全文获取类型
收费全文 | 2631篇 |
免费 | 376篇 |
国内免费 | 1606篇 |
出版年
2024年 | 29篇 |
2023年 | 102篇 |
2022年 | 158篇 |
2021年 | 145篇 |
2020年 | 144篇 |
2019年 | 163篇 |
2018年 | 118篇 |
2017年 | 107篇 |
2016年 | 124篇 |
2015年 | 177篇 |
2014年 | 224篇 |
2013年 | 164篇 |
2012年 | 280篇 |
2011年 | 314篇 |
2010年 | 236篇 |
2009年 | 263篇 |
2008年 | 269篇 |
2007年 | 274篇 |
2006年 | 232篇 |
2005年 | 233篇 |
2004年 | 144篇 |
2003年 | 119篇 |
2002年 | 127篇 |
2001年 | 116篇 |
2000年 | 89篇 |
1999年 | 54篇 |
1998年 | 30篇 |
1997年 | 23篇 |
1996年 | 27篇 |
1995年 | 17篇 |
1994年 | 20篇 |
1993年 | 6篇 |
1992年 | 9篇 |
1991年 | 5篇 |
1990年 | 4篇 |
1989年 | 5篇 |
1988年 | 5篇 |
1987年 | 16篇 |
1986年 | 12篇 |
1985年 | 7篇 |
1984年 | 6篇 |
1983年 | 4篇 |
1982年 | 5篇 |
1981年 | 4篇 |
1980年 | 1篇 |
1979年 | 1篇 |
1957年 | 1篇 |
排序方式: 共有4613条查询结果,搜索用时 171 毫秒
991.
快速提取肠道微生物基因组DNA的方法 总被引:8,自引:0,他引:8
目的:肠道微生物的研究日益成为热点,如何获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA是肠道微生物研究中的关键。本文通过对酚/氯仿法提取总DNA过程进行考察和优化,建立一种简便酚/氯仿抽提法。方法:考察和优化酚/氯仿法提取总DNA的过程,并根据DNA产量、纯度以及ERIC-PCR及16S rNDA-RFLP所反映的微生物群落结构特性的指标,并与QIAamp?DNA Stool Mini Kit提取的进行比较,评价了所建立的快速提取方法。结果:用简便酚/氯仿法得到基本完整的基因组DNA,ERIC-PCR和16S rDNA-RFLP结果与QIAamp?DNA Stool Mini Kit法基本相同。结论:该方法快速并成本低,适合肠道微生物研究中总DNA提取,尤其适合处理大批量的样品。 相似文献
992.
目的:用介入法行球囊堵闭猪冠状动脉左前降支(LAD)建立急性心肌梗死再灌注动物模型并评价其效果。方法:选用小型雄性家猪11只。麻醉后经股动脉或颈总动脉置入经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)球囊至冠状动脉LAD远端,堵闭血流60 min。术中持续静脉滴注胺碘酮。60min后负压撤除球囊及鞘管。行超声心动图、磁共振成像(MRI)评价心肌梗死模型建立情况,并行病理分析。结果:2只猪死于心肌梗死模型制备,存活的9只猪经超声心动图、MRI检测显示梗死部位均为左心室前壁、心尖区,部分模型累及室间隔,左室下壁,并有室壁瘤、室速等心肌梗死常见并发症的发生。结论:运用介入法经PTCA球囊LAD可成功建立猪急性心肌梗死模型。这种模型重复性强,可控性好,模型的梗死部位基本一致,易于术后评价。 相似文献
993.
994.
双氢青蒿素对人白血病细胞K562增殖及凋亡的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究双氢青蒿素对人白血病细胞增殖及凋亡的作用,探讨其对白血病的作用机制,为进一步研究提供依据。方法:体外培养K562细胞,用细胞计数法绘制生长曲线;流式细胞仪及荧光显微镜检测药物作用前后细胞凋亡作用;Western-blot测定药物作用前后线粒体、细胞浆细胞色素c的表达。结果:双氢青蒿素的浓度为1×10~(-4),1×10~(-5),1×10~(-6)l/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;流式细胞仪检测出凋亡峰;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显的核浓缩、凝集等细胞凋亡表现;Western-blot检测1×10~(-5)mol/L药物处理细胞后线粒体细胞色素c表达水平下调1,细胞浆出现明显细胞色素c蛋白奈带。结论:双氢青蒿素能显著抑制人白血病细胞K562的生长,并诱导其凋亡,可能与线粒体途径有关。 相似文献
995.
