牛分枝杆菌MPB83基因的原核表达及免疫活性分析

利用PCR技术,以牛型分枝杆菌(M.bovis)Vallee菌株的全基因组DNA为模板,扩增出了一条600bp的MPB83基因片段,将其克隆至pMD18T载体中,经核苷酸序列测定确证后,KpnI/EcoRI双酶切,然后亚克隆到原核表达载体pET30a的相同酶切位点,构建表达质粒pETMPB83,将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后SDSPAGE检测表达情况,重组质粒pETMPB83在30kDa处有一特异表达带,与预计大小相符。经Ni柱纯化后,Westernblot检测纯化蛋白具有免疫活性,用纯化的该蛋白进行动物(兔)接种制备抗血清,用Westernblot和ELISA检测该抗血清的效价和特异性,结果表明特异性较好。     

经验性治疗社区获得性肺炎中的疗效评价

目的 评价β-内酰胺类抗生素联合大环内酯类与单用氟喹诺酮类治疗社区获得性肺炎的疗效.方法 收集符合纳入及排除标准的2010年1月1日至2011年6月30日期间就诊于浙江大学医学院附属第一医院的社区获得性肺炎临床资料并进行分析.结果 有89例病例纳入本次研究,其中56例接受β-内酰胺类抗生素加大环内酯类,33例单用氟喹诺酮类治疗.两组患者在年龄,性别组成,合并症,入院前抗生素治疗,影响体温药物的应用,体征及部分实验室检查等方面差异均无统计学意义(P＞0.05).在临床疗效评价上,两组在入院后退热时间、住院时长及CRP下降80％时间差异均无统计学意义(P＞0.05),根据PSI进行亚组分析差异亦无统计学意义.结论 β-内酰胺类抗生素联合大环内酯类与单用氟喹诺酮类在治疗轻中度社区获得性肺炎时,二者疗效相当.     

小兴安岭马鹿粪便的分解速率

粪便分解速率是粪便堆在自然条件下消失所用的时间,利用粪便距离取样法估算鹿科动物种群数量,是种群数量管理研究的重要基础。为揭示高纬度温带大陆性气候条件下的鹿科动物粪便分解速率,解决在我国普遍存在的目标种相对隐蔽、种群密度低、粪便分散导致的原地回访观测耗时耗力难以完成的问题,本研究在温带大陆性气候的小兴安岭范围内,选择铁力林业局建设林场为研究区,于2015年1月收集38堆马鹿(Cervus elaphus)的新鲜粪便,将这些粪便堆集中移至方便回访的一处马鹿代表性生境——阳坡针阔混交林,记录每堆粪便的原始粪粒数,之后间隔一定时间进行回访并记录每堆粪便剩余的粪粒数和各粪便堆是否分解完全,共回访8次。利用R 4.1. 2中的逻辑斯蒂回归得出回归方程的截距b0和斜率b1,再利用MATLAB R2020b计算粪便分解速率。结果表明,马鹿粪便的平均分解速率为(646±53) d。本研究将粪便人工移动集中放置于一处进行观测实验,为研究低种群密度的动物粪便分解速率提供了可行途径,丰富了我国鹿科动物粪便分解速率研究,从而减小了利用粪便距离取样法估算种群数量的阻碍。     

