苏云金芽胞杆菌大质粒pBMB28的克隆

苏云金芽胞杆菌幕虫亚种YBT-020具有典型的晶胞粘连表型。在前期的研究中,通过质粒消除实验,推测晶胞粘连现象与YBT-020内生质粒pBMB28有关。为了定位质粒pBMB28上控制晶胞粘连表型的基因,首先对质粒pBMB28进行克隆。利用穿梭载体pEMB0557,成功构建了苏云金芽胞杆菌YBT-020的基因组人工染色体(BAC)文库。前期的研究表明晶体蛋白基因cry28Aa定位在质粒pBMB28上,根据cry28Aa基因序列设计引物,从文库中筛选到含有cry28Aa的重组质粒pBMB231。镜检和SDS-PAGE证明质粒pBMB231转化无晶体突变株BMB171形成的重组子BMB231可以产生Cry28Aa晶体蛋白,但不能恢复晶胞粘连表型。对重组质粒pBMB231的插入片段末端序列测定并设计引物筛选文库,通过染色体步移方式得到4个可以重叠覆盖质粒pBMB28不同区域的克隆子,从而克隆了该质粒。对这4个克隆子末端测序和酶切分析,测算出该质粒的大小约为140 kb。进一步确定应用基因组BAC文库以及重叠片段筛选的方法,可以快速有效的克隆苏云金芽胞杆菌大质粒。     

Antisense RNA-mediated suppression of Bmi-1 gene expression inhibits the proliferation of lung cancer cell line A549

The oncogene Bmi-1 regulates cell proliferation and senescence. It is reported that it controlled the self-renewal of leukemic and breast cancer stem cell and was overexpressed in some solid tumors and hematologic malignancies. In this study, the effects of inactivation of Bmi-1 mediated by a plasmid-expressing antisense Bmi-1 RNA on the proliferation of lung cancer cell line A549 were investigated. As a result, when the plasmid was stably introduced into the cell line, the Bmi-1 protein level was specifically downregulated, and the cell proliferation was significantly inhibited as shown by the cell growth curve and colony forming assay. The cells were found mostly in the phase of G(0)/G(1) and cells in S phase were significantly decreased. Our results suggest that targeting Bmi-1 might be a therapeutic potential for the treatment of non-small-cell lung cancer.     

湖南湖北两省H6亚型禽流感病毒表面基因的序列分析

2008年至2009年间,在湖南和湖北两省的活禽市场中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,为了解这14株病毒之间的分子特征和差异,我们运用PCR和测序鉴定对这14株病毒的NA基因进行了分型,并对其表面基因HA和NA进行序列测定及序列分析.14株H6亚型病毒中,H6N2亚型12株,H6N6亚型2株.序列测定和进化分析结果显示:DK/HN/284的HA基因与其它13株的HA差异性较大,差异性达到19.4%～20.2%,其余13株毒同源性在94.2%～99.9%;N2亚型NA基因的同源性在91.1%～99.9%,差异性比较大;两株N6亚型NA基因同源性为89.5%,差异明显.这些数据表明:不同毒株呈现一定的地域性差异.与我国周边其它地区的H6亚型禽流感毒株序列进行比较发现,只有DK/HN/284的HA基因与香港早期的毒株可能有着共同的来源,其余都与香港和韩国等的毒株有着较大的差异性,并且各个毒株的HA基因上潜在的糖基化位点和受体结合位点也有所不同,这些数据表明,这些毒株表现出明显的异源性.     

湖北省爬行动物资源概况

摘要：为了搞清湖北省爬行动物资源概况,通过总结文献资料,并结合作者等最近20余年积累的调查资料,从区系特点、地理分布、评估等级、资源量及保护对策等方面总结了湖北省爬行动物的资源概况。结果显示,湖北省现有爬行动物2目12科44属78种,主要分布在鄂西南（57种,占73.1％）、鄂西北(47种,占60.3％)和鄂东南（43...     

