剂(培菲康)不仅能降低肺炎继发腹泻的发病率,缩短住院病程,提高腹泻治疗总有效率,同时,明显降低患儿的次均医疗费用,效益成本比高.     

黑曲霉外源表达系统对Dactylellina cionopaga基因PrD Ⅰ的表达

目的:Dactylellina cionopaga是产生黏性分枝的捕食线虫真菌,进行其基因外源表达是鉴定该菌侵染相关因子的途径之一。方法:该文构建了含有组氨酸标签的黑曲霉表达载体pGT21M-HIS,对D.cionopaga中与侵染机制相关的丝氨酸蛋白酶基因PrD Ⅰ进行了外源表达。结果:RT-PCR鉴定结果显示,PrDⅠ在黑曲霉201中获得了转录。SDS-PAGE和酶活分析结果表明,经亲和层析纯化的重组蛋白分子量约为45kDa,在pH 5.0的条件下具有蛋白水解活性。纯酶液的蛋白浓度为30μg/ml。结论:构建的带有组氨酸标签的表达载体pGT21M-HIS能够用于基因在黑曲霉表达系统中的外源表达,并为目的蛋白的纯化和鉴定提供了极大便利。黑曲霉外源表达系统在表达丝状真菌基因方面相对其他表达系统具有优势。     

双向电泳-质谱技术寻找维吾尔族高尿酸血症差异蛋白

目的:寻找维吾尔族高尿酸血症血清差异蛋白,从而为进一步探索其发病机制奠定基础.方法:运用双向凝胶电泳(2-dimentional gel electrophoresis,2-DE)和基质辅助激光解吸飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spetrometry,MALDI-TOF-MS)对维吾尔族高尿酸血症人群和对照组人群血清进行差异蛋白质研究.结果:差异表达蛋白质点数为11个,质谱成功鉴定出4个差异蛋白质,分别是补体C3、触珠蛋白、补体C4和载脂蛋白A1,均呈上调表达.结论:初步发现补体C3、触珠蛋白、补体C4、载脂蛋白L1在维吾尔族高尿酸血症组明显高于正常对照组人群(P＜0.05),但结果有待运用其他生物学的方法进行验证并探索其机制.     

山西省晋中市及周边地区螨虫分布状况和优势螨种的研究

目的 研究山西省晋中市及周边地区的尘螨种类和优势螨种.方法 以就诊于晋中市第一人民医院耳鼻喉科门诊的尘螨过敏患者为研究对象,从2009年12月至2011年10月对居住在晋中市及周边地区的30户家庭进行入户采集调查.采集尘样后经过分离,制片,最后进行鉴定.结果 共采集尘样196份,户尘螨占成螨总数的60.1％,粉尘螨占39.8％.通过对不同采集地点的调查结果显示,楼房的样本阳性率为35.8％,平房的样本阳性率为21.8％.通过对不同环境样本中螨密度的统计,枕头的螨密度最高,为166.7头/g.平均螨密度在全年有2个高峰期,分别是7-8月份和12～2月.结论 晋中市及周边地区的主要螨种为麦食螨科的户尘螨和粉尘螨,户尘螨为优势螨种.     

内耳形态学和生理指标对缺铁性肾虚耳聋大鼠模型的评价作用

目的探讨耳蜗显微结构和生理指标对缺铁性肾虚耳聋大鼠模型的评价作用。方法选用体重30～32 g、无耳疾、听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)阈值正常的1～2周龄SPF级SD大鼠120只,雌雄分养,分为缺铁组80只、正常对照组40只,饲养时间12周;以出现肾虚证和至少一耳ABR阈值≥15 dB,作为判断肾虚耳聋的标准,获得缺铁性肾虚耳聋大鼠22只,从中选取肾虚耳聋大鼠20只,同时以20只正常大鼠作对照。观察耳蜗血管纹、螺旋器等耳蜗显微结构变化,检测ABR阈值以及血红蛋白和血清铁等指标的变化。结果实验组和正常对照大鼠的血红蛋白和血清铁分别为11.80 g/L,4.5μmol/L和45.9 g/L,22.23μmol/L,ABR阈值分别为(30±5)dB和(10±5)dB;实验组血管纹血管明显减少;螺旋器毛细胞听毛有缺失、倒伏现象。结论缺铁性肾虚耳聋大鼠血红蛋白、血清铁和ABR阈值,以及耳蜗血管纹、螺旋器等耳蜗显微结构变化等指标,均较为稳定,是较好的评价指标。     