术中不同速率输注右美托咪定在全凭静脉麻醉中的量效关系研究

目的：以脑电双频指数（bispectral index,BIS）作为麻醉镇静程度指标,探讨不同速率输注右美托咪定（dexmedetomidine,DEX）对全凭静脉麻醉中丙泊酚用量,术中重要时点血液动力学及麻醉恢复质量的影响。方法：选择拟于全麻下行妇科腹腔镜手术的患者60例（ASAI～II级）,根据DEX输注速率不同随机分为四组,即D1、D2、D3和D4组,每组15例,麻醉诱导前四组均给予负荷剂量DEX0．5μg·kg-1,10min输注完毕,继而四组分别以0．2、0．4、0．6和0．8μg·kg^-1·h^-1输注速度持续输注至冲洗腹腔。四组麻醉诱导方法相同,术中以BIS作为麻醉深度指标,根据BIS值调节丙泊酚血浆靶浓度维持麻醉。记录入室用药前（T0）、DEX负荷量输注后（T1）、气腹即刻（T2）、气腹后5min（T3）、气腹后30min（T4）、解除气腹后5min（T5）、拔喉罩即刻（T6）、拔喉罩后1min（T7）时收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、心率（HR）、丙泊酚平均用量、苏醒时间、拔喉罩时间、拔喉罩后15rainOAA／s评分、术中及术后24小时内不良反应的发生情况。结果：①D2、D3、D4组丙泊酚平均用量较D1组明显减少（P〈0．05）,D3、D4组丙泊酚平均用量较D：组明显减少（P〈0．05）。D3、D4组间差异无统计学意义（P〉0．05）。②与T0比较,Tl～T2时四组SBP、DBP、HR降低（P〈0．05）,T3～T4时D3、D4组SBP、DBP、HR降低（P〈0．05）,D1、D2组SBP、DBP无明显变化（P〉0．05）,T5～T7时四组SBP、DBP、HR降低（P〈0．05）;D3、D4组在T3～T4时SBP、DBP较D1、D2组明显降低（P〈O．05）,D1、D2两组间差异无统计学意义（P〉0．05）,D3、D4两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。③D4组苏醒时间、拔喉罩时间、较Dlq组明显延长（P〈0．05）,D4组OAA／s评分较D1-3组明显降低（P〈0．05）。④D4组使用阿托品次数较D1-3组明显增多（P〈0．05）,四组术中使用麻黄碱次数和术后24小时内恶心、呕吐、寒战差异无统计学差异（P〉0．05）。结论：在妇科腹腔镜手术中,DEX作为全身麻醉辅助用药,负荷剂量0．5μg·kg-1,术中持续输注速率0．4μg·kg-1·h-1可以有效降低丙泊酚用量,使围手术期的血流动力学保持平稳,不延长苏醒时间和拔喉罩时间,且不良反应更少,值得临床推广应用。     

环境因子及藻体密度对条斑紫菜生长与氮磷去除效率的影响

以条斑紫菜为材料,系统探究实验室条件下光照强度、温度、光周期、盐度和干出等生态因子和藻体密度对条斑紫菜生长和氮磷去除的影响,为今后条斑紫菜大规模栽培的生态修复潜力研究及海洋富营养化治理奠定理论基础。实验室条件下不同藻体密度、光照强度、光周期、温度、盐度和干出时间对条斑紫菜生长及氮磷去除效率的影响。结果表明:条斑紫菜在藻体密度0.1 g/L、光照强度为120μmol m-2s-1时特定生长率最大,为38.1%。随着藻体密度增加,光照强度减小,其特定生长率逐渐减小,当藻体密度为1.6 g/L、光照强度为30μmol m-2s-1时,特定生长率最小为12.6%;藻体密度0.1—0.8 g/L时随着藻体密度的增加条斑紫菜对NO-3-N和PO3-4-P的去除效率显著增加,藻体密度为0.8—1.6 g/L时藻体对NO-3-N和PO3-4-P去除效率差异不大,其中藻体密度1.6 g/L、光照强度90μmol m-2s-1时条斑紫菜对NO-3-N和PO3-4-P去除效率均达到93%以上。为进一步探究其他环境因子的影响,因此在温度和光周期实验中选择氮磷去除率适中的藻体密度0.4 g/L和最适光照强度90μmol m-2s-1。温度为15℃、光周期为16L∶8D条件下条斑紫菜特定生长率最大,为36.9%,且氮和磷去除效率也最大,分别为91.9%和81.6%。条斑紫菜生长适宜盐度为10—35,最佳盐度为25,干出时间越长生长越慢,氮磷去效率也越低,且有较大交互作用,但干出后的紫菜光合作用更强。以上研究将为应用大型海藻条斑紫菜大规模栽培进行生态修复奠定基础。     

ygeG基因对禽致病性大肠杆菌生物学特性及致病性的影响

【目的】本研究构建禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli, APEC) yge G基因缺失株,并对其进行生物学特性及致病性分析,探究yge G在APEC致病过程中的作用,为后期深入研究其所在的Ⅲ型分泌系统2 (type three secretion systems 2,ETT2)毒力岛的致病机制奠定基础。【方法】利用Red同源重组技术构建yge G缺失株APEC81-Δyge G及其回复株APEC81-CΔyge G,通过运动性、生物被膜形成能力、抗逆性、抗血清杀菌能力等试验分析yge G对APEC致病性相关的生物学功能的影响,并通过细胞黏附、侵袭试验及荧光定量PCR检测细胞炎性因子转录水平探究yge G对APEC感染宿主过程的影响。【结果】成功构建了缺失株APEC81-Δyge G和回复株APEC81-CΔyge G;与野生株APEC81相比,缺失株APEC81-Δyge G生长特性无显著变化(P>0.05),生物被膜形成能力显著降低(P<0.01),运动能力极显著升高(P<0.001),对酸休克和氧化休克的耐受力极显...     