猪细小病毒单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备猪细小病毒（PPV）杂交瘤细胞株,并对其分泌的PPV单克隆抗体进行鉴定。方法按常规方法制备并获得2株杂交瘤细胞。用染色体分析对杂交瘤细胞进行鉴定,用间接ELISA、免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）和间接免疫荧光试验（IFA）对其分泌的单克隆抗体进行效价测定、亚型鉴定和特异性鉴定。结果得到2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株2H9、1F9,染色体数目介于90～110之间。细胞上清效价均达1∶1×104,腹水效价均达1∶1×107,其亚型分别为IgG1、IgM,均为kappa链。2H9、1F9单抗与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒I型（PCV-1）、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）、乙脑病毒（JEV）等均无交叉反应。IPMA和IFA检测结果显示2H9、1F9单抗均能与接种于PK-15细胞的PPV发生特异性反应。结论成功制备了2株抗PPV杂交瘤细胞株,证实其产生的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性。     

Epigallocatechin-3-gallate对原代大鼠脂肪细胞脂肪分解及HSL、TGH转录表达的影响

体内能量代谢是维持机体正常生理活动的基础,而脂肪细胞的脂解是能量代谢的核心反应之一,调控脂肪酸从TG库释放,后由血清白蛋白转运至体内各个组织以满足能量需要。如果脂解作用出现障碍,就会影响机体能量的平衡进而引发肥胖和胰岛素抵抗等疾病。表没食子儿茶素没食子酸酯(Epig     

杨盘二孢菌诱导的杨树差异表达基因的功能分析和染色体定位

利用cDNA芯片技术从含有2,952个克隆的杨树芯片中筛选出1,160个受杨盘二孢菌诱导的基因。功能分析表明,该1,160个基因分别属于11个功能类别,除了功能未知基因外,参与新陈代谢、防御反应、信号传导及转录调控的基因最多,这4大类基因约占基因总数的42%。1,160个差异表达基因中有926个基因被定位于19条染色体上,其中被定位于第Ⅱ条染色体上的差异基因最多,共102个(11.0%),其次是第Ⅰ条染色体,共93个(10%),被定位到第ⅩⅦ条染色体上的差异基因最少,仅有11个,基因在染色体上的分布则表现为在部分染色体的末端区域存在大量的聚集,在中间区段则相对较少和排列稀疏,基因的这种分布情况与植物抗病的关系有待进一步研究。     

Self-assembly of coiled-coil tetramers in the 1.40 A structure of a leucine-zipper mutant

The hydrophobic core of the GCN4 leucine-zipper dimerization domain is formed by a parallel helical association between nonpolar side chains at the a and d positions of the heptad repeat. Here we report a self-assembling coiled-coil array formed by the GCN4-pAe peptide that differs from the wild-type GCN4 leucine zipper by alanine substitutions at three charged e positions. GCN4-pAe is incompletely folded in normal solution conditions yet self-assembles into an antiparallel tetraplex in crystals by formation of unanticipated hydrophobic seams linking the last two heptads of two parallel double-stranded coiled coils. The GCN4-pAe tetramers in the lattice associate laterally through the identical interactions to those in the intramolecular dimer-dimer interface. The van der Waals packing interaction in the solid state controls extended supramolecular assembly of the protein, providing an unusual atomic scale view of a mesostructure.     

响应面法优化普通小球藻混合营养培养基组成生产生物质

利用响应面法优化了混合营养培养普通小球藻生产生物质的培养基组成.首先采用Plackett-Burman设计对11个相关营养因素的效应进行了评价,并筛选出影响小球藻细胞生长的3个主要因素为KNO3、葡萄糖和NaC1;然后结合Box-Behnken设计建立了以小球藻浓度为响应值的二次回归方程模型,获得优化的培养基组成为KNO31.64g/L、葡萄糖45g/L、NaC1 1.57g/L;模型预测的最大浓度为5.28g/L,验证值为5.68g/L;验证结果表明,所建立模型预测精度较好,可用于优化小球藻的混养培养基组成.优化条件下混养小球藻细胞的蛋白质和色素含量较优化前降低,而可溶性糖和油脂含量提高,脂肪酸以棕榈酸和油酸为主;细胞组分分析结果显示,混养培养所得小球藻生物质具有作为生产微藻生物能源原料的潜力.     

大鼠淋巴细胞培养上清液总IgG 含量ELISA 检测方法的建立

目的:建立一种定量测定大鼠淋巴细胞培养上清液中总IgG(免疫球蛋白G)含量的双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验)检测方法。方法:用方阵实验确定包被抗体、检测抗体的最佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围;评价标准曲线的可重复性、精密度和可应用性。结果:包被抗体和检测抗体的最佳效价分别为2μg/ml和1:4000稀释;检测的线性范围为0.25-16ng/ml。经方法学评价,可重复性和精密度较高,应用性较强。结论:该方法灵敏度高,重复性好,可作为科研过程中检测大鼠淋巴细胞培养上清液总IgG含量的一种精确、方便、可靠的方法。