一株多重耐药鳗源肺炎克雷伯菌的分离鉴定

从患病花鳗鲡(Anguilla marmorata)的肝脏分离纯化到一株革兰氏阴性杆菌HM2。人工感染试验结果显示, HM2具有较强的致病力, 96h的LD50为9.98107 CFU/mL。经细菌培养特性、生理生化特性和ATB Expression半自动细菌鉴定仪鉴定, 结果符合肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的特征。以细菌16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增, 获得大小为1393 bp的部分16S rRNA基因序列(Genbank登录号为JX282908), 将所测序列与GenBank中的序列进行BLAST比对并构建系统进化树, 结果表明其与肺炎克雷伯菌的同源性最高(100%), 在系统发育树上与肺炎克雷伯菌聚为一簇, 进一步确定菌株HM2为肺炎克雷伯菌。药物敏感性试验显示, HM2对亚胺培南、链霉素、阿米卡星3种药物敏感, 对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩、头孢曲松、头孢噻肟、头孢西丁、复合磺胺、磺胺甲基异恶唑/甲氧苄啶、利福平、萘啶酸、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、呋喃妥因、四环素、多西环素、氯霉素17种药物具有耐药性。研究结果为指导临床合理用药提供了科学依据。       

闽南-台湾浅滩渔场二长棘鲷群体集群行为宏观量化与分析

根据1998年7月到2000年6月闽南-台湾浅滩渔场开展二长棘鲷资源的专项调查资料, 计算出闽南-台湾浅滩渔场二长棘鲷的各月E值, 定量分析其集群行为变化规律。结果表明: 闽南-台湾浅滩二长棘鲷全年月平均E为7.4409108J, 生殖期间12月到翌年3月, 其月平均E 2.4949108J, 是全年月平均E的0.34倍, 鱼群集中; 4-5月, 幼鱼大量出现, 月平均E为4.556108J, 是全年月平均 的0.61倍, 鱼群相对集中; 主要索饵季节6-8月, 月平均E为1.3448109J, 是全年月平均 的1.81倍, 鱼群分散; 9-11月, E分别为1.435109、9.7409108、5.769108J, 分别是全年月平均 的1.93、1.31、0.78倍, 鱼群为适应水温和寻找产卵场, 在外移过程中逐渐集中。可见, 闽南-台湾浅滩二长棘鲷的生殖群体集群性最强, 其次是幼鱼群体、以适应水温和寻找产卵场为目的的群体, 而索饵群体分散。       

古尼拟青霉和蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体挥发性成分的分析与比较

对蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali和古尼拟青霉P. gunnii菌丝体的挥发性成分进行了研究,采用同时蒸馏萃取法分别提取两种菌丝体中的挥发性成分,经GC-MS联用仪对挥发性成分进行分离鉴定,分别分析出25种和32种挥发性成分。在蝙蝠蛾拟青霉菌丝体挥发性成分中2,6-二叔丁基对甲酚和1,5-二氢-1-甲基-2H-吡咯-2-酮相对含量较高,分别占65.78%和12.77%;在古尼拟青霉菌丝体中挥发性成分2,6-二叔丁基对甲酚和(E,E)-2,4-癸二烯醛相对含量较高,分别占62.11%和12.32%。两种菌丝粉共有8种共有成分,分别占蝙蝠蛾拟青霉挥发性成分的71.58%,古尼拟青霉挥发性成分的69.67%;由此可见蝙蝠蛾拟青霉和古尼拟青霉菌丝体主要挥发性物质的成分是相同的。通过对蝙蝠蛾拟青霉和古尼拟青霉挥发性成分的研究,为我们进一步了解这两种真菌菌丝体的药理作用提供了实验依据。     

On the Methods and Principles of MolecularIdentification of Chinese Herbs

Accurate identification of herbal medicinal materials is relevant to the safety of human life and economic interests. Traditional identification methods, including sensory evaluation, microscopic identification, physical and chemical identification, all have their limitations. Molecular identification brings a new opportunity for accurate identification of herbal medicinal materials. However, prior to its wide adoption, the methods and principles of molecular identification should be fully discussed. In this paper, we proposed a set of new methods for molecular authentication of herbal medicinal materials: 1) Identification between authenticity and adulteration by using specific polymerase chain reaction; 2) Identification between official herb and substitute by using the method of DNA barcoding; 3) Identification among multiple species of one official herbs by constructing genealogy among closely related species based on population genetics; 4) Identification among herbs of different geographical origins by phylogeography based analysis. For those that can not be identified by above four methods, more rapidly evolved markers such as microsatellite should be employed and individual based analysis could be adopted.     

