Effect of propeptide amino acid substitution in γ‐carboxylation,activity and expression of recombinant human coagulation factor IX

The production of recombinant vitamin K dependent (VKD) proteins for therapeutic purposes is an important challenge in the pharmaceutical industry. These proteins are primarily synthesized as precursor molecules and contain pre–propeptide sequences. The propeptide is connected to γ‐carboxylase enzyme through the γ‐carboxylase recognition site for the direct γ‐carboxylation of VKD proteins that has a significant impact on their biological activity. Propeptides have different attitudes toward γ‐carboxylase and certain amino acids in propeptide sequences are responsible for the differences in γ‐carboxylase affinity. By aiming to replace amino acids in hFIX propeptide domain based on the prothrombin propeptide, pMT‐hFIX‐M14 expression cassette, containing cDNA of hFIX with substituted ?14 residues (Asp to Ala) was made. After transfection of Drosophila S2 cells, expression of the active hFIX was analyzed by performing ELISA and coagulation test. A 1.4‐fold increase in the mutant recombinant hFIX expression level was observed in comparison with that of a native recombinant hFIX. The enhanced hFIX activity and specific activity of the hFIXD‐14A (2.2 and 1.6 times, respectively) were further confirmed by comparing coagulation activity levels of substituted and native hFIX. Enrichment for functional, fully γ‐carboxylated hFIX species via barium citrate adsorption demonstrated 2‐fold enhanced recovery in the S2‐expressing hFIXD‐14A relative to that expressed native hFIX. These results show that changing ?14 residues leads to a decrease in the binding affinity to substrate, increase in γ‐carboxylation and activity of recombinant hFIX. © 2017 American Institute of Chemical Engineers Biotechnol. Prog., 34:515–520, 2018     

正痘病毒属成员血凝素分子的结构及分子进化途径的分析

利用DNA聚合酶链式反应(PCR)及其它分子生物学技术克隆了23株包括所有正痘病毒属成员在内的病毒血凝素(HA)基因.核苷酸序列分析及结构与功能的研究发现HA分子具有与细胞粘着分子超家族成员(CAM)相似的结构,其生物学功能主要与结构中的IgG结构域和广泛的O型糖基化结构有关.另外,以HA分子基因的核苷酸和其氨基酸序列为比较指标,首次在基因水平对正痘病毒的起源和进化途径以及病毒间的抗原相关性等进行了分析.基因的分子进化树和蛋白质系统分类树的演段揭示了病毒在宿主选择压力作用下的自然进化途径及相互间的亲缘关系,为进一步阐明正痘病毒的进化过程和控制与预防该类病毒性疾病的流行提供了有价值的依据.     

平滑肌肌球蛋白磷酸化与肌动球蛋白功能调节

在有Ｃａ２＋和钙调蛋白存在时,肌球蛋白轻链激酶催化肌球蛋白磷酸化,促使肌动蛋白激活的肌球蛋白（肌动球蛋白）Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性显著增加．然而,肌球蛋白磷酸化水平与Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶之间的关系是非线性的,原肌球蛋白可以进一步增加Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的活性,但仍不改变它们之间的非线性关系．肌球蛋白轻链激酶的合成肽抑制剂抑制了肌球蛋白磷酸化和Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性,并导致平滑肌去膜肌纤维的等长收缩张力与速度的降低．结果提示肌球蛋白轻链激酶参与脊椎动物平滑肌收缩的调节过程,肌球蛋白轻链磷酸化作用会引起平滑肌收缩     

眼镜王蛇神经毒素CM—11核磁共振氢谱谱峰的完全归属

眼镜王蛇抽提物ＣＭ－１１为含７２个残基的长链神经毒素,对其进行了ＤＱＦ－ＣＯＳＹ,ＴＯＣＳＹ和ＮＯＥＳＹ等一系列２Ｄ－ＮＭＲ谱测定,借助序列专一归属法完成了ＣＭ－１１ＮＭＲ氢谱的完整归属。     

