链霉菌和大肠杆菌穿梭质粒载体的构建

本文报道了链霉菌和大肠杆菌穿梭质粒载体pSE-3的构建;把具有双启动子的大肠杆菌的质粒pGEM-3与新霉素抗性基因启动子缺失的链霉菌的探针质粒pIJ486分别用BamHI和BglⅡ酶切,T4 DNA连接酶连接后转化到E.coli HB101(Amp(?),Neo(?)),所得重组质粒能强启动pIJ486质粒上的氨基糖苷磷酸转移酶基因(aph),并使新霉素抗性基因在大肠杆菌中得到强表达。此重组质粒被命名为pSE-3,当其转化到变青链霉菌TK54(Tsr(?),Neo(?))的原生质体前,新霉素抗性基因亦能得到强表达。酶切结果表明,构建的具有两个启动子的穿梭质粒载体pSE-3上有HindⅢ和EcoRI的单酶位点,拷贝数约为39。经再转化和传代50代等研究表明,穿梭质粒载体pSE-3在链霉菌和大肠杆菌中均是稳定的。为某些有应用价值的目的基因在大肠杆菌和链霉菌中的克隆与表达提供了一个有价值的穿梭质粒载体。     

大肠杆菌葡萄糖异构酶基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达

本文用穿梭质粒载体pSE-3,进行了大肠杆菌葡萄糖异构酶基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达。把含有1.6kb葡萄糖异构酶基因的pX1200(4.3kb)质粒与pGEM-3(2.9kb)质粒分别用EcoRI酶解,T4DNA连接酶连接,转化E.Coli HB101(Xy1~-,Neo(?)),得到的重组质粒被命名为pX1203(7.2kb);将pX1203与穿梭质粒载体pSE-3分别用HindⅢ酶解,T_4DNA连接酶连接,转化E.Coli HB101,在含有新霉素的木糖培养基上筛选到转化重组体,其重组质粒被命名为pSE×100(10.6kb);把pSE×100转化变铅青链霉菌TK54的原生质体,在硫链丝菌肽(50μg/ml)和新霉素(50μg/ml)的平皿上得到了重组体。经质粒提取,酶切分析,再转化和葡萄糖异构酶活性测定,结果表明,大肠杆菌的葡萄糖异构酶基因确实已在链霉菌中克隆和表达。     

圈卷产色链霉菌分化相关基因——saw1的结构和功能

用双脱氧链终止法进行了分化基因——saw1的双链测序.结果表明在1500bp的DNA片段中有一个完整的开读框架(ORF),其编码区是在419bp至1252bp处.其产物与已知的天蓝色链霉菌whiG的氨基酸序列有89%的同源性.当把1500bp的saw1DNA片段插入到链霉菌表达质粒载体pIJ702后,构建的重组质粒转化天蓝色链霉菌孢子形成缺陷突变株C71,可使C71形成孢子和灰色色素.用基因破坏的策略进一步研究了该基因的生物学功能,结果表明saw1在圈卷产色链霉菌气生菌丝到孢子形成的发育转变中有重要作用,是分化中控制孢子发育起始的一个重要基因.     

Systemic RNAi in western corn rootworm,Diabrotica virgifera virgifera,does not involve transitive pathways

