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51.
人TRAIL基因cDNA的克隆及其在COS—7细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
TRAIL(TNFrelatedapoptosisinducingligand)是最近克隆的肿瘤坏死因子(TNF)家族的新成员,由于它的蛋白质结构和生物学效应类似于FAS/APO1L,因此,也被称为APO2L。在低浓度下,TRAIL能迅速地诱导多种肿瘤细胞系的?.. 相似文献
52.
53.
旨在利用CRISPR/Cas9技术构建敲除花生四烯5-脂氧合酶基因(Arachidonate 5-lipoxygenase gene,ALOX5)的重组质粒。设计合成3对靶向敲除ALOX5第六外显子的sgRNA,将其分别插入到CRISPR/Cas9质粒骨架pX458载体中,转化感受态大肠杆菌DH5α后挑取克隆,通过测序评估重组质粒是否构建成功。将构建好的重组质粒转染293T细胞,在荧光显微镜下观察转染效果,挑取转染成功的细胞,用试剂盒提取转染细胞基因组DNA,PCR扩增含敲除位点的DNA片段,用测序技术获得核苷酸序列,用DNAStar软件分析转染细胞中ALOX5基因敲除情况。测序结果表明2对双链sgRNA寡核苷酸已插入质粒,且序列正确,靶向ALOX5基因的重组质粒pX458-sgRNAs-ALOX5构建成功。其在293T细胞中的转染效率约为50%,用一代测序法未检测到sgRNAs的切割效果。初步表明利用CRISPR/Cas9技术成功构建靶向ALOX5基因的重组质粒pX458-sgRNAs-ALOX5。 相似文献
54.
【背景】杨树溃疡病是一种主要由葡萄座腔菌引起的杨树枝干病害,危害严重。前期从杨树中分离到一株内生拮抗细菌N6-34,研究表明该菌株拮抗效果好,对多种植物病原菌均有较强的拮抗作用。【目的】对拮抗细菌N6-34产生的抗菌活性物质进行分离纯化,并鉴定了活性物质组分的结构。【方法】通过硫酸铵盐析、甲醇抽提、分子筛、高效液相色谱等方法分离纯化N6-34菌株的抗菌活性物质,并对其进行结构鉴定。【结果】N6-34菌株发酵液经多步分离纯化,共获得14个组分,其中有13个组分具有抗菌活性,经一级质谱分析,获得了13种抗菌活性组分的分子量;经二级质谱分析,将13种抗菌活性物质鉴定为Fengycin A或Fengycin B的同系物或同分异构体。【结论】从N6-34菌株发酵液中分离获得了13种抗菌成分,为杨树溃疡病的生物防治提供了理论依据。 相似文献
55.
目的建立长爪沙鼠原代肝细胞分离培养体系。方法以雄性长爪沙鼠为供体,采用组织消化法和Seglen两步灌流法分离肝细胞,以台盼蓝染色检测细胞得率和活率,过碘酸-希夫氏反应(PAS)鉴定肝细胞,倒置显微镜观察肝细胞形态变化,并使用含有多种细胞因子的培养基维持培养。结果组织消化法和Seglen两步灌流法平均每只长爪沙鼠可分别获得肝细胞(1.33±0.34)×107个、(3.97±1.15)×107个,细胞活率分别为(29.4±6.05)%、(80.3±4.56)%,这两种方法在细胞得率及活率方面存在显著差异。肝细胞内因有大量的糖原颗粒,经PAS染色后被染成红色。结果表明肝细胞在贴壁后72 h内,肝细胞形态发生显著变化。结论采用胶原酶经肝门静脉灌流分离肝细胞是一种高效获得肝细胞的方法。各种细胞因子有利于维持肝细胞在体外的生长分化,长爪沙鼠原代肝细胞分离培养体系的建立将为肝脏相关疾病研究和防治药物的开发提供技术支持。 相似文献
56.