目的:观察海水淹溺后家兔肺泡巨噬细胞内TNF-αmRNA的动态表达规律,并探讨地塞米松干预对TNF-αmRNA表达的影响。方法:采用气管切开插入塑料导管、向气管内灌海水4ml/kg,双肺自主通气的方法模拟海水淹溺造成急性肺损伤模型。于淹溺后0min、30min、60min、90min、120min五个观察时间点进行血气分析,并采集肺组织,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺泡巨噬细胞中TNF-αmRNA的表达。结果:海水淹溺兔急性肺损伤各时相点肺组织中性粒细胞大量浸润,淹溺后TNFα-mRNA表达显著增高,90分钟后达最高峰,而地塞米松可使之降低(P<0.01)。结论:海水淹溺急性肺损伤可能与肺泡巨噬细胞内TNF-αmRNA高表达有关。地塞米松可降低TNF-αmRNA的高表达,减轻肺损伤程度。 相似文献
996.
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)能提高II型糖尿病患者β胰腺细胞的胰岛素分泌量并能促进β胰腺细胞增殖,是潜在的糖尿病治疗药物。设计一种GLP-1类似物AGGH,即GLP-1(A2G)的二联体与人血清白蛋白(HSA)的N端连接,并在融合蛋白GGH前添加一个丙氨酸(A)。PCR获得融合基因aggh,将融合基因连接到p GAPZαA质粒中。在酵母中利用甘油醛三磷酸脱氢酶(GAP)启动子组成型表达外源蛋白AGGH。研究结果显示:筛选获得表达重组菌株,基因组PCR和western-blot验证正确;以葡萄糖为最优碳源培养下,表达量达到68 mg/L;5 L发酵罐中,发酵52 h蛋白产量最高达238 mg/L。蛋白经四步纯化后,获得纯度为95.8%的AGGH融合蛋白。与利用醇氧化酶1(AOX1)启动子表达的AGGH比较,发现两者产量和活性没有明显差异。但是,GAP启动子表达获得AGGH融合蛋白更加方便,且发酵时间减少了27.8%(20 h)。 相似文献
997.
利用能源植物治理土壤重金属污染 总被引:7,自引:0,他引:7
随着工农业的发展,土壤重金属污染日益加剧,严重威胁着粮食生产和人类健康。植物修复因其成本低、环境友好以及可大规模原位修复等优点备受关注,成为近年来迅速发展的重金属污染土壤治理技术。在介绍国内外植物修复技术发展与应用现状的基础上,提倡大力发展能源植物修复重金属污染土地,并结合湖南重金属污染田间试验结果,重点对甜高粱(Sorghum bicolor(Linn.)Moench)用于重金属污染土壤修复的优势、可行性及提高修复效率的措施进行了深入分析与探讨。利用甜高粱治理土壤重金属污染,能将土壤修复与生物能源生产有机结合,使重金属从粮食链转入能源链,同时兼顾了生态和经济效益,具有广阔的应用前景。 相似文献
998.
比较了几种常规粗多糖提取法与超临界CO2提取法对灰树花粗多糖提取的差异,同时对灰树花粗多糖进行脱蛋白、脱色研究。试验结果表明:热水浸提法所得灰树花粗多糖得率最高,为28.1%,而超临界CO2提取法所得粗多糖纯度最高,为39.3%。聚酰胺法脱蛋白及脱色效果较好,蛋白脱除率及脱色率分别为69.9%、61.9%,且多糖吸附率较低。将超临界CO2法提取的灰树花粗多糖采用聚酰胺法脱蛋白及脱色后,多糖得率为79.3%,纯度为50.1%。因此聚酰胺法是分离纯化灰树花粗多糖的一种简便、高效的方法。 相似文献
999.
目的:探讨术前参观对择期进行心脏介入术患者心理焦虑的影响。方法:将400例择期行心脏介入手术的患者分为参观组和对照组,对照组术前采用常规护理干预,参观组患者在此基础上进行术前参观,熟悉环境,了解手术过程。调查比较两组患者术前2日及术前1小时的焦虑值。结果:参观组与对照组术前2日焦虑值无明显差异,术前1小时参观组焦虑值明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:通过术前参观能够减轻患者的焦虑程度。 相似文献
1000.
目的优化甲醛对灭活丙型副伤寒沙门菌原液的条件,确定灭活工艺参数。方法在37℃条件下,比较不同甲醛浓度、灭活时间对丙型副伤寒沙门菌原液的灭活效果,依据无菌检查、外观以及效价测定的结果,确定丙型副伤寒沙门菌原液的灭活工艺参数,并对该工艺进行细菌灭活验证。结果不同菌株制成的丙型副伤寒沙门菌液,当稀释至一定浓度(<1 000×108cfu/m L)后,采用终体积分数为1%的甲醛溶液,经37℃灭活48 h,可达到完全灭菌的效果,同时维持了抗原的稳定性。结论经过条件优化,确定了丙型副伤寒沙门菌灭活的工艺参数,完善了关键技术。 相似文献