芒和五节芒在中国的潜在分布

利用最大熵模型, 将我国现有芒(Miscanthus sinensis)和五节芒(M. floridulus)的地理分布信息与19个降水及温度等气候因子相拟合, 预测了芒和五节芒在我国的潜在分布区域, 并推测出芒和五节芒的基本生态位。结果显示: 芒的潜在适生区包括四川西部、陕西北部、宁夏、内蒙古中部、黑龙江、吉林西部、辽宁西部、青海东南部等地区, 其基本生态位参数为: 最暖季节降水量为400-1 000 mm, 平均8月降水量为100-350 mm, 7月平均最低气温为15 ℃, 平均7月降水量为100-350 mm, 11月平均最高气温为-10-22 ℃, 最干月平均气温为-15-20 ℃, 平均12月降水量为100 mm以下; 五节芒的潜在适生区为云南、陕西、山西、宁夏、河南、山东、吉林、辽宁以及四川西部、甘肃南部和内蒙古东部等地区, 其基本生态位参数为: 最暖季节降水量至少在400 mm以上, 平均6月降水量为150-550 mm, 7月平均最低气温在15-30 ℃之间, 6月平均最低气温为10 ℃, 平均4月降水量为50-100 mm。结果表明, 在进行遗传改良的前提下, 我国有丰富的适合栽植芒和五节芒的土地资源。     

不同提取溶剂和方法组合从落叶松毛虫蛹中提取的脂肪酸成分和含量的比较

落叶松毛虫Dendrolimus superans (Butler)蛹个体较大, 具有很高利用价值。为明确东北落叶松毛虫蛹中脂肪酸成分, 探讨最佳提取溶剂和提取方法的组合, 分别以正己烷、 石油醚和乙醚为提取溶剂, 结合超声波振荡萃取法、 索氏萃取法及溶剂萃取方法热浸和冷浸4种提取方法提取落叶松毛虫蛹油, 并采用毛细管色谱-质谱法分析提取物的脂肪酸种类和相对含量。结果表明： 正己烷溶剂与4种提取方法的组合中, 溶剂萃取热浸法提取率最高, 为25.60%。索氏萃取及溶剂萃取方法热浸和冷浸均检测到10种脂肪酸, 正己烷-超声波振荡萃取组合检测到9种脂肪酸。石油醚溶剂与4种提取方法的组合中, 索氏萃取提取率最高, 为29.31%, 均检测到10种脂肪酸。乙醚溶剂与4种提取方法的组合中, 溶剂萃取冷浸法提取率最高, 为29.11%, 检测到的脂肪酸种类为溶剂萃取冷浸法（13种）＞索氏萃取法（12种）＞溶剂萃取热浸法（11种）＞超声波振荡萃取法（9种）。在检测到的总脂肪酸中, 63%以上为不饱和脂肪酸, 其含量受提取溶剂和方法的影响不大。因此, 适合东北落叶松毛虫蛹中脂肪酸提取的最佳组合为石油醚溶剂 索氏萃取法。     

企鹅珍珠贝不同地理群体遗传多样性的fAFLP 分析

为阐明企鹅珍珠贝(Pteria penguin)不同地理种群的遗传多样性机制, 采用荧光标记扩增片段长度多态性(fAFLP)技术分析了企鹅珍珠贝广西涠洲岛、广东流沙湾和海南黎安3 个不同地理群体的遗传多样性。选取7 对引物组合对90 个个体(每个群体30 个)进行fAFLP 扩增, 结果发现每个个体均能扩增出清晰的、可重复的扩增条带, 每对引物的扩增位点数在100—163 之间, 共得到895 个扩增位点, 多态位点数为865 个; 涠洲岛、流沙湾和黎安群体的多态位点比例分别为70.73%、63.13%、66.82%。Nei 遗传多样性指数为0.1634、0.1558、0.1783, Shannon 遗传多样性指数为0.2635、0.2474、0.2932。3 个群体间遗传相似度在0.9722—0.9824之间, 遗传距离在0.0177—0.0282 之间。根据遗传距离绘制UPGMA 聚类图, 但Mantel 检验结果显示企鹅珍珠贝三群体间的遗传距离与地理距离之间无显著相关。Shannon 遗传多样性指数和AMOVA 分析, 结果均显示企鹅珍珠贝的遗传变异主要来源于群体内个体间, 7.91%的遗传变异来自群体间, 92.09%的遗传变异来自群体内。分析群体的显性基因型频率分布和基因流Nm 发现3 个群体有基本相同的遗传结构, 有明显的基因交流。研究结果表明北海涠洲岛群体、湛江流沙湾群体和海南黎安群体的企鹅珍珠贝种质有较高的多态位点比例, 但未发生显著地理分化。这一结果为我国企鹅珍珠贝的良种选育以及种质资源保护措施的制定提供了参考依据。       