蒙古高原岩黄芪属植物的分支分类学研究 总被引:6,自引:0,他引:6
以蒙古高原岩黄芪属植物为对象, 应用徐克学的最大同步法, 探讨了蒙古高原岩黄芪属(豆科)植物的系统演化, 并根据分支分类结果对蒙古高原岩黄芪属进行了系统学处理。作者首次将蒙古高原岩黄芪属分为岩黄芪亚属、半灌木岩黄芪亚属(新拟)和无刺岩黄芪组、丛枝岩黄芪组、无茎岩黄芪组、半灌木岩黄芪组等4 个组。本文对蒙古高原岩黄芪组的划分符合苏联植物志(1945)中的观点。 相似文献
57.
58.
T Hiraoka R C Miller M N Gould K J Kopecky H Ezaki N Takeichi T Ito M P Jones K H Clifton 《International journal of radiation biology and related studies in physics, chemistry, and medicine》1985,47(3):299-307
Normal thyroid cells from 25 individuals treated surgically for malignant or benign thyroid tumour were cultured in vitro and radiation induced cytotoxicity was studied. The mean lethal dose (Do), quasi-threshold (Dq), and extrapolation number (n) of survival curves of actively dividing thyroid cells assayed by colony formation were estimated to be 92.9 +/- 2.8 cGy (rad), 58.1 +/- 6.9 cGy and 2.0 +/- 0.1, respectively (average for 25 individuals +/- standard error). These results suggest that proliferating human thyroid cells are more sensitive to X-rays than most other nonhaematologic mammalian cells in similar assays. Cell survival was not significantly affected by sex, age, disease or exposure to atomic bomb radiation of the cell donor. However, the number of samples currently available is too small for definite conclusions in this regard. 相似文献
59.
C Beltrán J Kopecky Y C Pan H Nelson N Nelson 《The Journal of biological chemistry》1992,267(2):774-779
A DNA fragment containing the gene encoding subunit C of vaculor H(+)-ATPase (V-ATPase) was cloned from a yeast library. The predicted amino acid sequence indicated that the C subunit consists of 373 amino acids with a calculated molecular mass of 42,287 Da. The protein from yeast is 37% identical in its amino acid sequence to the C subunit of bovine V-ATPase. The DNA fragment that was cloned in this study contained two additional reading frames. At the 5' end an amino acid sequence that is homologous to Artemia elongation factor 1 was detected. At the 3' end the N-terminal part of a kinesin-like protein was observed. The gene encoding subunit C of the V-ATPase was interrupted, and the resulting mutant could not grow at high pH and was sensitive to low and high Ca2+ concentrations in the growth medium. Transformation of the mutant by a plasmid containing the gene encoding subunit C repaired the phenotype of the mutant. Substitution of more than half of the coding region by a corresponding DNA fragment encoding the bovine subunit C resulted in a phenotype indistinguishable from wild type. Immunological studies with the disruptant mutant revealed that subunit C is necessary for the assembly of the catalytic sector of the enzyme. 相似文献
60.
Molecular evolution of cytochrome c oxidase: rate variation among subunit VIa isoforms 总被引:3,自引:1,他引:2
Schmidt TR; Jaradat SA; Goodman M; Lomax MI; Grossman LI 《Molecular biology and evolution》1997,14(6):595-601
Cytochrome c oxidase (COX) consists of 13 subunits, 3 encoded in the
mitochondrial genome and 10 in the nucleus. Little is known of the role of
the nuclear-encoded subunits, some of which exhibit tissue-specific
isoforms. Subunit VIa is unique in having tissue-specific isoforms in all
mammalian species examined. We examined relative evolutionary rates for the
COX6A heart (H) and liver (L) isoform genes along the length of the
molecule, specifically in relation to the tissue-specific function(s) of
the two isoforms. Nonsynonymous (amino acid replacement) substitutions in
the COX6AH gene occurred more frequently than in the ubiquitously expressed
COX6AL gene. Maximum-parsimony analysis and sequence divergences from
reconstructed ancestral sequences revealed that after the ancestral COX6A
gene duplicated to yield the genes for the H and L isoforms, the sequences
encoding the mitochondrial matrix region of the COX VIa protein experienced
an elevated rate of nonsynonymous substitutions relative to synonymous
substitutions. This is expected for relaxed selective constraints after
gene duplication followed by purifying selection to preserve the
replacements with tissue-specific functions.
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