Cloning and characterization of a mouse liver-specific gene mfrep-1, upregulated in liver regeneration

Human fibrinogen-related protein-1/liver fibrinogen-related protein-1 (HFREP-1/LFIRE-1), a liver-specificprotein, is a member of fibrinogen superfamily that exerts various biological activities. However, the func-tion of HFREP-1/LFIRE-1 in liver remains unknown. Here we isolated its mouse ortholog gene-mousefibrinogen-related protein-1 (mfrep-1), which encoded 314 amino acids, exhibiting 80.4% similarity toHFREP-1/LFIRE-1. Northern blot analysis revealed that 1.2-kb mfrep-1 mRNA was detected selectivelyin mouse liver. To explore the function of MFREP-1, we examined the levels of mfrep-1 mRNA duringregeneration after 70% partial hepatectomy (PHx) in mice. mfrep-1 mRNA increased in the regeneratingliver and reached the first shoulder peak at 2-4 h after PHx. Cycloheximide pretreatment could suppress theinduction of mfrep-1, indicating the up-regulation of this gene need de novo protein synthesis. Its mRNAcontinued to elevate at 6 h thereafter and reached the second peak at 24 h. The enhanced expression ofmfrep-1 maintained high until 72 h and then declined slowly to the basal level. Immunohistochemistryassessment confirmed the up-regulated expression of MFREP-1 protein in parenchymal cells during liverregeneration. These data suggested that MFREP-1 might play an important role in liver regeneration andbe involved in the regulation of cell growth.     

猪圆环病毒2型ORF2基因序列分析及真核表达载体的构建

根据ＧｅｎＢａｎｋ中猪圆环病毒２型（ＰＣＶ－２）ＯＲＦ２基因序列,设计一　对引物,应用ＰＣＲ从疑患断奶仔猪多系统消耗综合症（ＰＭＷＳ）的死亡仔猪组织病料中扩增出ＯＲＦ　２全基因（７０２ｂｐ）。将此片段克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ　ｅａｓｙ载体,筛选获得重组质粒ｐＴＯＲＦ２,并对此质　粒中的插入序列进行了测序分析,结果表明本试验克隆的ＯＲＦ２与美国ＰＣＶ－２分离株ＡＦ２６４０３９　的核苷酸及氨基酸序列同源性均达到１００％,与其他ＰＣＶ－２毒株同源性分别为９２．３％～９８．　６％和　９２．３％～９６．６％。重组质粒ｐＴＯＲＦ２经　Ｂａｍ　Ｈ　Ｉ、Ｅｃｏ　Ｒ　Ｖ双酶切,回收ＯＲＦ２基因,转　移入真　核表达载体ｐＳｅｃＴａｇ２／ＨｙｇｒｏＢ的相应酶切位点之间,构建成重组质粒ｐＳｅｃＴａｇＯＲＦ２。此重组表　达载体的构建成功为进一步研究ＯＲＦ２编码蛋白的生物学活性及建立ＰＣＶ诊断试剂盒打下基础。     

IGF—ImRNA在不同年龄鲤表达的差异和LHRH—A对IGF—ImRNA表达的影响

利用RNA酶保护法对7月龄性未成熟幼鲤和2龄性成熟鲤组织胰岛素样生长因子-I（IGF-I）mRNA的表达水平进行测定,结果表明成鱼肝和肾脏组织IGF-ImRNA的丰度显著高于幼鱼,对鲤成鱼和幼鱼腹腔注射促性腺激素释放激素类似物（LHRH-A,D-Ala^6-Pro^9-NEt-LHRH)使血清生长激素（GH）水平和肝组织IGF-ImRNA水平都显著升高,而成鱼生殖腺IGF-ImRNA的丰度比对照组显著增加,研究结果提示鲤在不同发育阶段肝组织IGF-ImRNA的丰度比对照组显著增加,研究结果提示鲤在不同发育阶段肝组织IGF-ImRNA的表达存在差别,其中2龄成鱼大于7月龄幼鱼;LHRH-A可能通过刺激垂体GH的释放间接促进肝组织IGF-ImRNA的表达,亦可能通过某种未知途径刺激生殖腺IGF-ImRNA的表达。     

乙醛对人类神经tau磷酸化的影响

用乙醛对人类神经tau进行醛胺化,通过NCLK(neuronal cdc2-like protein kinase)和［γ-³²P］ATP对其磷酸化.磷酸化的产物经胃蛋白酶降解及HPLC(C-18)分析降解片段,发现醛胺化tau的降解物中有两个新的磷酸化肽段(A4和A6).     