尝试利用R—Q对应因子分析识别分群融合子代

在特定融合组合的子代群体中,以不同姊妹菌株作为观察样本(n=N),以蛋白质电泳全部谱带泳动率作为指标(p=P),则所对应的谱带光密度扫描峰面积作为其观测值(X)(当某菌株缺乏某条带时,其峰面积记为零),利用R-Q对应因子分析程序,解析这个数据矩阵(X_(nxp))。能够在同一标度的因子平面上考察这一特定融合重组事件发生后,姊妹菌株间和各菌株肉蛋白质谱带位置与含量间以及它们相互之间的多重内在联系,从而推断子代群体与亲本的遗传继承关系。并由此来识别和分群姊妹菌株。这种探索具有拓展数值分类能力和指导融合育种实践的意义。     

大鼠睾丸金属结合蛋白含量对睾酮合成速率的影响

通过观察具有不同睾丸金属结合蛋白（ｔｅｓｔｉｓｍｅｔａｌｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＴＭＢＰ）含量的对照和缺锌后补锌大鼠安静时和力竭性游泳后不同时间睾丸和血清睾酮和锌含量变化,以探讨ＴＭＢＰ含量对睾酮合成速率的影响．实验结果证实了如下推测：ＴＭＢＰ含量不同,睾酮合成的速率也不同,高起始含量ＴＭＢＰ的状况下,睾丸睾酮的合成加快．这一结果提示：ＴＭＢＰ可能参与睾酮的合成．     

植物离子通道特征、功能、调节与分子生物学

本文对植物离子通道的特征、生理功能、影响通道启闭的因素和通道分子生物学研究的新进展作了较为系统的综述     

酶放大镧系元素发光法测定碱性磷酸酶

报告了应用酶放大镧系元素发光法测定碱性磷酸酶的方法.应用5-氟水杨酸磷酸酯作为酶底物,并对方法学中的多种因素进行了最佳比.用甲基硅油(I)改进了信/噪比的稳定性.方法的灵敏度为4 U/L.精密度为10%.精密度为10%的浓度范围是2.00～3.00×10² U/L.测量值的相对误差＜10%.测定了血清中的碱性磷酸酶浓度,回收率为93%～95%.     

酵母系统表达TPO与E.coli表达TPO N端结构域生物半衰期比较

为了探讨血小板生成素（ＴＰＯ）糖基化与其生物半衰期的关系,首先纯化了巴氏毕赤酵母系统分泌表达的人ＴＰＯ成熟肽和大肠杆菌表达的人ＴＰＯＮ端结构域蛋白．纯化产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定和活性分析后,两种蛋白以相同浓度或相同活性单位给Ｗｉｓｔｅｒ大鼠尾静脉注射,利用酶联免疫分析（ＥＬＩＳＡ）和ＴＦ１细胞测定不同时间点实验动物血浆中ＴＰＯ浓度或生物学活性,求出两种ＴＰＯ的生物半衰期（ｔ１／２）值．结果显示,以相同浓度和相同活性单位给药,ＴＰＯ成熟肽的ｔ１／２均比其Ｎ端结构域的长,前者分别是后者的１．６５倍和１．２７倍．     

国产打碗花属植物种子形态及其分类学意义

本文借助于又目解剖镜和扫描电电镜对我国打碗花属５种植物的种子进行了观察。结果表明：１、该属植物的种子可分为两类,一类为旋花型,较小,表面具疣状突起,种皮纹饰呈网状,包括打碗花、毛打碗花及旋花;另一类为藤水苗型较大,无疣状突起,种皮纹饰呈咀烂状,包括藤长苗和肾叶打碗花。２、疠状突起由数个相邻种皮细胞胞间壁强烈突出而成,呈山峰状,相连或单独存在。３、该属植物种子形态存在明显区别,可作为分种的依据。