编码山羊补体C3d与口蹄疫病毒VP1融合蛋白重组质粒的构建及表达

旨在构建含分子佐剂山羊补体C3d基因的O型口蹄疫病毒VP1基因真核表达质粒。克隆山羊C3d基因, 通过linker(G4S)2将3拷贝C3d基因串联; 克隆羊源O型口蹄疫病毒VP1基因, 通过linker(G4S)2与3拷贝C3d基因相连, 构建重组质粒pUC19-VP1-C3d3。将VP1-C3d3融合基因亚克隆入含有分泌表达信号肽tPA序列的pcDNA3.1(+)CMV启动子下游, 构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d3。在脂质体介导下, 将pcDNA3.1-tPA -VP1-C3d3转染HeLa细胞。间接免疫荧光分析表明, VP1- C3d3在HeLa细胞中获得了瞬时表达, Western blot分析证实转染的阳性细胞能分泌预期大小(133 kD)的融合蛋白。重组质粒pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d3为研制以羊补体C3d为分子佐剂的口蹄疫新型疫苗奠定了基础。     

羊奶果根瘤侵入线和被侵染细胞的亚显微结构

羊奶果根瘤的侵入线,总是在几个相邻细胞的细胞间隙中出现。在根瘤发生部位未出现根毛的变形。侵入线似一囊状物,其内含物有丝状物和基质,侵入线的壁部分或全部加厚,并与周围的寄主细胞壁相连。侵入线呈多种形态,在被侵染细胞中,细胞核膨大,并分叉变成指状核。随着细胞的衰老,被侵染细胞中的内生菌、细胞器也逐渐消失。     

Expression of dha Operon Required for 1,3-PD Formation in Escherichia coli and Saccharomyces cerevisiae

The 1,3-propanediol (1,3-PD) synthesis operon (dha operon) was mainly composed of four genes: dhaB, dhaT, gdrA, and gdrB, which encoded glycerol dehydratase, 1,3-PD oxidoreductase and reactivating factor for glycerol dehydratase, respectively. In the present study, dha operon was cloned from 1,3-PD producing strain Klebsiella pneumoniae. Heterologous expression of cloned dha operon was carried out in Escherichia coli and Saccharomyces cerevisiae W303-1A, respectively. The results indicated that recombinant E. coli harboring the dha operon can produce 8–9 g/l 1,3-PD from glycerol while the 1,3-PD yield of recombinant strain W303-1A-dha could not be detected. In order to complete the 1,3-PD production from glucose, further, we also constructed the recombinant S. cerevisiae W303-1A-BT harboring plasmid pZ-BT. The 1,3-PD production and enzymatic activities of DhaB and DhaT were found in the engineered strain W303-1A-BT. Our results demonstrated that the recombinant S. cerevisiae strain W303-1A-BT that can produce 1,3-PD at low cost was constructed. This study might open a novel way to a safe and cost-efficient method for microbial production of 1,3-PD.     

鬼臼素衍生物Vp—16和Vm—26合成副产物之结构和机理研究

本文报导了以4′-去甲表鬼臼素-4-β-D-葡萄糖甙分别与二甲醇缩乙醛和噻吩甲醛反应合成抗肿瘤药物依托泊甙(Vp-16)和替尼泊甙(Vm-26)中得到的两个主要副产物Vp-x和Vm-x的结构鉴定,并对其反应机理进行了探讨。     

长白山地低山区土壤动物群落特征及其对环境因子变化的响应

为探讨长白山地低山区土壤动物群落特征及其对环境因子变化的响应,分别于2014年春季(5月)、夏季(7月)及秋季(9月)对长白山地低山区的次生针阔叶混交林、次生落叶阔叶林、蒙古栎林和耕地土壤动物进行研究。研究表明,4个生境共获土壤动物58类,30445只,隶属3门6纲22目52科(亚目)。各生境大型、中小型土壤动物具有一定的差异性,且各生境季节变化不同。总体来看,耕地生境土壤动物密度与类群数明显低于其它3个生境,大型土壤动物的密度季节变化较显著,中小型土壤动物的密度和类群数的季节波动均较大。次生落叶阔叶林生境大型、中小型土壤动物群落多样性指数和丰富度指数均高于其它3个生境,耕地最低。中小型土壤动物多样性指数、丰富度指数季节波动较大,春季、夏季与秋季之间差异性较大,大型土壤动物季节波动较小。通过对大型、中小型土壤动物与13种环境因子进行Pearson相关分析可知,大型土壤动物对土壤温度和土壤湿度具有正向响应,其密度、类群数与土壤温度具有显著正相关关系,中小型土壤动物的密度、类群数对土壤湿度具有显著正向响应;土壤动物对pH的响应程度较低,对有机质具有显著正向响应;土壤动物对全效养分N、P、K的响应程度高,大型土壤动物的密度对速效养分N、P、K的响应程度高,中小型土壤动物类群数对速效养分N、P、K的响应程度高,对Ca、Mg的响应程度较低。     