分子疫苗防治老年性痴呆小鼠模型的研究进展

老年斑是老年性痴呆(Alzheimer's disease, AD)的特征性病理改变,β-淀粉样(β-amyloid,Aβ)是其主要成分.将Aβ作为疫苗对动物进行免疫,有明显抑制转基因小鼠脑内Aβ的沉积,清除原有斑块的作用,从而减少异常Aβ沉积对认知功能的损害.疫苗没有引起针对动物自身抗原的免疫反应,对中枢神经系统的正常功能也没有明显损害.     

牛樟芝中一个新型还原型聚酮合酶基因的克隆及表达分析

为了研究牛樟芝中PKS基因与化合物之间的关系,该研究通过对牛樟芝基因组分析获得牛樟芝聚酮合酶基因,以此序列为模板设计含有起始密码子和终止密码子的特异引物并以牛樟芝c DNA为模板克隆获得一个高度还原型PKS(HR-PKS)基因全长,命名为AcPKS2;对AcPKS2基因进行生物信息学分析,并比较该基因在不同培养基上的表达量。结果表明:AcPKS2全长7 842 bp,有24个内含子,其外显子共编码2 613个氨基酸,该蛋白的相对分子质量为293.5 kDa,理论等电点pI为5.78。用CDD分析其结构域显示,该基因属于HR-PKS,其结构域组织排列为KS-AT-DH-MT-ER-KR-ACP-TE,8个结构域其活性位点分别为β-酮基合成酶(DTACSSSL)、酰基转移酶(GHSIGETA)、脱水酶(RNDGSTSPL)、甲基转移酶(SFDIITAFDV)、烯酰还原酶(HAGVSSPAA)、酮基还原酶(GSPGQANYTAA)、酰基转移酶(YGLDSLTSVRL)、硫酯酶(KQPNGPY)。系统发育树显示AcPKS2与其他化合物未知的HR-PKS蛋白聚为一支,结构域和系统进化树分析显示该基因可能编码一种新的含TE结构域高度还原型聚酮合酶;表达分析结果显示葡萄糖和果糖能够诱导该基因的表达。     

苹果多酚通过下调钙敏感受体改善大鼠低氧性肺动脉高压的作用

目的：探究苹果多酚通过下调钙敏感受体（CaSR）表达改善大鼠低氧性肺动脉高压的作用。方法：36只雄性SD大鼠随机分为对照组、低氧诱导组和苹果多酚干预组（n=12）。低氧诱导组和苹果多酚干预组大鼠每天在低氧舱（氧浓度为10%）中间断低氧暴露8 h,对照组在正常环境下饲养,为期四周。建模同时,苹果多酚干预组每日用苹果多酚按200 mg/kg的剂量灌胃,对照组、低氧诱导组用等量生理盐水灌胃,每日1次,共持续四周。建模完成后,检测各组大鼠的肺动脉平均压（mPAP）、肺血管阻力（PVR）、右心室肥厚指数（RVHI）、肺动脉中膜厚度（MT）、WA%、WT%及肺动脉组织中CaSR表达量。结果：低氧暴露组大鼠mPAP、PVR、RVHI、MT、WA%、WT%及肺动脉组织中CaSR表达量均较对照组明显升高（P<0.01）;苹果多酚干预组可改善上述效应。结论：苹果多酚能有效预防大鼠低氧性肺动脉高压,其机制与下调CaSR的表达有关。     