NSE在颅脑手术前后患者血清中的动态变化及其与预后的关系

目的 分析颅脑手术前后患者血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)的动态变化与治疗效果、预后的相关性.方法 对我科2012年5月~2013年1月入院行择期手术的颅脑手术患者90例,按临床诊断分类分组进行手术.分别于术前1天,术后第1、3、7天抽取空腹外周静脉血,使用双抗体夹心ELISA法测定NSE的血清浓度,并与正常对照组比较.结果 手术组中除面肌痉挛组外,术前血清中NSE含量均较对照组明显升高(P＜0.01).手术组术后第1、3天血清中NSE含量均较对照组明显升高(均P＜0.01).术后第7天,手术组中除面肌痉挛组外血清NSE含量较对照组明显升高(P＜0.01).各手术组血清NSE含量在术后均迅速上升,第1天达高峰,然后逐渐下降.根据预后评分,预后恶劣组血清NSE高于预后良好组(P＜0.01).行颅脑手术患者血清中NSE术前及术后第1、3、7天值与GOS评分呈负相关(r分别为-0.463、-0.682、-0.735、-0.748,均P＜0.01).结论 动态监测血清NSE对不同颅脑手术患者手术前后进行病情评估、疗效观察及预后判断具有重要价值.     

川西北荞麦种间亲缘关系初步研究

采用RAPD和同工酶技术对川西北具有代表性的10份荞麦材料进行分析.结果表明,筛选出的15个RAPD引物扩增出388条带.其中352条具有多态性,多态性比率为90.72%;过氧化物同工酶分析获得15条酶带,酯酶同工酶获得10条酶带.3种方法聚类结果基本一致,10份材料可初步聚为4个类群.其中,与金荞亲缘关系相比,甜荞较近而苦荞较远;普格县野荞和齿翅野荞、细柄野荞亲缘关系较近,划为同类;阿坝野荞单独划为一类,对其在分类中的地位有待进一步研究.     

微流控线性加载低温保护剂减少猪MⅡ期卵母细胞的渗透损伤

在卵母细胞低温保存中,通常需要加载冷冻保护剂来抑制冰晶对细胞的损伤,但高浓度冷冻保护剂的加载会对细胞造成渗透损伤.为了减小细胞的渗透损伤,本文设计并制作了适合卵母细胞冷冻保护剂加载的微流体装置,研究了微流控线性加载30%(v/v)二甲基亚砜(Me2SO)低温保护剂时细胞内保护剂浓度变化、细胞体积变化,以及对细胞存活率与发育率的影响,并与传统的加载方法(一步法、分步法)做了比较.结果表明:微流控法能够实现卵母细胞冷冻保护剂的连续线性加载,避免了卵母细胞体积的骤变,显著减小了细胞的渗透损伤,提高了细胞的存活率.其中细胞的最小渗透体积减小为0.86V0,细胞的存活率达到92.8%,比一步法高33%,比两步法高16.3%,但与四步法之间无显著性差异.经孤雌激活后体外培养,细胞的卵裂率和囊胚率分别达到75.8%和27.4%,都显著高于一步法和分步法(P0.05).因此,微流控线性加载低温保护剂能够显著减小细胞的渗透损伤,为卵母细胞低温保存技术提供新思路.     

黄绵土坡耕地大豆的水肥产量效应

研究了不同施肥量(N、P配施)下黄绵土坡耕地大豆的水肥产量效应．结果表明,水分利用效率(WUE)与作物产量(Y)正相关,y＝0．0017l 0.0035WUE．单施磷时,作物产量和WUE随磷的增加而增大;单施氮时,作物产量和WUE随氯的增加先增大后降低,表明施用氮应该配合施用一定量的磷．施肥能显著提高作物产量和WUE,与不施肥相比,施肥时作物产量和WUE分别提高了86．76％一470．16％和69．64％一438．47．与单施氦、磷相比,氮、磷合理配施能提高作物产量和水分利用效率,适宜的N、P(P205)配施比例为1．3：1．