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A human liver lambda gt11 library was screened with antibodies raised to a purified rat liver carboxylesterase, and several clones were isolated and sequenced. The longest cDNA contained an open reading frame of 507 amino acids that represented 92% of the sequence of a mature carboxylesterase protein. This sequence possessed many structural features that are highly conserved among rabbit and rat liver carboxylesterase proteins, including Ser, His, and Asp residues that comprise the active site, two pairs of Cys residues that may participate in disulfide bond formation, and one Asn-Xxx-Thr site for N-linked carbohydrate addition. When the clone was used to probe human liver genomic DNA that had been digested with various restriction enzymes, many hybridizing bands of differing intensities were observed. The results suggest that the carboxylesterases exist as several isoenzymes in humans, and that they are encoded by multiple genes. 相似文献
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转基因技术是二十世纪八十年代初发展起来的一项生物领域高新技术。近年来,外源基因经显微注射导入哺乳类、两栖类、昆虫类以及鱼类的受精卵或胚胎,从而使人们对在整个动物的系统发育期间外源基因表达的研究更加深入。与哺乳类、两栖类以及昆虫类相比,鱼作为在脊椎动物进化的低级阶段,更适合在受精卵或胚胎期的显微操作。转基因鱼模型的研究为鱼类基因工程育种奠定了理论基础,基因导入方法的成熟、胚胎干细胞技术的发展以及基因组学理论的应用则为鱼类基因工程育种提供 相似文献
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Dexing Ma Chunli Ma Long Pan Guangxing Li Jinghong Yang Jiehua Hong Haofan Cai Xiaofeng Ren 《Experimental parasitology》2011,(1):208-214
Eimeria acervulina 3-1E antigen gene and mature chicken interleukin 15 (mChIL-15) gene were cloned into expression vector pcDNA3.1(+) in different forms, produced DNA vaccine pcDNA3.1-3-1E, and pcDNA3.1-3-1E-linker-mChIL-15 co-expressing E. acervulina 3-1E gene and mChIL-15 gene, respectively. The expression of objective gene in vitro was detected by indirect fluorescent antibody technique and immunohistochemistry. The two DNA vaccines were administered by intramuscular leg injection. An animal challenge experiment was carried out to evaluate the immune protective efficacy of the vaccines. The results indicated that DNA vaccines were successfully constructed and the expression of objective gene could be detected in vitro. The animal experimental results showed that both DNA vaccines could provide partial protection against homologous challenge in chickens. The chimeric DNA vaccine, pcDNA3.1-3-1E-linker-mChIL-15, could significantly increase oocyst decrease ratio, reduce the average lesion score in the duodenum, improve body weight gain, and increase anti-coccidial index (ACI) compared to the DNA vaccine pcDNA3.1-3-1E. Taken together, these results demonstrate ChIL-15 enhance the immunogenicity of 3-1E DNA vaccine, and co-expression of cytokine and optimized surface antigen of Eimeria may be a promising method to enhance immunogenicity of DNA vaccines in poultry. 相似文献
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185.
低氧提高肿瘤细胞反义VEGF165基因表达 总被引:3,自引:0,他引:3
为了探讨反义VEGF1 65基因对食管癌的抑制作用 ,并初步探讨利用肿瘤低氧微环境改善基因治疗的效果 ,采用PCR技术和DNA重组技术构建了含低氧反应元件的真核表达载体 ,并用此载体构建了含荧光素酶报告基因和反义VEGF1 65基因的重组载体。用脂质体将重组载体导入食管癌细胞 ,体外用化学发光光度计测定低氧对报告基因表达的调节和ELISA法间接测定低氧对反义VEGF基因表达的调节作用。体内利用裸鼠皮下移植实验研究低氧对反义VEGF1 65基因抑瘤作用的影响。体外实验表明 ,用带低氧反应元件的重组真核表达载体转染食管癌细胞 ,在低氧培养下可以使报告基因的表达提高 3 780 % ,并可以显著提高反义VEGF1 65基因的表达 ,体内用带低氧反应元件的载体将反义VEGF1 65基因导入食管癌细胞中 ,其抑瘤效果显著优于不含该元件的载体 ,抑瘤率分别为 71 .7%和 5 6 .1 %。反义VEGF1 65基因能显著抑制食管癌的生长 ;利用肿瘤低氧可以实现治疗基因的自主调节 ,改善基因治疗的效果 相似文献
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