基于PAT的PCV2 VLPs生产过程优化与控制研究

昆虫细胞-杆状病毒载体表达系统(baculovirus expression vector system,BEVS)是病毒样颗粒亚单位疫苗(virus like particles,VLPs)的理想生产平台。动物细胞培养过程分析技术(process analytical technology,PAT)研究的重点在于更多地获取与细胞生理状态相关的过程参数,以及实现过程敏感参数的在线表征和过程控制关键时间节点的在线判定,从而指导过程优化和控制。通过昆虫Sf9细胞的分批和补料悬浮培养,发现细胞代谢活性与在线特征频率(fc)之间存在相关性。以fc作为细胞代谢活性的在线指征,在细胞代谢活性下降之前补料,使得Sf9细胞在代谢活性明显增强的基础上,最高活细胞密度提高1.75倍。通过分批培养与补料分批培养过程细胞生理特性参数的相关性分析,发现比电容增长速率(με)与培养体系S-期细胞比例之间存在相关性,με作为细胞增殖活性状态的在线指征参数,可以作为最佳接毒时间的判定依据。此外,研究还发现在线检测参数电容(ε)与最高疫苗产量之间存在相关性,可以作为疫苗最佳收获时间的在线表征参数。以在线fc值作为补料时间指征,以在线με值作为病毒感染时间指征,以在线ε值作为病毒收获时间指征,实现了猪圆环病毒2型(PCV2)VLPs的高效生产。相比于批培养,基于PAT的生产工艺疫苗单位体积产量提高76%,生产周期缩短了24h,为PCV2病毒样颗粒亚单位疫苗大规模生产提供了一种新的高效生产模式。     

中山杉及其父母本幼苗对干旱胁迫和复水的响应

本文研究了落羽杉和墨杉及其杂交后代中山杉302(落羽杉♀×墨杉♂)、中山杉407(墨杉♀×落羽杉♂)、回交代中山杉118(中山杉302♀×墨杉♂)在自然干旱胁迫和复水过程中,光合特征、抗氧化酶系统和形态特性等的响应.结果表明:随干旱时间的延长,所有植株的净光合速率逐渐降低、脯氨酸开始积累且抗氧化酶系统逐渐清除丙二醛的毒性.胁迫至第8天,落羽杉净光合速率的下降幅度最大,而中山杉118的水分利用效率最高、丙二醛含量最少;墨杉的超氧化物歧化酶活性和脯氨酸含量增长最大.复水2 d后,所有植物的参数均有不同程度的恢复,其中,中山杉118恢复速率最快,其净光合速率和脯氨酸含量分别恢复了74.4%和60.2%.复水9 d后,所有植株的测定指标基本恢复至或接近正常水平,其中,中山杉118的生物量未受影响且根冠比显著增加.植物的耐旱能力依次为墨杉>中山杉118>中山杉407>中山杉302>落羽杉.回交品种中山杉118的杂种优势明显,较大程度地遗传了墨杉的耐旱性,该结论可为耐旱中山杉品种的杂交选育和推广应用提供科学依据.     

Ultrastructure of the Vegetative Cells of Nostoc flagelliforme Prepared with High Pressure Freezing and Freeze Substitution Technique

The ultrastructure of the vegetative cells of Nostoc fiagelliforme Born. et Flah. was investigated with high pressure freezing and freeze substitution technique and compared with the results obtained by using conventional preparation methods. During the processes of chemical fixation, dehydration and embedding, the cell structures might be more artificially modified than that obtained from high pressure freezing and freeze substitution. With the present method, the sheath of N. fiageUiforme could be well-penetrated and no extra big space could exist between the cell and the sheath. The cell protoplasm rarely shrinked. Some fine structures of cell inclusions and unit membranes became visualized. Many bacteria were harbored in the sheath. In addition, the presence of big vacuoles in the cell of N. fiageUiforme as well as the presence of bacteria in the sheath shown in the present preparation for cyanobacteria has not been described so far in the literature.