Western corn rootworm (WCR, Diabrotica virgifera virgifera LeConte) is highly sensitive to orally delivered double‐stranded RNA (dsRNA). RNAi in WCR is systemic and spreads throughout the insect body. This raises the question whether transitive RNAi is a mechanism that functions in WCR to amplify the RNAi response via production of secondary siRNA. Secondary siRNA production is achieved through RNA‐dependent RNA polymerase (RdRP) activity in other eukaryotic organisms, but RdRP has not been identified in WCR and any other insects. This study visualized the spread of the RNAi‐mediated knockdown of Dv v‐ATPase C mRNA throughout the WCR gut and other tissues using high‐sensitivity branched DNA in situ hybridization. Furthermore, we did not detect either secondary siRNA production or transitive RNAi in WCR through siRNA sequence profile analysis. Nucleotide mismatched sequences introduced into either the sense or antisense strand of v‐ATPase C dsRNAs were maintained in siRNAs derived from WCR fed with the mismatched dsRNAs in a strand specific manner. The distribution of all siRNAs was restricted to within the original target sequence regions, which may indicate the lack of new dsRNA synthesis leading to production of secondary siRNA. Thus, the systemic spread of RNAi in WCR may be derived from the original dsRNA molecules taken up from the gut lumen. These results indicate that the initial dsRNA dose is important for a lethal systemic RNAi response in WCR and have implications in developing effective dsRNA traits to control WCR and in resistance management to prolong the durability of RNAi trait technology.     

玉蜀黍丝核菌的鉴定特征

在研究四川省玉米纹枯病菌系时,获得23个RhizoctoniazeaeVoorhees菌株。该菌菌丝形态与R.solaniKuhn相似;菌丝细胞含3个以上椭圆形细胞核;隔膜具桶孔,桶孔周围的隔膜肿体（septalswelling）与隔膜板垂直,两端不再膨大外延;菌丝生长较快,在PDA平板26℃下培养,每24小时菌落直径增长33．2～39．1mm;菌丝与苯酚相互作用后,着色较深,呈深褐色。菌核初期为白色或奶油色,成熟后为红褐色;常散生于基质内,少数着生在基质表面和培养皿的内壁上;球形或近球形,直径0.25～1．0mm;结构致密,无菌环和菌髓分化,表面较光滑。223个R.zeae菌株均与Oniki等建立的WaiteacircinataWAG－Z标准菌株发生融合,但与R.solani的融合群标准菌株均无融合反应。R.zeae对玉米的致病性较强,稍弱于玉米纹枯病主菌系R.solaniAG－1－IA,其病斑多半不连续,颜色较深,也可0侵染果穗引致穗腐并在苞叶上产生大量红褐至黑褐色的小菌核。     

旬河流域灌丛植被垂直分异规律的研究

植被的生趣分异是植被生态学的重要规律之一,根据旬河流域灌丛植被分的特点,首次提出该流域灌丛垂直带的划分：（１）亚高山凉温性常绿、落叶阔叶典型灌从带（２０００－２６００ｍ）;（２）中山温性落叶阔叶典型灌丛、杂木灌丛带     

丝素膜固定β—葡萄糖苷酶性质的研究

采用共价法和包埋法将酶固定在丝素蛋白膜上,方法简便易行,制造的酶膜稳定,机械性能好,固定化酶的最适ｐＨ值由４５偏向中性,热稳定性提高,７０℃保存１小时活力几乎不降低,而溶液酶降低８５％左右,同时ｐＨ值稳定性也有所提高,固定化酶膜可用于果酒增香中     

塔里木河中下游湿地及周边植物群落与环境因子的关系初探

选取塔里木河中下游湿地及周边16个典型植物群落样地调查和环境因子数据,采用主分量分析(PCA)排序技术和回归分析,定量分析湿地及周边植物群落在空间上的分布格局,以及群落结构特征和环境梯度之间的关系.结果表明,影响塔里木河中下游湿地及周边植物群落分布的第1主分量中,土壤水分和盐分影响最大,贡献率为35.70％;在第2主分量中,土壤养分的影响最大,贡献率为25.97％.植物群落分布的生境可分为沼生轻盐中营养生境、湿生中盐中营养生境、中生中盐低营养生境和中旱生重盐低营养生境4种类型.沿不同生境依次分布着沼泽植被、草甸植被、河岸疏林和盐生荒漠 盐化灌丛植被.塔里木河中下游湿地及周边植物群落的生态优势度与土壤水分和盐分复合梯度呈显著的一元线性相关.二元回归分析结果显示,塔里木河中下游湿地及周边土壤水分和盐分复合梯度与多样性指数和生态优势度二元指标呈极显著相关.