中国地鼠线粒体基因组的序列分析与分子进化

目的 获得中国地鼠线粒体基因组序列,为线粒体疾病模型提供分子数据.方法 参照近缘物种的线粒体基因组序列,设计27对特异引物,采用TD-PCR及测序技术获得了中国地鼠的线粒体全基因组序列,分析了其基因组特点和各基因的定位.还结合GenBank中已发表的其他5种啮齿类动物的线粒体基因组序列,探讨啮齿类动物不同科间的系统进化关系.结果 中国地鼠线粒体基因组全长为16 283 bp,碱基组成为33.53％A、30.50％T、12.98％G、22.80％C,包括13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和1个非编码基因控制区.中国地鼠和金黄地鼠亲缘关系最近.结论 中国地鼠线粒体基因组各基因长度、位置与典型的啮齿类动物相似,其编码蛋白质区域和rRNA基因与其他啮齿类动物具有很高的同源性,显示线粒体基因组在进化上十分保守.5种动物的分子系统进化树与传统分类地位一致.     

兔附件扭转模型的建立及其意义探讨

目的 建立一种操作简单、病变典型、稳定性好的兔在体附件扭转模型并探讨保留卵巢术后卵巢的病理变化和iNOS的改变.方法 40只日本大耳白兔采用随机数字法分为附件扭转(adnexal torsion,AT)模型组(n=32)和对照组(n=8).模型组兔将左侧附件按顺时针方向扭转3周,避开血管,以4/0丝线横穿扭转形成的3个螺旋圈后固定于左侧腹壁,然后再将之分成4组,每组8只,分别于扭转24、48、72、96h后解除扭转后取双侧卵巢;对照组假手术后96h后取双侧卵巢.所有切除之右侧卵巢组织行病理学研究的内对照,左侧卵巢取1/2行病理检测,另1/2行iNOS生化水平检测.结果 左侧附件扭转3周固定左侧腹壁24 h后可见卵巢充血、炎细胞浸润、细胞水肿;48h见较多的炎细胞浸润,细胞结构紊乱;72 h见大量炎细胞浸润,结构损坏和局灶性坏死;96 h见弥漫性细胞坏死;卵巢组织病理评分呈现相同的时相性变化.各组iNOS生化检测水平(左侧vs.右侧),AT组[24 h(3.542±0.987) vs.(1.521±0.214) U/mgprot,P＜0.01;48 h(4.986±1.321) vs.(1.832±0.321) U/mgprot,P＜0.01;72 h(7.991±1.832) vs.(1.124±0.357)U/mgprot,P＜0.01;96 h(6.991±1.227) vs.(1.732±0.572)U/mgprot,P＜0.01].且AT组卵巢均有iNOS不同程度表达,72 h组表达达高峰,96 h下降.结论 成功地制备兔附件扭转模型,方法简单、病变典型、重复性好,可模拟女性附件扭转的病理生理过程,对进一步研究附件扭转具有重要意义.初步认为附件扭转72h后卵巢发生不可逆改变,是临床处理附件扭转并保留卵巢的时间临界点.     

汉坦病毒糖蛋白的结构及功能研究进展

汉坦病毒感染人类可导致肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征,其包膜糖蛋白(GP)是重要的结构蛋白,本文就汉坦病毒糖蛋白的结构和功能的研究进展作一综述。