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A method was developed to provide a real-time measurement of intracellular adenosine 5'-triphosophate (ATP) concentrations in growing Escherichia coli. The bacteria to be monitored must first be modified by inserting the cDNA for firefly luciferase expressed from a constitutive promoter. Such a construct leads to constant specific activity of firefly luciferase during both the lag phase and exponential growth. When the luciferase substrate, D-luciferin, is added to the medium, ATP within the cells is utilized in the luciferase-catalyzed reaction that produces light. The light is carried from the bioreactor to a computer-based detector by an optical fiber. The detected per cell light emission varies during exponential growth. Analysis of cytoplasm extracts shows that this variance is related to changes in the ATP concentration, which ranges from 1 to 6 times the literature value for K(M). Experimental analyses demonstrated that inner filter effects are not a significant factor affecting the use of this system. The method was tested in a benchtop fermentor at cell densities above 13 g/L dry cell weight. A correction factor based on the accumulated light data is calculated and used in real time to account for consumption of luciferin from the culture broth by the light producing reaction. Dissolved oxygen concentrations must be kept above 15% of air saturation to ensure constant light output, but no detectable increase in oxygen demand is seen. The method does not significantly affect growth or production rates. (c) 1996 John Wiley & Sons, Inc. 相似文献
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63.
以淀粉珠为载体的亲和层析法分离纯化高温α淀粉酶张学忠,宋伦,王群,吴晓霞,唐锌进(吉林大学酶工程国家重点实验室,长春130023;南京师范大学生物系,南京210024)金凤燮等人从酒曲中筛选出高产热稳定α淀粉酶的菌株,命名为Bacillussp-JF... 相似文献
64.
汉防己甲素(汉甲)及克矽平(Polyvinylpyridine-N-Oxide,PVNO)是目前较为有效的抑制矽肺纤维化的药物。本文研究了其对胶原mRNA水平的影响.斑点杂交实验表明大鼠接尘60天和120天后α1(Ⅰ)及α1(Ⅲ)mRNA水平明显上升,经汉甲或克矽平治疗1个月或3个月后,胶原mRNA水平明显下降。原位杂交结果表明胶原mR-NA银颗粒与细胞性结节和增厚的肺泡壁的成纤维细胞分布重合。汉甲或克矽平治疗后银颗粒数下降。提示汉甲及克矽平对矽肺进程中的胶原基因表达增强有抑制作用。 相似文献
65.
用奎吖咽(quinacrine)作荧光指标剂,测定玉米(ZeamaysL.)根尖微粒体(MIC)膜囊泡的H~+-泵活性,结果表明1mmol/LNaN_3仅抑制该泵活性约8%,而0.8mmol/L钒酸盐(Van)则可抑制其活性达80%,说明MIC制剂中H~+-泵活性主要由质膜(PM)H~+-ATPase产生。此泵活性严格需要Mg~(2+),二价阳离子作用大小的顺序为Mg~(2+)>Mn~(2+)>Zn~(2+)>Ca~(2+)=0;阴离子作用大小的1顺序为Br~->Cl~->NO_3~->SO_4~(2-),并初步证实当质膜同侧发生电子传递时,没有跨膜H~+梯度(△μH~+)生成。 相似文献
66.
67.
本文用细胞免疫化学方法,在冰冻切片上,检测了胎儿不同组织和器官内带γδ和αβ受体的T细胞(TCR)的分布,结果发现TCR细胞的分布与,般T细胞不同,有相对固定的分布区,如胸腺内TCR细胞主要分布在皮筋质交界处和髓质部;脾脏内的γδT主要位于边缘区,而αβT主要位于动脉周围淋巴鞘,在红髓和血窦两种细胞共存;淋巴结内只有少数TCR细胞位于滤泡间或副皮质,滤泡内则未见。消化管内的TCR细胞主要分布在小肠的固有膜,而胃、大肠和阑尾的固有膜内很少见;肝内TCR细胞主要集中在血管和血窦周围;皮肤切片内的少数TCR细胞见于真皮内,表皮基底层细胞内未见。这些细胞在胎儿期的免疫皮应及其生理功能还不清楚。 相似文献
68.
本文报导了胰腺提取物中两种可被钙/钙调素依赖性蛋白激酶磷酸化的热稳定蛋白。SDS-PAGE测定其表观分子量分别为17.7kD和6kD。经钙/钙调素依赖性蛋白激酶磷酸化后,其最大磷酸参入量为8.8μmol/g蛋白。同时磷酸化作用导致17.7kD蛋白在SDS-PAGE中迁移率发生变化。本文还进一步分析了各种阳离子对磷酸化的影响,并对此两种蛋白可能具有的生理功能进行了初步探讨。 相似文献
69.
福建永安丰海二叠系上部及三叠系底部的双壳类动物群* 总被引:2,自引:0,他引:2
系统研究了闽西永安丰海地区二叠系上部及三叠系下部的双壳类动物群面貌、层位及组合,并与国内外相当的地层进行了对比,阐明了该双壳动物群在二叠-三叠系界线划分中的地层意义.描述了15属24种(其中5新种)、5未定种. 相似文献
70.
A novel method is described for the on-line determination of viable cell number. It has been tested in fermentations of Escherichia coli. The cells are transfected with the gene for firefly luciferase and fed low levels of luciferin in the medium. The reaction requires ATP, so the nonviable cells cannot produce light. Thus, light production is linear with viable cell density from innoculation through most of exponential growth. The light emitted by these cells is then conducted from the reaction vessel to the light detection equipment by an optical fiber. With the equipment described below, as few as a 10(6) cells/mL, or an OD(600) of 0.004, are easily detectable and concentrations greater than 10(10) cells/mL are well within range. The data are collected by a computer, so adaptation to on-line control applications is straightforward. During lag phase, this method is much more accurate then optical density measurements. At the end of exponential growth, rapid changes in light production mark carbon source depletion and the onset of cell lysis. A simple model accounts for the luciferin used during the fermentation and corrects the light detected to the proper cell density. (c) 1993 John Wiley & Sons, Inc. 相似文献