兴义维蚋多线染色体研究（英文）

首次在国内对兴义维蚋Simulium (Wilhelmia) xingyiense的多线染色体进行研究, 并提供其多线染色体标准图。选取兴义维蚋的成熟幼虫, 用改良苯酚品红染色法进行唾腺多线染色体制备, 并进行测量、 描述及分析。结果表明： 兴义维蚋多线染色体数目为3对（2n=6）。Ⅰ号染色体具中央着丝粒, Ⅱ和Ⅲ号染色体均为亚中央着丝粒染色体。核仁组织者区位于Ⅰ号染色体短臂近着丝粒端。巴尔比尼氏环和双泡位于Ⅱ号染色体短臂近中央位置。3对染色体的着丝粒区可形成明显的染色中心。兴义维蚋多线染色体具有多态性的倒位, 倒位频率为0.64。兴义维蚋多线染色体的着丝粒、 核仁组织区、 巴氏环、 双泡等主要特征性结构的位置及形态恒定一致,可作为该种的重要鉴别特征。其多态性的倒位可为该蚋种在细胞水平上进行蚋类分类鉴别和系统发育等研究提供基础资料。     

中华蜜蜂Malvolio基因 Acmvl 的克隆及组织表达分析

【目的】本研究克隆了中华蜜蜂Apis cerana cerana Malvolio (Mvl)基因的cDNA序列,分析了其编码蛋白的结构特点,并探讨其mRNA在内勤蜂、采蜜蜂和采粉蜂各部位组织中的表达差异,以期为该基因的生物学功能研究提供参考。【方法】利用RT-PCR技术从中华蜜蜂内勤蜂头部组织中扩增和克隆获得Acmvl的全长序列,并采用多种生物信息学软件分析Acmvl蛋白的结构特征;采用Real-time PCR对中华蜜蜂Acmvl在内勤蜂、采蜜蜂和采粉蜂各组织中的表达特征进行分析。【结果】Acmvl基因cDNA全长为2 130 bp（GenBank登录号：KP662686）,编码587个氨基酸,预测该蛋白分子量为65.86 kD,等电点为6.03,无信号肽,存在11个跨膜结构域、9个糖基化位点和14个潜在磷酸化位点;系统发育树分析结果显示,中华蜜蜂Acmvl与其他膜翅目昆虫Malvolio聚为一支,与小鼠Mus musculus和人Homo sapiens Nramp家族的Nramp2聚为另一大分支,且与小鼠、水稻 Oryza sativa 、黑腹果蝇 Drosophila melanogaster 和酵母Saccharomyces cerevisiae的Nramp家族同源体在跨膜区、跨膜区带电残基及转运蛋白特征结构域上有很高的保守性,尤其是与Nramp2。Acmvl 基因在中华蜜蜂各部位组织中均有表达,但高表达于内勤蜂的胸部及采蜜蜂和采粉蜂的腹部和足部,提示该基因表达的差异影响采集行为。【结论】Acmvl 属于Nramp基因家族,可能为Nramp2的同源基因,该基因影响采集行为可能与转运Cu²⁺, Mn²⁺和Fe²⁺（尤其是Fe²⁺）有关。     

葡萄糖、维生素C对普安银鲫卵黄囊仔鱼发育中LPL和HL活性的影响

通过设置不同浓度的葡萄糖溶液和维生素C溶液分别添加到普安银鲫的孵化水体中, 直至卵黄囊消失完全, 探究葡萄糖和维生素C溶液分别浸泡对普安银鲫(Carassius auratus gibelio)卵黄囊仔鱼发育中脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)活性的影响. 葡萄糖浓度为0、5、10、15和20 g/L; 维生素C浓度为0、20、25、30和35 mg/L, 记录孵化时间、孵化率及仔鱼成活率, 并测定了最适葡萄糖浓度组、维生素C浓度组与对照组中普安银鲫卵黄囊仔鱼发育中LPL和HL活性. 结果显示: 普安银鲫卵黄囊仔鱼发育中对照组与维生素C组LPL比活力与全活力呈下降-上升的变化趋势, HL比活力与全活力均呈上升趋势. 葡萄糖组LPL和HL比活力与全活力呈上升趋势, 在混合营养期与外源营养期, LPL和HL比活力与全活力显著高于对照组(P0.05), 而维生素C组LPL和HL比活力与全活力仅稍高于对照组, 但HL全活力在内源营养期显著高于对照组(P0.05). 研究表明: 适宜水平的葡萄糖溶液可通过调节脂类代谢酶的活性来维持机体内脂质代谢的动态平衡, 同时适宜水平的维生素C溶液能促进脂质代谢.