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Site-directed mutagenesis by combination of homologous recombination and DpnI digestion of the plasmid template in Escherichia coli 总被引:1,自引:0,他引:1
A rapid site-directed mutagenesis strategy using homologous recombination and DpnI digestion of the template in Escherichia coli is described. Briefly, inverse polymerase chain reaction amplification of the entire circular plasmid was performed by mutagenic primers with overlapping sequences ( approximately 15 bp) for generating PCR products with approximately 15 bp of homology on the terminal ends. On direct transformation of the amplified PCR products into restriction endonuclease DpnI-expressing E. coli BUNDpnI, homologous recombination occurs in E. coli while the original templates are removed via DpnI digestion in vivo, thus yielding clones harboring mutated circular plasmids. Nearly 100% efficiency was attained when this strategy was used to modify DNA sequences. 相似文献
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MiR‐616‐3p modulates cell proliferation and migration through targeting tissue factor pathway inhibitor 2 in preeclampsia 下载免费PDF全文
Yetao Xu Dan Wu Ziyan Jiang Yuanyuan Zhang Sailan Wang Zhonghua Ma Bingqing Hui Jing Wang Weiping Qian Zhiping Ge Lizhou Sun 《Cell proliferation》2018,51(5)
Objectives
Despite improvements in diagnosis and treatment, preeclampsia (PE) continues to pose a significant risk of maternal and foetal morbidity and mortality if not addressed promptly. An increasing number of studies have suggested that tissue factor pathway inhibitor 2 (TFPI2) acts as a suppressor gene, possibly inhibiting multiple serine proteases affecting cell proliferation and migration. It plays an essential role in the occurrence and development of PE, but the pathogenesis remains unclear.Materials and methods
In our research, we performed western blotting, immunohistochemistry and qPCR assays to investigate TFPI2 and miR‐616‐3p expression in preeclamptic placental tissues. Cell assays were performed in HTR‐8/SVneo and JEG3 cell lines. Cell proliferation and migration events were investigated by MTT, EdU and transwell assays. In conjunction with bioinformatics analysis, luciferase reporter assays were performed to elucidate the mechanism by which miR‐616‐3p binds to TFPI2 mRNA.Results
We established that TFPI2 protein levels were significantly upregulated in PE placental tissues. In addition, we found that miR‐616‐3p binds specifically to the 3′‐UTR region of TFPI2 mRNA. Furthermore, miR‐616‐3p knockdown or TFPI2 overexpression substantially impaired cell growth and migration, whereas miR‐616‐3p upregulation or TFPI2 knockdown stimulated cell proliferation and migration. This miR‐616‐3p / TFPI2 axis was also found to affect the epithelial‐mesenchymal transition process in PE.Conclusions
Our results demonstrated that TFPI2 plays a vital role in the progression of PE and might provide a prospective therapeutic strategy to mitigate the severity of the disorder.74.
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甘蓝型油菜的外珠孔基本上为开放结构,内珠孔为闭合结构。胚囊成熟时反足细胞已退化,仅由二个助细胞、一个卵细胞、与一个中央细胞组成。助细胞极性不明显,二个助细胞在花粉管到达前均显示同等退化迹象。卵细胞极性明显。中央细胞中含结构独特的质体。受精前,卵与中央细胞的质膜之间含有特殊的电子致密物质。 相似文献
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三叶鬼针草与不同本地植物竞争对土壤 微生物和土壤养分的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
入侵植物三叶鬼针草(Bidens pilosa)对我国农牧业生产造成了重大的损失。本文主要研究三叶鬼针草入侵与不同本地植物竞争对土壤微生物群落结构和土壤养分的影响。利用磷脂脂肪酸方法(phospholipid fatty acids, PLFAs)测定土壤微生物群落组成, 同时测定土壤养分和酶活性, 并利用Canoco4.5软件分析了土壤微生物、土壤养分和土壤酶活性的相关性。结果表明: (1)三叶鬼针草对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、丛枝菌根真菌等土壤微生物具有较强的聚集能力, 且其根际土壤聚集的微生物类群与本地植物种类密切相关。(2)三叶鬼针草入侵显著增加了入侵地土壤的有机碳含量, 降低了铵态氮的含量; 土壤中的速效钾、速效磷和硝态氮的含量则与本地植物种类密切相关。(3)相关性分析表明, 16:00和16:1 ω5c对铵态氮的含量影响较大, 而三叶鬼针草入侵地16:00和16:1 ω5c的含量显著高于裸土对照, 进而推测这一状况导致了铵态氮含量的降低。(4) 15:1 anteiso A和18:1 ω5c与速效钾的含量呈显著正相关, 而其含量在狗尾草(Setaria viridis)中显著高于其他处理, 三叶鬼针草与狗尾草混种处理中土壤中速效钾的含量高于其他处理。以上结果说明, 三叶鬼针草通过改变土壤微生物群落结构影响了土壤酶活性和土壤养分, 且这种改变与入侵地本地植物种类有关。 相似文献
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目的探讨血管紧张素原基因(angiotensinogen gene,AGT)-6A/G,-20A/C,M235T和T174M 4个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与新疆哈萨克族高血压患者左室肥厚的关系。方法采用低渗溶血法破裂血细胞、蛋白酶K消化、饱和酚/氯仿抽提法提取白细胞基因组DNA。采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(polymerase chain reaction—restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术进行个体基因型分型。结果①在不考虑年龄、高血压病史时间、性别及收缩压、舒张压对左室肥厚的影响的前提下,未发现-6A/G、-20A/C与哈萨克族高血压左室肥厚的相关关系。②在以性别作为亚变量的分析结果中,我们发现-6A/G和-20A/C分别与哈萨克族女性和男性高血压左室肥厚相关。③不同SNPs间的配对连锁不平衡分析结果显示,除M235T与T174M之间外,其他各位点间存在有统计学意义的连锁不平衡关系。④单体型分析结果发现,研究人群AGT基因-6A/G、-20A/C、M235T和T174M4个SNPs构成了11种主要的单体型,其中H2(A—G—M—T)、H5(C—A—M—M)、H6(C—A-T—T)、H9(C-A—T—M)的频率在左室肥厚、非左室肥厚两组的分布存在差异,且具有统计学意义(P〈0.05)。结论AGT基因-6A/G、-20A/C、M235T和T174M变异可能与新疆哈萨克族高血压左室肥厚有关。 相似文献
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