三峡濒危植物疏花水柏枝的回归引种和种群重建

疏花水柏枝分布于三峡库区原海拔70～155m的消落带,三峡工程修建后它将丧失其全部生境而成为濒危植物。实验结果显示其种子在土壤含水量大于10%以上时开始萌发,以土壤含水量达到饱和状况时萌发最好。种子萌发与定居阶段对土壤水分条件的严格要求使得疏花水柏枝分布区十分狭小。回归引种和种群重建是拯救该物种的主要手段。三峡工程修建后库区内新的消落带将形成夏旱冬淹的水节律,完全不同于库区原有消落带所具有的冬旱夏淹的水节律,不适于作为疏花水柏枝种群的迁移地。相比之下库区淹没区以上各支流消落带的生态环境与疏花水柏枝原有生境较为接近,适于作其新的生境。种群遗传多样性、年龄结构、分布格局、繁殖与扩展等生物学特性是种群持续发展的基础,文章以此为依据,对疏花水柏枝种群重建与管理中的相关问题进行了分析讨论。认为疏花水柏枝种群恢复与重建中目前所面临的主要问题是如何增强被隔离的种群间的基因交流、促进种群的种子扩散与萌发、协调新建种群与当地物种的关系、营造有利于新建种群定居与生长的生态环境。重建种群的管理应结合疏花水柏枝的生长发育节律和移栽地的生态环境条件来开展,要有效地监控种群的生长发育动态,合理地在隔离种群间相互引种,适时地进行水分管理,并对周围植被适度控制。     

多微孔胺基树脂的制备及其对胆红素的吸附性能

采用悬浮聚合法制备了一定尺寸的多微孔聚苯乙烯(PS)微球,然后通过Friedel-Crafts反应(用氯乙酰氯替代了有致癌性的氯甲醚)和胺化反应得到新型的胺基树脂,并对反应条件进行了优化。结果表明,利用最优化条件制备的胺基树脂,其离子交换容量为4.1587mmol/g。考察了新型树脂对胆红素的吸附性能,其吸附量最大可达30.85mg/g,吸附率可达80%。     

大规模区带离心纯化Vero细胞乙脑疫苗

本文报道一种适合疫苗生产的大规模纯化Ｖｅｒｏ细胞乙脑疫苗的方法。原疫苗经适当浓缩和去除ＤＮＡ处理后,用不连续蔗糖梯度（３６％和６０％）。３２６００ｇ,速率区带离心４ｈ。纯化后疫苗的效力比中国参考疫苗高出６倍以上,补体结合抗原比中国参考疫苗高４～８倍。总蛋白含量低于３０μｇ／ｍＬ,牛血清含量降至０．５μｇ／ｍＬ以下,细胞残余ＤＮＡ低于１００ｐｇ／０．５ｍＬ。用此法连续制备三批纯化疫苗,其纯度和效力均高于日本鼠脑纯化疫苗。此法对于制备其它纯化Ｖｅｒｏ细胞疫苗也具有一定的参考意义。     

气候变化对呼伦湖湿地及其周边地区生态环境演变的影响

利用呼伦湖湿地的气象资料、水体面积、水位深度和生态环境等资料,回归统计分析表明:(1)呼伦湖湿地近45 a来的气候变化呈现出暖干化趋势,并且是造成水资源短缺和周边地区生态环境恶化等问题的重要原因.(2)呼伦湖水域面积和水位逐渐减小的变化趋势一致.水域面积和水位变化率分别为34.78km2/10a、 0.27m/10a.且1959～1963年、1983～1991年为缓慢的增加(上升)时期,1964～1982年、1992～2006年为逐年减少(下降)时期,21世纪初至今减少(下降)幅度最大.(3)降水量与湖面面积、水位呈正相关,年及四季降水量增加10mm,湖面面积约增加2～19km2.气温和蒸发量与湖面面积、水位相关为显著的负相关,年及四季气温升高1℃,湖面面积约减少28～80km2,水位约下降4cm左右.(4)受显著的暖干化影响,湖周边沙漠化面积已超过100km2;到1997年草场的退化面积占可利用草场总面积的30%以上;1974年以来植被的盖度降低15%～25%,连续干旱的2003～2005年与降水量较多的2002年相比,克氏针茅高度降低11cm,羊草、苔草、多根葱和小针茅降低2～4cm;草地初级生产力下降30%～50%;优良牧草比重下降,严重退化草场的产草量不足原来的20%.     

水稻耐储藏特性三年动态鉴定与QTL分析

种子耐储藏特性是粮食作物的特殊农艺性状之一, 耐储藏性能对种子生产和种质资源保存有重要意义。以粳型超级稻龙稻5 (LD5)和高产籼稻中优早8 (ZYZ8)杂交衍生的重组自交系(RILs)群体(共180个株系)为实验材料, 自然高温高湿条件下放置1年、2年和3年后, 对不同储藏时段种子发芽率进行比较, 并利用223个分子标记的遗传图谱进行动态QTL鉴定。结果表明, 不同储藏时段龙稻5的发芽率均显著低于中优早8, 株系间耐储性存在较大差异; 不同储藏时段发芽率显著相关, 相邻存储时段发芽率关系紧密。共检测到17个耐储性相关的QTLs, 3个老化时段分别检测到5、4和3个, 检测到5个动态条件QTLs, 单一QTL解释5.60%-32.76%的表型变异, 加性效应在-16.78%-16.95%范围内。主效QTL簇qSSC2、qSSC6、qSSC7和qSSC8能调控不同储藏时段的发芽率, qSSC6具有明显降低发芽率的效应。共检测到26对上位性互作位点, 主效QTL qSS1和qSS4参与上位性互作, 这表明上位性互作是调控耐储藏性状的重要遗传组成。研究结果为水稻(Oryza sativa)耐储性相关QTL的精细定位奠定基础, 同时丰富了耐储性分子标记辅助选择育种的基因资源。